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精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响
目的 通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响. 方法 (1)精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验(不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组);(2)上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;(3)冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;(4)冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0.1 ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性.结果 (1)冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[(25.6±7.3)％]显著高于冻存7d者[(22.4±7.4)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[(20.6±7.3)％](P＜0.05);冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[(25.9±7.2)％vs.(23.6±7.8)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液(P＜0.05);而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异(P＞0.05).(2)新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的(20.6±7.3)％降为(6.4±2.5)％(P＜0.05);冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为(9.38±2.8)％ vs.(23.6±7.8)％和(9.7±2.6)％ vs.(25.9±7.2)％](P＜0.05). 结论 冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响.不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异.不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子.
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海藻糖和蛋黄在人类精子冻于保存中的保护作用
人类精子冻干保存中损伤除了来自环境溶液对精子生理活性的损伤外,还会来自于冷冻和干燥过程.目前精子冻干保存中保护剂选取基本上都从生理化学角度考虑,目的为抑制精子内酶活性,没有考虑对冷冻和干燥损伤的抑制.大量文献表明蛋黄能减小冷冻对精子的损伤,而二糖(特别是海藻糖)在细胞干燥中具有特殊保护作用.本研究在前人一般使用的精子冻干保护剂中加入海藻糖,或同时加入海藻糖和蛋黄,通过伊红Y染色、低渗膨胀和电镜显微观测实验,比较不同组成的保护剂对精子结构和膜的保护作用.结果 表明,通过加入海藻糖修正的保护剂能提高对精子结构的保护效果,当同时加入海藻糖和蛋黄时效果更好.
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活性氧簇与男性不育症关系的研究进展
人类浆液中存在着两种产生活性氧簇(ROS)的来源:精子和白细胞.正常环境下ROS和抗氧化剂处于平衡状态,然而,一些内在或者外在的因素刺激ROS产物增加或者抗氧化剂的保护作用降低打破了这种平衡,这种状态叫氧化应激.这种不平衡造成了精子的损害、畸形,以致引起男性的不育.现就ROS产物的病理生理机制及与男性生殖系统间的关系予以综述.
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人类精子核成熟度检测及其临床意义
人类精子的核成熟是精子结构功能成熟的关键环节,对于维持遗传物质的完整性、保证父方遗传信息的正确传递,具有重要的意义.精子核成熟不良,可能对精子功能和体内外受精结局造成不良影响.近年来出现了多种技术检测人类精子核成熟度,如精子核蛋白提取电泳、苯胺蓝染色等.检测精子核成熟度有助于男性不育发病机制的研究,并可能为男性不育的临床诊断和治疗提供新的思路.
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优选和冻融对精子顶体反应及顶体反应释放的顶体酶活性影响
目的:研究优选和冻融对人精子顶体反应(acrosome reaction,AR)和AR释放的顶体酶活性影响.方法:10例健康生育男子精液,用Percoll密度梯度分离法和上游法优选精子;用3种冷冻保护剂进行冷冻;用孕酮诱导AR;采用FITC-PSA荧光染色法分析AR;采用分光光度比色法测定顶体酶活性.结果:Percoll法和上游法优选后,顶体反应率和AR释放的顶体酶活性均较优选前显著升高(P＜0.05),但Percoll法和上游法优选组间比较差异不显著(P＞0.05).精子冻融后甘油组和GYC组顶体反应率和AR释放的顶体酶活性均下降,与冷冻前比较差异均有显著性(P＜0.01),GYCG组与冻融前组比较,差异不显著(P＞0.05).结论:优选后顶体反应率及AR释放的顶体酶活性增加,GYCG对精子顶体反应和AR释放的顶体酶活性有保护作用.
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乙肝病毒基因在地鼠卵母细胞与携带乙肝病毒基因组的人类精子受精后早期胚胎细胞中的表达
目的:使去透明带金黄地鼠的卵母细胞与携带乙肝病毒DNA(HBV DNA)的人类精子体外受精,检测乙肝病毒基因(S基因与C基因)在早期胚胎细胞中的复制与表达.方法:通过异种体外受精,由人类精子将乙肝病毒基因导入去透明带地鼠卵母细胞中;用聚合酶链反应(PCR)检测单细胞和2-细胞胚胎细胞的基因组中是否有S基因和前C/C基因;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)研究上述基因是否在胚胎细胞中表达.以全长HBV DNA制备探针,与胚胎细胞制片进行荧光原位杂交(FISH),观察胚胎细胞基因组中是否有HBV DNA整合.结果:PCR、RT-PCR和FISH分析均在待测样本中获得阳性结果.结论:以精子为载体、携带到卵内的HBV基因能够在早期胚胎细胞中复制和表达,该结果为HBV有可能通过男性生殖细胞垂直传递给子代提供了直接证据.
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人类精子中电压依赖性钙通道的研究进展
钙离子作为生物信使广泛存在于组织细胞中,影响细胞的许多功能.目前有关生殖细胞中和钙离子密切相关的钙离子通道的研究报告逐渐增多,现将有关人类精子中的电压依赖性钙通道的研究进展综述如下.
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人类精子冷冻损伤及保护的研究进展
精子的冷冻保存已广泛应用于人类辅助生殖技术,然而,精子在超低温状态下会经历结构、功能的损伤,这种损伤是否会影响到辅助生殖技术的成功率,目前仍然没有一致的共识,世界各地的研究机构一直在致力于精子损伤机制的研究以及冷冻保护的探索,本文就精子冷冻损伤的不同类型以及功能的改变机制进行探讨,结合当前保护研究的新进展作一综述.
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人类精子RNA的重要性
我们对人类精子分子组成复杂性的理解仍处于初步阶段.这包括随时准备与卵细胞结合的精子基因组及其RNA具有独特的包装和结构.两者凸现了我们对遗传学因素如何有助于一个健康的孩子的出生理解不足.近从人类精液中分离出的RNA可被用来显示转录的男性配子的轮廓.完全可以预期,具有正常生育能力的精子基因指纹特征能被鉴定,由此轮廓产生的背离能被检测.
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妇科门诊女性宫颈分泌物支原体检测及药敏试验
解脲脲原体(Uu)是人类生殖道常见的微生物之一,在特定的环境下可致病,主要传播途径为性接触和母婴传播.Uu有黏附精子作用,阻碍精子和卵子结合,且与人类精子有共同抗原,可对精子造成免疫损伤.
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人精子表面乳铁蛋白受体的分子特性
人类精子表面存在附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)、Clusterin和乳铁蛋白(Lf)蛋白质复合体~([1]),调控着精液的凝固和液化过程,人类精浆中以及精子表面均含有丰富的乳铁蛋白(Lf).本研究旨在观察人类精子膜表面是否存在与之相结合的受体(LfR).
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人类精子糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白研究进展
在大多数真核生物中,糖基化磷脂酰肌醇(GPI)锚作为一种翻译后修饰定位蛋白质的C端而定位于细胞膜的外叶.GPI锚的结构上主要由三部分组成:磷酸乙醇胺连接部分、聚糖部分和磷脂尾部分.因GPI锚定蛋白结构和功能的多样性而在众多生物学过程中起到重要作用[1].在人精子膜同样存在GPI锚定蛋白,这些蛋白在精子成熟、精子储存、精子免疫防御、精卵识别和精卵融合等多方面具有重要意义.本文概述了近来人类精子GPI锚定蛋白研究进展和GPI锚定蛋白批量化在线预测软件,以期为男性节育、避孕以及生殖药物研发提供新的靶点和思路.
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低温状态下人乳对人类精子的保护作用
本课题研究人乳对人类精子低温状态(0℃-4℃)下的保护作用.方法 取正常人精液30份,每份精液平均分为2个标本,成为实验组(A组)、对照组(B组).A组中加入等量人乳,对照组加入等量冷冻保护液,将两组同时慢速降温(0.8℃-1℃/分钟),终降至0℃-4℃保存2天.结果 实验组精子保存24小时,活率、活力分别由(77.7±4.3)%,(70±3.5)%降至(66.5±3.8)%,(62.3±3.4)%.而对照组精子已全部死亡.结论 人乳对人类精子低温(0℃-4℃)下有明显保护作用.
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人乳在人类精子低温状态下的保护作用
目的 研究人乳对人类精子低温状态(O～4℃)下的保护作用.方法 取正常人精液30份,每份精液平均分为2个标本,分为实验组(A组)、对照组(B组).A组中加入等量人乳.B组加入等量冷冻保护液,将两组同时慢速降温(0.8～1℃/min).终降至0-4℃保存2d.结果 实验组精子保存24h,活率、活力分别由(77.7±4.3)%、(70±3.5)%降至(66.5±3.8)%、(62.3±3.4)%.而对照组精子已全部失活.结论 人乳对人类精子低温(0～4℃)下有明显保护作用.
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链状酰胺类化合物B07的体外杀精效果及其对精子质膜的影响
目的:研究一种链状酰胺类化合物(B07)的体外杀精作用及其对精子质膜的影响.方法:上游收集高活力人类精子分别与0 μg/ml(对照组),5～640 μg/ml B07作用30 min,随后用计算机辅助精液分析仪分析记录精子的活率及运动参数;用160 μg/ml B07与精子作用,记录5 min、30 min、60 min和120 min时精子活动率;处理后的精子一部分经SYBR-14/PI双染后用荧光显微镜观察,另一部分通过电子显微镜来观察质膜的变化情况;并以壬苯醇醚(N9)作为阳性对照.结果:随着B07浓度的升高,精子活率和活力呈下降趋势,低有效浓度(MEC)为640 μg/ml;荧光显微镜下经B07处理的精子呈橙色,而N9处理的精子呈红色;电子显微镜显示B07组精子头部肿胀起泡,尾部针孔样损伤,N9组精子呈溶解性改变.结论:B07具有体外杀精作用,且该作用有时间和浓度依赖性,且其对精子质膜的影响小于N9.
关键词： 链状酰胺类化合物B07 人类精子 杀精 质膜 -
人类精子核内胞质残留对受精后生殖活动的可能负效应
人类精子核内含有残留胞质(INCR).INCR起源于精子细胞变态过程的早期,是核内含有细胞质的一种隐匿性核异常类型.INCR是人类精子核内多见的超微现象,存在于精子核空泡内,具有大小、形状、数量、成分、位置和分布的多性样.畸形精子症的精子标本中,INCR发生率与精子头畸形率呈正相关.INCR可能通过多重机制对受精后的父本基因组活动和合子、早期胚胎发育产生负效应.应重视INCR可能对受精后生殖活动的影响,围绕INCR开展相关的实验与临床研究.
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加强人类精子冻干保存的研究
人类精子冻干保存,核心是精子核完整性的保存.冻干保存利用真空冷冻干燥,使精子处于失水干燥状态,导致精子的生化、代谢活动完全中止.冻干保存能够避免液氮冷冻保存的诸多不足,已取得的研究进展显示了精子冻干保存雄性生育力是可行的,将会是未来人类精子的一种保存形式.当前应加强人类精子冻干保存的各方面研究,重点解决冻干精子的高生殖安全性、冻干方法的高保存效率、精子冻干损伤的机制、冻干精子的评价指标和长期储存风险等关键问题,使人类精子冻干保存早日成为男性生育力保存的安全、高效、实用方法.
