含雌激素的冷冻保护剂对少弱精子玻璃化冻存效果的研究

目的 比较添加雌激素的冷冻保护剂对少弱精子的冻存效果.方法 将40例少弱精子患者的精液标本分别采用甘油、甘油-卵黄-柠檬酸钠(GYC)、甘油+雌激素(甘油+ E2)、甘油-卵黄-柠檬酸钠+雌激素(GYC+ E2)四种冷冻保护剂(CPM)冷冻,比较冻融前后精子活率、活力(a+b级)、正常精子形态百分率、精尾低渗肿胀率(HOSR).结果 四种CPM对少弱精子的冷冻效果存在差别,精子活率、活力、正常形态百分率、精子尾部低渗肿胀率在冻后都有不同程度下降(P<0.05),但甘油+E2、GYC+ E2 能显著提高冻存后精子的活率及活力(a+b级).结论玻璃化冻存对精子存在损伤,含雌激素的冷冻保护剂可以提高低质量精液的冻存效果.

基于隔热薄层的高安全性冷热治疗探针

冷热刀系统既可对肿瘤组织实施快速降温冻结又可对其进行高温热疗,是新一代综合医疗设备.其治疗过程是在医学影像引导下将探针经皮插入至深部靶点部位,通过探针内冷媒和热媒的交替输送来确保探针工作段的冷冻及加热治疗,因此减少探针非工作段的漏冷或漏热、避免对沿途正常组织造成损害至关重要.本文针对冷热刀系统治疗模式的特殊要求,在探针非工作段引入一层具有良好生物兼容性及绝热性的薄壁管,以有效减少非正常冷量或热量的泄漏,并开展了相应的实验验证.同时,基于该方式建立了传热数学模型并推导出生物组织在探针作用下冷冻阶段的稳态温度场解析解,开展了相应的参数化研究,为今后进一步合理优化探针及套管提供依据.理论及试验研究均表明该方法能够简单有效地解决治疗探针的冷热保护问题,可望为今后实施安全高效的肿瘤冷热治疗创造条件.

冷冻疗法治疗沙眼技术

沙眼是由沙眼衣原体引起,其衣原体对温度较敏感,冷冻所用的液氮可迅速直接杀死衣原体.以往的研究还证实,冷冻可破坏局部组织形成冰晶,使血液、淋巴循环中断,发生细胞膜和细胞核膜的破裂,引起细胞内电解质及酸碱度改变,使脂肪蛋白成分变性.由于冷冻损伤使细胞释放抗原,激发体内抗体形成,故临床上冷冻不仅用于沙眼,还应用于其他病变,如皮肤病、黑色素痣等,也有较好疗效.在此基础上,我们根据辨证分析的原则规范技术操作,严格按疗程实施诊疗方案,通过冷冻疗法治疗沙眼,取得满意疗效.

人多能干细胞的冷冻与保存

背景:人多能干细胞的出现与发展是近年来生物医学研究领域的重大突破.但其在基础/临床研究中的广泛应用还有诸多限制,建立安全有效标准化的冷冻保存方案是人多能干细胞广泛应用面临的重大挑战.目的:回顾人多能干细胞冷冻领域的研究进展,探索造成冷冻损伤的原因和机制及改进方式,致力于促进新的更有效的冷冻方案形成.方法:以“人多能干细胞、人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、玻璃化、程序化冷冻、慢冻法、冷冻保存”为中文检索词,以“human pluripotent stem cells,human embryonic stem cell,humanintroduced pluripotent stem cell,vitrification,programmed cryopreservation,slow-freezing,cryopreservation”为英文检索词,应用计算机检索中国知网全文数据库、万方全文数据库、维普(VlP)期刊全文数据库、PubMed数据库有关人多能干细胞冷冻保存技术的文献,排除与研究目的无关及重复文献,保留58篇文献进一步总结分析.结果与结论:了解人多能干细胞冷冻过程中造成冷冻损伤的原因和机制,是寻找高效的冻存方案的关键.需要更清晰的了解冷冻过程中损伤的原理,改进和创新低温生物技术来避免各种冷冻损伤的发生并致力于探讨可重复的,高效的,符合GMP要求的,能大规模冻人多能干细胞的方案.

人卵母细胞冷冻保存的影响因素

随着体外受精-胚胎移植(In vitro fertilization-embryo transplantation, IVF-ET)和冷冻技术的发展,人们认识到了保存卵母细胞的重要性.冷冻保存人卵母细胞,可以治疗卵巢发育不良和卵巢早衰等原发性不育,为接受放疗和化疗的患者提供以后妊娠的机会,IVF-ET剩余的卵可以保存以备以后的周期使用,辅助生殖技术的效率也可得到提高.卵母细胞的冷冻保存还能减少由胚胎冷冻引起的道德和法律问题.

人类精子冷冻损伤及保护的研究进展

精子的冷冻保存已广泛应用于人类辅助生殖技术,然而,精子在超低温状态下会经历结构、功能的损伤,这种损伤是否会影响到辅助生殖技术的成功率,目前仍然没有一致的共识,世界各地的研究机构一直在致力于精子损伤机制的研究以及冷冻保护的探索,本文就精子冷冻损伤的不同类型以及功能的改变机制进行探讨,结合当前保护研究的新进展作一综述.

精子冻融技术及其研究进展

精子冻融是辅助生殖技术的基础,冻融可能造成精子结构损伤和活力功能丧失,因此优化冻融方法十分必要.提高冷冻前精液质量、进行精子优选、添加合适的冷冻保护剂、选择适宜的冷冻复苏方法等均可有效地减少冻融损伤,有利于保存男性生育力.本文对精子冻融的基本原理、方法改良、针对特殊质量精液的冷冻方法及冷冻后精子质量评估进行了综述.

程序性冷冻仪和液氮冻融技术导致细胞冷冻损伤的评估

基于促甲状腺功能的姜黄素延长低温冷冻小鼠生存时间的作用机制研究

目的 低温冷冻会对恒温动物生理系统造成严重损害,寻找冻害防护的药物成为研究热点.方法 该文以姜黄素(curcumin,Cur)对小鼠冷冻损害保护作用与甲状腺功能评价为研究内容.定量分析小鼠(-20±1)℃冷冻暴露生存时间、代谢指标的变化;ELISA试剂盒检测血清游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)含量;HE染色观察甲状腺组织形态;实时荧光定量PCR法检测甲状腺功能相关基因的表达.结果 姜黄素(12.5~50 mg·kg-1)腹腔注射给药能明显延长冷冻暴露小鼠的生存时间;甲状腺HE形态学显示姜黄素逆转了冷冻导致的滤泡破损;姜黄素组代谢指标改善明显,血清FT3、FT4激素含量明显增高,甲状腺功能相关基因甲状腺细胞钠碘转运体(sodium iodide symporter,Nis)、甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)、甲状腺过氧化物酶(thyroid peroxidase,Tpo)mRNA的表达明显上调,促甲状腺激素受体(thyroid-stimulating hormone receptor,Tshr)mRNA的表达下调,这些促甲状腺作用与左旋甲状腺素钠(sodium levothyroxine,L-T4)呈协同作用,且可被丙硫氧嘧啶(propylthiouracil,PTU)所抑制.结论 姜黄素延长小鼠生存的低温冷冻保护作用与其促进甲状腺功能密切相关.

选择性培养基对-20℃冷冻损伤致泻大肠埃希菌生长的影响

目的:分析常规检测中使用的伊红美蓝琼脂(EMB)、乳糖胆盐发酵培养基(LBB)、麦康凯琼脂(MCA)、肠道菌增菌肉汤(EEB)对-20℃冷冻损伤致泻大肠埃希菌生长的影响.方法:选用4株致泻大肠埃希菌作为研究菌株,-20℃冷冻贮存不同时间后,分析EMB、LBB、MCA、EEB对其生长的影响.结果:1.除EMB培养基外,LBB、MCA、EEB培养基可抑制-20℃冷冻损伤致泻大肠埃希菌的生长,MCA、EEB的抑制作用大于LBB的抑制作用;2.不同的菌株对冷冻的敏感性不同.在不同的冷冻时间,菌株的死亡率、损伤率不同.结论:常规检测中使用的LBB、MCA、EEB可抑制-20℃冷冻损伤致泻大肠埃希菌的生长.

冷冻和解冻对大肠埃希菌超微结构的影响

目的:研究冷冻解冻对大肠埃希菌超微结构的损伤和修复.方法:将正常的和经冷冻解冻损伤和修复后的大肠埃希菌作负染色和超薄切片,在电子显微镜下观察其超微结构的变化.结果:(1)冷冻解冻破坏大肠埃希菌的超微结构,细胞壁、细胞膜损伤,胞内有空泡形成；(2)修复后的大肠埃希菌,其超微结构基本恢复正常；(3)冰晶的形成、胞质浓缩产生的盐害是冷冻损伤的主要机理.结论:冷冻解冻可破坏大肠埃希菌的超微结构.

-20℃冷冻损伤大肠杆菌修复的研究

目的:建立 -20℃冷冻损伤大肠杆菌的佳修复方法.方法:研究不同介质、温度、时间对 -20℃冷冻损伤大肠杆菌的修复作用,筛选佳介质、温度、时间,以此建立修复法.结果:在营养肉汤(NB)中 37℃培养 2 h 可大程度修复 -20℃冷冻损伤大肠杆菌.结论:-20℃冷冻大肠杆菌的损伤是可以修复的,在NB中 37℃培养 2 h 是其佳修复条件.

乙酰左旋肉碱对人类精子冷冻前后顶体完整性及超微结构的保护作用探讨

目的 研究乙酰左旋肉碱对人精子冷冻前后顶体完整性及超微结构的保护作用.方法 将18例患者的精液标本液化及PureSperm梯度离心处理后分为2组,分别为A组(对照)和B组(7.5 mmol/L乙酰左旋肉碱),液氮中冷冻2周,比较冻融前后各组精子存活率、 活力、 头部和尾部超微结构损伤比例和顶体完整性.结果 精子冷冻后存活率和活力均较冷冻前明显下降(P<0.05),B组精子解冻后存活率和活力明显高于组A(P<0.05).冷冻后精子头部和尾部损伤比例均较冷冻前明显增加(P<0.05),而B组精子解冻后头部和尾部损伤比例均较A组明显下降(P<0.05).精子解冻后顶体完整性较冷冻前明显下降(P<0.05),B组精子解冻后精子顶体完整性较A组明显提高(P<0.05).结论 冷冻过程对人精子产生损伤,冷冻保护剂中添加7.5 mmol/L乙酰左旋肉碱可以提高精子解冻后顶体完整性,减轻冷冻损伤对于精子头尾超微结构的损伤,起到冷冻保护作用.

冷冻保存对软骨细胞活性及超微结构的影响

目的观察梯度降温冷冻保存方法对关节软骨细胞存活率、代谢活性及软骨基质的影响.方法采用梯度降温技术对兔关节软骨进行低温冷冻保存处理,通过荧光染色、35SO4摄入率及电镜技术了解冻存后软骨细胞的存活率、代谢活性及软骨基质的冷冻损伤.结果采用梯度降温法的软骨细胞存活性率可以达到60%;冷冻保存对软骨细胞的代谢活性有一定的影响,但与对照组的差异无显著性(P>0.05);软骨基质也存在冷冻损伤,表现为基质的微小断裂.结论关节软骨的冷冻损伤不仅表现为软骨细胞活性降低,还存在软骨基质断裂.

乙酰左旋肉碱对人精子冷冻过程中氧化损伤的作用

目的:比较添加乙酰左旋肉碱的冷冻保护剂对人精子的冻存效果.方法:将30例患者的精液标本(15例正常精子与15例弱精子)液化,并PureSperm梯度离心处理后分为8组,分别为对照组(A1/A2组,仅冷冻保护剂),B1/B2组(2.5 mmol/L乙酰左旋肉碱),C1/C2组(7.5 mmol/L乙酰左旋肉碱),D1/D2组(15 mmol/L乙酰左旋肉碱),液氮中冷冻2周,比较冻融前后各组精子存活率、活力、DNA完整性和活性氧(ROS)水平.结果:无论是正常精子组或弱精子组,精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性较冷冻前下降,ROS水平升高.A1/A2组与B1/B2组精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性和ROS水平比较无差异.C1/C2组和D1/D2组精子解冻后的活力、存活率、DNA完整性和ROS水平较A组明显升高,但C1/C2组和D1/D2组各项指标相比无差异.结论:玻璃化冻存对精子存在损伤,含7.5 mmol/L乙酰左旋肉碱的冷冻保护剂可以提高人类精液的冻存效果.

选择性培养基对-20℃冷冻损伤沙门氏菌生长的影响

目的:分析常规检测中使用的氯化镁孔雀绿肉汤(MM)、亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)、四硫磺酸盐煌绿增菌液(TTB)对-20℃冷冻损伤沙门氏菌生长的抑制作用.方法:选用3株沙门氏菌作为研究茵株,-20℃冷冻贮存不同时间后,分析MM、SC、TTB对其生长的抑制作用.结果:1.MM、SC、TTB培养基可抑制-20℃冷冻损伤沙门氏菌的生长,MM、SC的抑制作用大于TBB的抑制作用;2.不同的菌株对冷冻的敏感性不同;3.在不同的冷冻时间,菌株的死亡率、损伤率不同.结论:常规检测中使用的MM、SC、TTB可抑制-20℃冷冻损伤沙门氏菌的生长.

采用小鼠模型探讨行囊胚活检后胚胎的冷冻时机

[目的]探讨行囊胚活检后,活检胚胎佳的冷冻时机.[方法]258枚小鼠优质囊胚进行囊胚活检,分别在活检后0 h(n=43),0.5 h(n=39),1 h(n=50),2 h(n=49)进行玻璃化冷冻,仅行活检的新鲜囊胚(n=48)以及冷冻的未活检囊胚(n=29)分别作为对照组,观察各组的复苏率、重新扩张率和孵出率,并计数囊胚细胞总数、凋亡细胞数、囊胚DNA完整率和活检部位凋亡细胞数.[结果]各组的存活率、重新扩张率和孵出率无差别;平均囊胚细胞总数、凋亡细胞数、囊胚DNA完整率和活检部位凋亡细胞数差别无统计学意义.[结论]小鼠囊胚活检后不同时间点冷冻效果未观察到差异,可根据工作需要灵活安排活检囊胚的冷冻时间.

兔面神经冷冻损伤与其神经传导功能恢复的研究

[目的]通过对兔面神经喷灌式液氮冷冻后进行电生理研究,探讨面神经冷冻损伤后功能的恢复情况.[方法]新西兰大白兔36只,按观察时限不同随机分为术后即刻、1周、2周、4周、8周及12周组.以液氮喷灌冷冻右侧面神经,而以左侧面神经为正常对照组.到观察时限进行两侧面神经电生理检测,对电生理检测结果进行配对t检验.[结果]即刻、1周、2周组刺激右侧面神经均未诱导出口轮匝肌复合动作电位.4周组、8周组、12周组:大波幅及传导速度随观察时间的延长,其恢复逐渐增加,阈强度及潜伏期,随观察时间延长逐渐降低,但至12周后大波幅及传导速度仍与正常组比较有统计学差异(P＜0.05).[结论]面神经在液氮冷冻损伤后,早期功能丧失,随着时间的延长,能再生而恢复功能.

冷冻损伤大肠菌群在乳糖胆盐发酵培养基生长状况

目的 研究经-20℃冷冻损伤的大肠菌群在乳糖胆盐发酵培养基上的生长状况.方法 选用大肠埃希氏菌、阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、产气克雷伯氏菌等4株大肠菌群菌株为研究菌株,经-20℃冷冻贮存不同时间后,分析在乳糖胆盐发酵培养基的生长.结果 -20℃冷冻损伤大肠埃希氏菌、阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、产气克雷伯氏在菌乳糖胆盐发酵培养基生长抑制;大肠埃希氏菌、弗劳地枸橼酸杆菌、阴沟肠杆菌的损伤率大于产气克雷伯氏菌的损伤率,冷冻1d后,其损伤率高达70%以上;阴沟肠杆菌、产气克雷伯氏菌的死亡率大于大肠埃希氏菌、弗劳地枸橼酸杆菌,冷冻1d后,其死亡率均高达80%以上. 结论-20℃冷冻损伤大肠菌群在常规检测中使用的乳糖胆盐发酵培养基生长抑制,提示应探索有效的检测方法,以修复冷冻损伤大肠菌群.

冷冻解冻、修复对金黄色葡萄球菌超微结构的影响

目的:研究冷冻解冻、修复对金黄色葡萄球菌超微结构的影响,探讨冷冻损伤机理.方法:将正常未损伤、冷冻解冻、修复后金黄色葡萄球菌作负染、超薄切片,电子显微镜观察其超微结构的变化.结果:冷冻解冻后金黄色葡萄球菌的超微结构遭到破坏,胞内有空泡形成;金黄色葡萄球菌修复后,其超微结构基本恢复正常.结论:冷冻解冻可造成金黄色葡萄球菌超微结构的破坏,细胞膜损伤;金黄色葡萄球菌修复后,其超微结构可基本恢复正常;冰晶的形成、胞质浓缩产生的盐害是冷冻损伤的机理.