小鼠慢性连续取卵及孤雌激活后发育

小鼠是生命科学研究中为重要的实验动物之一.许多模型首先在小鼠中建立或只在小鼠中获得成功.例如胚胎干细胞系的建立[1,2],生长素转基因模型[3]以及体细胞克隆治疗模型[4].通常情况下,经过超促排卵处理或未经处理的雌鼠仅在处死后取1次卵.至今还未见到有关在小鼠活体取卵的报道.本研究旨在建立一种可重复从同一个体小鼠收集卵母细胞或受精卵的方法.

TNT对小鼠活体精原细胞SCE频率的影响

近年来国内外学者对TNT致突变性进行了较为广泛的研究.本实验采用姊妹染色单体交换(SCE)检测方法,观察了TNT对小鼠活体精原细胞SCE频率的影响,从而为TNT致畸和致癌等远期效应的深入研究提供了一定的实验依据.1 材料与方法1.1 动物第四军医大学实验动物研究中心提供,20～25 g健康雄性昆明小鼠.1.2 试剂 TNT由某兵工厂提供,研成粉末与少量精制植物油混匀,配制不同剂量的植物油溶液或过饱和溶液,供小鼠灌胃染毒用;5-溴脱氧尿苷(BrdU),Sigma公司产品;767针剂型活性炭,上海活性炭厂产品;质量浓度为0.04%的秋水仙素;20 mg/ml环磷酰胺(CP)储备液;0.3 mol/L氯化钠(NaCl)溶液与0.03 mol/L柠檬酸钠(Na\-3C\-6H\-5O\-7)溶液的等量混合液(2×SSC);pH6.8的磷酸缓冲液及质量浓度为2.5%的Geimsa染液.

莲必治注射液SD大鼠肾毒性病理学研究/莲必治注射液昆明小鼠肾毒性病理学研究/幼年大鼠口服盐酸安妥沙星和左氧氟沙星对膝关节软骨毒性的比较

胸腺肽α1体内抗流感病毒作用的实验研究

材料与方法实验材料:①实验药物:胸腺肽α1(Tα1),受试药物,1.5mg/支,试验时用生理盐水分别配成0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.08mg/ml低、中、高三个浓度,分装三个青霉素小瓶中备用.病毒唑(利巴韦林注射液),阳性对照药物,含量为100mg/ml.试验时用生理盐水配成13mg/ml浓度的药液.病毒株为流感病毒鼠肺适应株A/FM/1/47(H1N1),本实验室保存.在MDCK细胞中的组织半数感染量(TCID50)为10-4.细胞为狗肾细胞(MDCK),本实验室保存.②实验动物:健康昆明小鼠,雌雄各半,3～4周龄,体重18～20g,雌雄分别分组,由实验动物中心提供.

苏复宁洗液对昆明小鼠移植性肝癌的抑瘤作用

目的 观察苏复宁洗液(SFN)对昆明小鼠移植性肝癌的抑瘤作用.方法 建立肝癌H22荷瘤小鼠模型,将100只雄性昆明小鼠随机分为两个大组,每组50只,一组为抑瘤率组,另一组为生命延长率组.以上两组均分为对照组、丝裂霉素组、SFN高、中、低剂量组5个实验组.抑瘤率组于给药8d后处死动物,测定用药前后体重变化、计算抑瘤率(IR,%);生命延长率组观察各组动物平均存活时间,计算生命延长率(%).结果 丝裂霉素组抑瘤率为48.57%,SFN高、中、低3个剂量组抑瘤率分别为36.00%、25.71%、22.86%,瘤重与对照组比较,丝裂霉素组和SFN高剂量组差异有统计学意义(P<0.01);对小鼠存活时间的影响与对照组比较,SFN高、中、低不同剂量组使小鼠生命延长(P<0.05),平均延长率分别为79.1%、142.3%、120.5%,丝裂霉素生命延长率为134.9%.结论 对昆明小鼠移植性肝癌,丝裂霉素组、SFN 高剂量组均有明显的抑制作用,SFN中、低剂量组有一定的抑制作用; SFN中剂量组生命延长率优于丝裂霉素和SFN高剂量和低剂量组.

关节腔内注射不同浓度木瓜蛋白酶建立小鼠膝骨关节炎模型的研究

目的：探讨关节腔内注射不同浓度木瓜蛋白酶建立小鼠膝骨关节炎模型的可行性。方法健康10周龄雄性昆明小鼠80只，体重（45±3） g，随机分为2％木瓜蛋白酶组、4％木瓜蛋白酶组、8％木瓜蛋白酶组和对照组。实验第1、3、5天分组行右膝关节腔内注射2％、4％、8％（ w／v）木瓜蛋白酶和0．3mol／LL－半胱氨酸的混合溶液0．25 mL／kg或等量生理盐水。记录小鼠一般情况及右膝关节宽度。所有小鼠首次注射1周后处死，取关节行常规HE染色及甲苯胺蓝染色，镜下观察并评分。结果造模组右膝关节出现肿胀、功能障碍；右膝关节软骨染色变浅、软骨层变薄、基质分解破坏等病理学改变，其严重程度与木瓜蛋白酶浓度呈正相关；对照组无上述改变。结论膝关节腔内注射2％、4％、8％（ w／v）木瓜蛋白酶和0．3mol／L L－半胱氨酸的混合溶液0．25 mL／kg可建立小鼠不同严重程度的膝骨关节炎，周期短、成功率高。

成年小鼠肺成纤维细胞分离纯化及原代培养

成年小鼠肺成纤维细胞的原代培养是获得肺组织后在体外进行的培养,能反映体内的生长特性,对研究细胞的生长分化及其生理病理变化的机制具有极其重要的价值,具有细胞系所无法比拟的优点.本文主要探讨合理的成年小鼠肺成纤维细胞的分离纯化培养方法及其生长曲线特点.1材料与方法1.1试剂:高糖DMEM(Gibco公司),胎牛血清(杭州天杭公司),胰蛋白酶(Sigma公司),波形蛋白vimentin、α-平滑肌肌动蛋白α-SMA抗体和免疫组化SABC试剂盒(武汉博士德公司).1.2实验动物:清洁级雄性成年昆明小鼠(25±5)g[华中科技大学同济医学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2008-0005].

姜黄素抗小鼠原发性肝泡球蚴病的实验研究

目的 观察姜黄素对小鼠原发性肝泡球蚴病的影响. 方法 昆明小鼠肝脏感染泡球蚴60 d后随机分为3组,即模型对照组,姜黄素溶剂组,姜黄素组(200 mg/kg·d),另设空白对照组.用相应药物治疗60 d,检测各组小鼠泡球蚴囊湿重,计算囊湿重抑制率,并进行HE染色观察病理组织学改变. 结果 药物治疗60 d后姜黄素组、模型对照组及姜黄素溶剂组小鼠囊湿重分别为(0.2638±0.092)g、(0.4890±0.084)g和(0.4558±0.098)g,姜黄素组与模型对照组对比差异有统计学意义(P＜0.05),姜黄素组囊抑制率为46.05％;姜黄素溶剂组与模型对照组的囊湿重比较差异无统计学意义(P＞0.05).肝泡球蚴组织发生Ⅰ(变性)、Ⅱ(坏死)级病理变化的小鼠占比分别为姜黄素组62.50％,模型对照组为5.90％,姜黄素溶剂组为0.00％,姜黄素组与模型对照组对比差异有统计学意义(P＜0.05);姜黄素溶剂组与模型对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 姜黄素能起到一定的抗小鼠原发性肝泡球蚴病的作用.

实验感染昆明鼠粪便微小隐孢子虫18SrRNA基因检测

目的探讨隐孢子虫感染的基因检测方法. 方法用分离自人和牛的微小隐孢子虫各1株分别感染2组昆明小鼠,于接种后第6 d、10 d和14 d分别收集每只动物粪便,用显微镜检查,再用Sheather's蔗糖梯度密度离心法纯化卵囊,提取总DNA,对每份DNA样本做100～10-3稀释,然后用PCR对微小隐孢子虫18SrRNA基因进行特异性扩增.结果接受具有活力的1×104个卵囊/只的36只小鼠,均获得感染;阳性样本被扩增出1条500 bp的片段.隐孢子虫感染小鼠粪便样本各稀释度的PCR检测实验结果表明,PCR检测阳性率随模板DNA样本稀释倍数的增加而增高;小鼠感染后第6 d、10 d和14 d 的100 和10-1两个稀释度的PCR检测阳性率低于镜检结果,而10-2和10-3两个稀释度均高于镜检结果. 结论受染昆明鼠粪便内的微小隐孢子虫可通过扩增其18SrRNA基因检出.

昆明种小鼠胚胎干细胞的分离、培养与鉴定

目的 探讨昆明种小鼠胚胎干细胞的分离、培养和鉴定.方法 收集小鼠14～16 d胚龄的囊胚,以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,形成的胚胎干细胞(ES)细胞样集落,分离隆起生长的胚胎内细胞团并继续培养,观察集落的生长状态,通过碱性磷酸酶染色进行的分析鉴定,并对其体外分化能力进行检测.结果 共培养收集74个昆明小鼠的囊胚,其中有53个囊胚的内细胞团(ICM)离散程度较强;ES细胞集落的特征呈鸟巢状,其细胞圆小,细胞核大,排列紧密,边缘清晰,细胞之间的界限不清楚;碱性磷酸酶(AKP)染色呈阳性,集落呈红棕色或蓝色,成纤维细胞或分化细胞呈淡黄色或无色;体外悬浮培养时,ES细胞集落能够形成简单拟胚体,且Ebs外向性生长,周围分化的细胞形态成多样性.结论 昆明小鼠是我国应用多的实验小鼠,建立昆明小鼠的ES细胞系有利于其转基因动物的获得,能够为我国的科研工作更好地服务.

同种异基因皮肤移植对昆明小鼠荷H22型肝癌细胞生长的影响

目的 观察同种异基因皮肤移植对昆明小鼠肝细胞癌生长及相关免疫指标的影响.方法 采用荷H22型肝癌昆明小鼠为动物模型并分为3组,在皮下接种小鼠H22肝癌细胞悬液后,接受C57/BL6小鼠皮肤移植物的昆明小鼠为实验组,而接受同种同基因移植和不移植组均作为对照组,比较肿瘤的生长情况;同时检测小鼠外周血淋巴细胞亚群和肿瘤组织内细胞的凋亡细胞,比较各组间差异.结果 接受同种异基因皮肤移植的昆明小鼠,肿瘤的生长速度慢于其他2组;接受同种异基因皮肤移植的小鼠瘤组织内凋亡细胞数量高于对照组.结论 同种异基因皮肤移植对小鼠H22肝癌细胞的生长具有抑制作用,这种作用可能通过诱导肝癌细胞凋亡而发挥作用.

柴胡枳实水提取物对胃肠动力作用的影响

目的:探讨柴胡枳实水提物促胃肠动力作用.方法:将昆明小鼠随机分成6组,每组15只,分别为A(蒸馏水)组、B(阿托品)组、D(吗啡)组、F(水提取物)组、C(阿托品+水提取物)、E(吗啡+水提取物)组,A组、B组、D组灌服蒸馏水0.3 mL/d,C组、E组、F组灌服柴胡枳实水提物0.3 mL/d,连续喂养3 d,第4 d灌服上述药物,同时B组、C组腹腔注射阿托品0.0003 g/kg、E组、D组腹腔注射盐酸吗啡0.0003 g/kg,采用葡聚糖蓝2000观察胃内色素残留率及平均小肠推进比.结果:分别比较B组与A组、D组与A组、D组与E组、E组与F组、C组与F组的相对胃内色素残留率及平均小肠推进比均具有显著性差异(123.20±29.26vs100.00±28.28,48.53±8.70 vs 56.02±8.33;126.30±31.86vs100.00±28.28,38.58±5.29vs56.02±8.33;126.30±31.86vs88.56±21.22,38.58±5.29vs44.83±8.13;88.56±21.22vs49.75±17.50,44.83±8.13vs70.84±8.03;102.41±28.72vs49.75±17.50,51.68±8.92 vs70.84±8.03;P＜0.05),而B组与C组相比无显著性差异(123.20±29.26vs102.41±28.72,48.53±8.70vs51.68±8.92,P＞0.05).结论:柴胡枳实水提取物不能拮抗阿托品的作用,能够拮抗吗啡所致的胃肠抑制运动.

四氯化碳/乙醇诱导昆明小鼠产生原发性肝细胞癌模型的建立

肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,建立一种类似人原发性肝癌的小鼠试验模型,有助于了解肝癌的发生发展过程,有助于对肝癌预防、早期诊断和治疗效果观察的研究.本研究在国内外率先成功地建立了四氯化碳(CCl4)/乙醇诱发昆明小鼠肝癌模型的方法.

磁导向下磁性化疗药物对肝、肾及骨髓的影响

目的探讨磁导向下磁性药物载体对肝、肾及骨髓的影响,为恶性脑肿瘤的磁导向化疗提供可靠的依据. 方法昆明小鼠50只,随机分为3组:①磁导向组(n=20),尾静脉注射磁性药物载体混悬液(含甲氨蝶呤 25 mg/kg),在头部一侧置聚焦磁场30 min;②甲氨蝶呤组(n=20),注射甲氨蝶呤 25 mg/kg;③对照组(n=10),注射生理盐水.给药前,给药后24 h,7、14、30、90 d断尾取血检测红细胞、白细胞、血小板、丙氨酸转氨酶、尿素氮. 结果与给药前相比,给药后24 h甲氨蝶呤组RBC显著下降[(9.34±0.36) T/L vs (8.32±0.82) T/L,q=6.263,P＜0.05];给药后14 d RBC下降至低[(5.05±0.81) T/L,q=26.341,P＜0.05];给药后90 d RBC上升至给药前水平[(9.01±0.70) T/L,q=2.026,P＞0.05].磁导向组和对照组给药前后RBC无显著变化(F=0.46,P=0.802;F=0.09,P=0.993).WBC和PLT的变化与RBC相似.与给药前相比,给药后7 d甲氨蝶呤组ALT显著升高[(8.1±0.2) U/L vs (12.3±2.4) U/L,q=12.790, P＜0.05 ],14 d高,30 d下降,但90 d未恢复到给药前水平[(10.0±0.5) U/L,q=5.786,P＜0.05].与给药前相比,磁导向组给药后14 d时ALT显著升高[(8.1±0.4) U/L vs (11.2±0.3) U/L,q=26.050,P＜0.05],90 d下降到给药前水平[(7.9±0.4) U/L,q=0.840,P＞0.05].对照组ALT给药前后无明显差别.与给药前相比,给药后7 d甲氨蝶呤组和磁导向组BUN均升高,与给药前比较相差显著[甲氨蝶呤组:(11.07±0.29) mmol/L vs (16.07±0.54) mmol/L,q=53.169, P＜0.05;磁导向组:(10.89±0.75) mmol/L vs( 12.14±0.61) mmol/L,q=11.164,P＜0.05)],90 d与给药前比仍相差显著[甲氨蝶呤组:(12.85±0.61) mmol/L,q=18.928,P＜0.05;磁导向组:(11.78±0.18) mmol/L,q=7.949,P＜0.05]. 结论磁导向下磁性药物载体定向分布于大脑内靶区,在肝、肾及骨髓的蓄积减少,减轻了对肝、肾及骨髓的损害作用.

小鼠局灶性脑梗死后半暗带的动态变化

脑血流完全阻断后,缺血中心区脑组织往往迅速产生不可逆性损害.缺血周边区,即半暗带,存活有一定的时限性,因此,研究半暗带持续时间就显得非常重要.随着基因治疗的深入研究,尤其转基因动物的使用,小鼠脑缺血模型的研究已成为热点.迄今,对其缺血半暗带的研究鲜见报道.我们选择昆明小鼠为观察对象,建立大脑中动脉栓线模型,应用MRI及TTC染色,观察缺血半暗带的动态变化.

过量维甲酸致小鼠神经管畸形及牛磺酸干预中Pax3的特异时相表达

目的 探讨小鼠胚胎神经管畸形(NTDs)中过量维甲酸(RA)致畸及牛磺酸干预的作用,分析Pax3与NTDs的关系及其特异性时相表达.方法 采用孕鼠服用过量RA及牛磺酸,建立胎鼠NTDs及干预动物模型；用免疫组化及逆转录聚合酶链式反应方法,分析各组胎鼠E9.5、E10.5、E11.5、E12.5中神经管Pax3的表达特异时相性差异.结果 致畸组胎鼠畸形率达到71.6％,而干预组畸形率降至55.3％(P＜0.05),两组死胎或吸收胎率分别为11.4％、9.8％(P＞0.05)；Pax3蛋白质阳性反应主要位于胞核,其在神经嵴表达强,而周围间充质表达弱.且在对照组中表达强于两实验组(P＜0.05),于E10.5 d出现表达高峰；在两实验组中Pax3表达呈现增强趋势,干预组Pax3表达强于致畸组(P ＜0.05)；Pax3基因在两实验组中的表达受抑,与对照组比较明显减弱(P＜0.05),对照组中Pax3基因的表达于E10.5 d出现高峰；在两实验组中Pax3随胚胎发育呈现增强趋势无表达高峰,干预组Pax3表达强于致畸组(P＜0.05).结论 RA致畸及牛磺酸干预在胚胎NTDs发生发展中的作用,与Pax3基因表达的时相差异性有关.

磨牙缺失对昆明小鼠空间学习记忆能力的影响

目的:观察牙齿缺失对昆明小鼠空间学习记忆能力的影响.方法:90只成年雄性昆明小鼠随机分为上颌拔牙组和假手术组、下颌拔牙组和假手术组.术后8w采用Morris水迷宫做行为学测试.结果:拔牙组小鼠4d平均逃避潜伏期(上颌组:38.6±14.6s;下颌组:39.0±14.0s)明显长于假手术组(上颌组:29.0±19.7s;下颌组 29.1±18.6s)(P＜0.01).拔牙组小鼠的第一次穿越平台时间(上颌组:13.6±3.3s;下颌组:13.1±4.3s)明显长于假手术组(上颌组:5.8±3.9s；下颌组:5.9±2.2s)(P＜0.01).结论:磨牙缺失8w后昆明小鼠空间学习记忆能力下降.

骨多肽生长素与珊瑚骨诱导鼠额面骨再生的研究

我们以探讨骨多肽生长素(bone active polypeptide,BAP)和珊瑚骨的应用前景为研究目的. 1. 材料和方法: 体重25 g昆明小鼠48只,雌雄各半. 随机分2组,均在小鼠额面骨制成3 mm ×2 mm×1 mm骨缺损区.实验组置放BAP和珊瑚骨,对照组置放珊瑚骨.

电离辐射对小鼠腹水型S180细胞凋亡及小鼠生长的影响

电离辐射诱导细胞凋亡是目前肿瘤放射生物学研究的热点之一［1］，但辐射诱导细胞凋亡的机理仍不十分清楚。本文作者通过研究S180荷瘤小鼠经电离辐射诱导肿瘤细胞凋亡，探讨电离辐射诱导细胞凋亡与照射剂量、照射方式、抑瘤作用及生存期之间的关系。　　一、材料和方法　　1.材料设备：昆明小鼠(内蒙古大学动物实验中心)，S180细胞(北京肿瘤基础研究所)，直线加速器(北京BG-4），流式细胞仪(美国B-D FACscan)，透视电镜(日本H-700）。　　2.动物模型建立：取7～8　d S180荷瘤鼠腹水液，按1∶4稀释，接种于鼠腹腔，每只0.2 ml，相当于2×106个瘤细胞，制成腹水型荷瘤小鼠。

培养小鼠原始生殖细胞饲养层体系的新方法——Sertoli细胞对小鼠原始生殖细胞营养作用的研究

10～15日龄雄性昆明小鼠(提取SCs)和10日龄胚胎(提取PGCs).将PGCs以同样的浓度分别接种于铺有SCs饲养层和胚胎成纤维细胞饲养层的平皿中.培养至第7天,接种在SCs饲养层的PGCs发育成集落的数量是胚胎成纤维细胞饲养层中PGCs的5倍.PGCs集落体积也略大于胚胎成纤维细胞饲养层中的集落.PGCs集落呈鸟巢状,主要分布于SCs表面,细胞紧密聚集,边界清楚.AKP检测:从生殖嵴分离、提纯的PGCs和培养皿中生长的PGCs集落均呈AKP染色阳性.