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精子冻存技术及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响
目的 通过对冷冻前后及精子处理前后精子DNA完整性的比较,探讨冷冻技术、冷冻时间及上游法精子处理技术对精子DNA完整性的影响. 方法 (1)精液常规检测正常的患者30例,手淫法取精,精液液化混匀后分4份,分别用于精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA完整性、上游法处理精液、以及两组冻存实验(不加保护剂直接冻存的为冻存1组;添加蛋黄葡萄糖保护剂冻存的为冻存2组);(2)上游法处理后的精液一部分用于检测精子动力和形态,一部分用于精子DNA完整性检测;(3)冻存1组分别于冻存第7天和第90天解冻,SCD实验检测精子DNA完整性;(4)冻存2组分别于第7天和第90天解冻,0.1 ml用于精子DNA完整性检测,剩余精液应用上游法处理,检测上游处理前后精子DNA的完整性.结果 (1)冻存1组中,冻存90d后解冻的精子DNA损伤率[(25.6±7.3)％]显著高于冻存7d者[(22.4±7.4)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液的精子DNA损伤率[(20.6±7.3)％](P＜0.05);冻存2组中,冻存90d后精子DNA损伤率显著高于冻存7d者[(25.9±7.2)％vs.(23.6±7.8)％](P＜0.05),且均显著高于新鲜精液(P＜0.05);而冻存7d和90d后,两个冻存组间比较,精子DNA损伤率均无显著差异(P＞0.05).(2)新鲜精液经上游法处理后,精子DNA损伤率由处理前的(20.6±7.3)％降为(6.4±2.5)％(P＜0.05);冻存2组中精液冻存7d和90d后复苏上游法处理后,精子DNA损伤率较未经上游法处理者均显著降低[分别为(9.38±2.8)％ vs.(23.6±7.8)％和(9.7±2.6)％ vs.(25.9±7.2)％](P＜0.05). 结论 冻存对精子DNA有损伤,冻存时间对于精子DNA完整性有影响.不添加保护剂直接冻存和添加保护剂对精子DNA完整性的影响无显著差异.不论是新鲜精液还是冻存复苏精液,上游法处理并不会增加精子DNA的损伤,且有利于筛选出具有更好DNA完整性的精子.
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不明原因复发性流产与精子DNA完整性的相关性研究探讨
目的:分析与探讨不明原因复发性流产与精子DNA完整性的相互关系.方法:精子DNA完整性的检验选用精子染色质扩散实验(sperm chromatin dispersion,SCD),以精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)表示.将符合条件的65例男性患者作为实验组,随机选取配偶有正常妊娠史且无流产史的65例男性患者作为对照组,并分别测定两组男性精液相关参数和精子DFI.结果:实验组与对照组比较,在年龄、禁欲时间、精液量、精子活率、精子密度差异无统计学意义(P＞0.05).实验组的DFI为(40.89±14.50),对照组的DFI为(22.89±6.94),差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:不明原因复发性流产与精子DNA损伤存在一定的关系.
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精子核成熟度与早期不明原因复发性流产的相关性研究
目的:探讨精予核成熟度与早期不明原因复发性流产的相关性.方法:收集配偶具有早期不明原因复发性流产史的患者50例为URM组,正常生育的男性30例为对照组,通过计算机辅助精液分析仪检测精子的浓度和活动力等,精子染色质扩散实验检测精子DNA完整性,苯胺蓝染色法检测精子核蛋白组型转换,分别比较两组精子DNA完整性、精子核蛋白组型转换率和精液参数的差异.结果:URM组与对照组之间精液量(3.23±1.13 vs 3.37±1.23)mL、精子浓度(29.33 ±3.76 vs 31.16 ±4.29)×106/mL的比较差异没有统计学意义(P＞0.05);精子前向运动(35.19 ±7.26 vs 50.12±10.84)％、精子正常形态(2.07±2.94 vs 8.69±4.13)％、精子DNA碎片率(39.28±15.95 vs 23.16±15.17)％及精子核蛋白组型转换率(41.99±8.63 vs 18.81±7.53)％比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论:早期不明原因复发性流产可能与精子核成熟度异常有关,建议RSA患者常规检测夫精精子核成熟度.
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精液处理前后精子DNA碎片的变化及对IVF-ET结局的影响
目的 探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植(In Vitro Fertilization-Embryo Transfer,IVF-ET)结局的影响.方法 收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(SpermChromatin Dispersion,SCD)检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局.根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20％的患者为A组,精子DNA碎片率＜20％的患者为B组.结果 处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率[(3.49±3.38)％ vs (18.69±10.89)％,P＜0.001)];处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P＜0.05)与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P＜0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P＜0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响.
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精子染色质扩散实验检测男性不育患者精子DNA碎片
目的:通过精子染色质扩散(SCD)实验检测精子DNA碎片,探讨男性不育患者精子DNA完整性.方法:改进的SCD实验分析精子DNA碎片,DNA完整的精子产生扩散的大光晕或中光晕,而DNA损伤的精子不产生或产生很小的光晕.少弱精子症患者56例,畸形精子症不育患者31例,对照组32例.结果:对照组、少弱精症组和畸形精子症组大、中光晕精子比率分别平均为(88.0±5.9)%、(73.4±9.6)%和(58.5±11.2)%,精子DNA碎片比率分别平均为(12.0±5.2)%、(26.6±9.7)%和(41.5±12.3)%,少弱精症组和畸形精子症组与对照组比较有统计学意义(DNA完整的精子比率显著低于对照组,P<0.001,精子DNA碎片比率显著高于对照组,P<0.001).结论:SCD实验是检测精子DNA完整性有效的方法.少弱畸精子症不育患者精子DNA碎片比率增高.
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精子DNA碎片对IVF-ET结局的影响
目的:探讨精子DNA碎片化率(DFI)对体外受精结局的影响.方法:采用改良精子染色质扩散实验(SCD)对139例接受体外受精(IVF)的男方进行精子DFI检测,并根据精子DFI值将上述IVF患者分为:A组(DFI＜17.6％)、B组(17.6％≤DFI≤30％)、C组(DFI＞30％),根据单因素方差分析统计方法分析各组IVF受精率、卵裂率、优质胚胎率和妊娠结局的差异.结果:与A组比较,B组和C组正常形态精子率、精子前向活动力[(a+b)％]、卵裂率、优质胚胎率均降低(P＞ 0.05 vs B组,P＜ 0.05 vs C组)；与B组比较,C组正常形态精子率、精子前向活动力[(a+b)％]、卵裂率、优质胚胎率均降低(P＜0.05)；与A组比较,B组和C组受精率均降低(P＜ 0.05 vs B组,P＜ 0.05 vs C组)；与B组比较,C组受精率降低(P＜0.05)；A、B、C3组间生化妊娠率、临床妊娠率差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论:精子DNA碎片率升高不仅会导致精子前向活动力下降,还可导致IVF受精率、卵裂率、优质胚胎率下降,但对临床妊娠结局无明显影响.
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改良精子染色质扩散实验对精子DNA完整性检测的初步探讨
目的:通过对传统精子染色质扩散实验(SCD)方法进行改良,探索一种更简单、快速、准确的精子DNA完整性检测方法.同时对改良SCD法检测的正常参考值范围进行初步探讨.方法:对传统SCD法在实验过程、试剂配制及器具使用上进行了改良优化,同时对改良前后SCD法进行了比较.此外,利用改良SCD法对293例正常生育男性精液进行精子DNA完整性检测. 结果:建立了改良SCD检测法,经统计分析改良前后测定结果无统计学差异,同时初步对改良SCD法检测的正常精子DNA百分比参考值范围进行了确定,其值为精子DNA异常发生率<32.58%. 结论:改良SCD方法能更快速地对精子DNA的完整性进行检测,同时,由于降低了试剂成本,该法更容易在实际工作中得到普及.
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VC患者精子DNA损伤及精索静脉高位结扎术对精子DNA损伤影响的研究
目的:探讨精索静脉曲张(Varicocele,VC)患者精子DNA损伤程度以及精索静脉高位结扎术对精子DNA损伤的影响,并探讨精子DNA损伤的检测对评估VC患者生育能力及手术效果的可行性.方法:以WHO精液分析标准为指导对58例VC患者进行精液分析,并用精子染色质扩散实验(SCD)检测精子DNA损伤程度.其中24例VC患者行精索静脉高位结扎术,在术前和术后3个月行精液分析和精子DNA损伤的检测.以30例正常生育男性作为对照组.结果:VC伴有精液分析异常的患者精子DNA损伤程度为(33.64±7.11)％,明显高于对照组(10.78±5.01)％(P＜0.001);VC精液分析正常的患者精子DNA损伤程度为(23.94±6.04)％,也明显高于对照组(P＜0.001).行精索静脉高位结扎术后3个月,精子DNA损伤程度较术前明显减少(P＜0.001).结论:VC可引起不同程度的精子DNA损伤；精索静脉高位结扎术能有效降低VC患者的精子DNA损伤程度；精子DNA损伤的检测是评估VC患者生育能力及手术效果可行性较好的指标.
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男性不育患者精子染色体畸变及精子DNA完整性分析
目的 探讨男性不育患者精子染色体和精子DNA完整性的改变.方法 精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)实验分析精子DNA碎片,正常生育男性(对照组)32名,特发性严重少弱精子症患者(idiopathic severe oligoasthenozoospermia,ISOA)19例,妻子不明原因反复自然流产(unexpbined recurrent miscarriage,URM)38例;多色荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)技术检测URM妇女丈夫(n=12)、ISOA不育者(n=10)及对照组(n=5)精子13、21、18、X和Y染色体畸变.结果 对照组、ISOA不育者及URM妇女丈夫精子13、18和21染色体数目总体异常的比率分别为1.29%、4.02%和3.91%,而X和Y染色体数目总体异常的比率分别为0.61%、2.03%和1.98%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).SCD实验分析精子DNA碎片,ISOA不育患者(n=19)及URM妇女丈夫(n=38)精子DNA碎片比例平均为40.7%±17.8%和22.1%±10.3%,均显著性高于对照组(12.1%±5.2%,P＜0.01).FISH精子染色体(13、21、18、X和Y探针)数目畸变率与精子DNA碎片比率呈正相关(r=0.874,P＜0.01,n=27),精子DNA碎片比率与精子密度及前向运动精子率呈负相关(r=-0.571,P＜0.01,和r=-0.616,P＜0.01,n=89),与畸形精子比率呈正相关(r=0.637,P＜0.01,n=89).结论 精子染色体畸变率和精子DNA碎片比率增高,可能是ISOA和妻子URM不育男性的原因之一,精子DNA损伤筛查町能为特发性男性不育患者提供有用的信息.
