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MicroRNA-21在大鼠胚胎植入过程中的差异表达与调节
目的 初步研究 microRNA-21(miR-21)在大鼠胚胎植入过程中的作用. 方法 利用Northern印迹和原位杂交分析了miR-21在大鼠胚胎植入前期和植入期的表达差异,检测miR-21在假孕、人工诱导蜕膜化和延迟着床激活大鼠子宫中的表达模式,分析了17β-雌二醇和孕酮对于大鼠子宫miR-21表达的影响. 结果 miR-21在植入前期和植入期的大鼠子宫中存在差异表达,在大鼠妊娠第5天miR-21的表达量开始增加,其主要分布在植入位点内腔基质细胞,在第5.5天子宫miR-21的表达量达到高.在假孕的D4～D7大鼠子宫中miR-21表达无差异,在延迟着床激活模型中大鼠子宫miR-21的表达量明显增加,miR-21在诱导蜕膜化的大鼠子宫中表达也显著增加,17β-雌二醇和孕酮可以抑制大鼠子宫miR-21的表达.这些结果提示在植入期miR-21的表达增加主要是由胚泡引起的,并且其参与了蜕膜化过程. 结论 在大鼠妊娠早期,miR-21的表达增加可能有利于胚胎植入的发生.
关键词： MicroRNA-21 SD大鼠 子宫 胚胎植入 -
ERK1/2MAPK通路在Eca109细胞体外增殖和迁移中的作用及其机制
目的 观察ERK1/2 MAPK通路在食管鳞状细胞癌(ESCC) Eca109细胞系增殖和迁移中的作用并探讨其作用机制.方法 使用MAPK(ERK1/2)抑制剂U0126处理Eca109细胞;细胞计数检测细胞增殖;倒置显微镜下观察细胞形态;实时荧光定量PCR (qRT-PCR)检测ERK1/2 mRNA; Western blot检测总ERK1/2 (t-ERK1/2)和磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2);MTT和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;qRT-PCR检测MicroRNA-21(miR-21).结果 20 μmol/L浓度的U0126可抑制Eca109细胞生长(P＜0.05),破坏细胞正常形态,ERK1/2 MAPK通路的活化在蛋白质水平被抑制(P＜0.05),Eca109细胞增殖和迁移明显减弱(P＜0.05),显著下调miR-21的表达(P＜0.05).结论 ERK1/2 MAPK信号通路抑制可减弱Eca109细胞增殖和迁移,其可能的作用机制之一与其抑制miR-21表达有关.
关键词： ERK1/2 Eca109细胞 增殖 迁移 MicroRNA-21 -
microRNA-21可调控Flk1+间充质干细胞的迁移
目的 用microRNA-21抑制刺转染Flk1+间充质干细胞(MSC),探讨microRNA-21对Flk1+MSC(MSC)迁移的影响.方法 在脂质体介导下用microRNA-21抑制剂瞬时转染Flk1+MSC,用Transweil技术检测细胞迁移,用Real-time PCR技术检测micro-RNA的表达.结果 与对照组相比,实验组中microRNA-21表达明显下调,实验组细胞在12、16和20 h迁移率分别是对照组的77.5%、71.3%和69.8%.结论 microRNA-21可调控Flk1+MSC的迁移.
关键词： MicroRNA-21 间充质干细胞 迁移 -
microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究
目的 探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响.方法 宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染.Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达.结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果 显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P＜0.05);实时RT-PCR结果 显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高.Western blot检测结果 显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.
关键词： SIHa细胞 MicroRNA-21 宫颈鳞癌 PDCD4 -
弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中TALEN介导的microRNA-21基因敲除
目的:在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中探索敲除microRNA基因的有效方法,以方便microRNA基因在血液肿瘤疾病中功能的研究.方法:应用转录激活因子样效应蛋白核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease,TALEN)介导的基因工程技术敲除人类弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly3细胞中的microRNA-21(miR-21)基因,然后通过流式细胞仪富集eGFP+表达细胞、PCR筛选和microRNA定量检测,筛选并建立不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆.后,对不表达mi R-21的OCI-Ly3单细胞克隆进行miR-21基因测序.结果:通过两轮的电转染和筛选实验,获得了4个几乎不表达miR-21的OCI-Ly3单细胞克隆,突变率约为实验起始细胞数的十万分之一.对突变克隆的测序结果显示,多种miR-21序列缺失或插入均可能导致该基因表达显著下调.结论:本方法可以推广、应用于在转染效率极低的血液肿瘤细胞株中敲除任何感兴趣的microRNA基因.
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超声微泡靶向转染MicroRNA-21对猪冠状动脉微栓塞后心肌细胞凋亡的影响
目的 冠状动脉微栓塞(coronary microembolization,CME)后导致的心肌凋亡是引起心功能损伤的主要原因之一,第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphataseand tensin hmmlogydeleted on ten,PTEN)在CME后心肌凋亡中起到重要的作用,MicroRNA-21对心肌有保护作用,主要是通过调控其靶基因PTEN实现,因此本研究探讨超声微泡靶向转染MicroRNA-21对CME小猪心肌细胞凋亡的影响及意义.方法 20头巴马小猪随机(随机数字法)分为假手术组、微栓塞组(CME组)、CME+单纯基因组、CME+超声介导基因组,每组小猪均为5只.经微导管左前降支注入微栓塞球构建CME模型组,注射等量生理盐水构建假手术组.CME+超声介导基因组于CME前4天经耳缘静脉注入质粒-微泡混合液,同时予超声基因转染治疗仪经猪胸壁辐照心肌.CME+单纯基因组于CME前4天经耳缘静脉注入质粒-微泡混合液,不予超声辐照.应用心脏超声检测心功能指标;组织病理切片HE及HBFP染色进行梗死区域测量;冰冻切片荧光显微镜评估绿色荧光蛋白(GFP)标记基因表达量;切口末端标记法检测心肌细胞凋亡;荧光定量PCR检测心肌组织PTEN mRNA表达;Western blot检测心肌组织PTEN与Caspase-3蛋白表达.结果 (1)与单纯基因组比较,超声介导基因组可使心肌内外源基因表达水平提高8倍以上(P＜0.05).(2)超声心动图参数显示,与假手术组[(67.87±2.36)％]比较,CME组[(50.94±3.52)％]和CME+单纯基因组[(52.47±3.71)％]的左室射血分数(LVEF)显著降低(P＜0.05);与CME组比较,CME+超声介导基因组[(64.79±2.95)％]可改善CME导致的心功能损伤(P＜0.05).(3)与假手术组比较,CME组PTEN的mRNA和蛋白表达量均显著增加,Caspase-3的蛋白表达量增加(均P＜0.05);与CME组比较,CME+超声介导基因组中PTEN的mRNA和蛋白表达量明显较低,Caspase-3的蛋白表达量较低(均P＜0.05).结论 超声微泡靶向转染MicroRNA-21可以有效地改善CME致心功能损伤,其可能机制是通过下调其靶基因PTEN在心肌细胞的表达,进而减少心肌细胞凋亡起效.
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MicroRNA-21在肾细胞癌中高表达的研究
目的 本研究旨在检测MicroRNA-21(miR-21)在肾细胞癌及其相应癌旁肾实质组织中的表达,并分析其与临床病理指标的关联.方法 应用实时荧光定量PCR 技术(RT-qPCR)对miR-21 在48 例不同阶段肾细胞癌和癌旁组织中的相对表达量进行检测,并分析其表达量与临床病理指标之间的关联.结果 与相应癌旁组织比较,miR-21 在肾细胞癌中存在显著高表达(P ＜0.05),平均升高倍数约13.miR-21 表达水平上调与患者年龄、性别、病理类型、病理分期无关联(P 均＞0.05).结论 miR-21 在肾细胞癌组织中显著高表达,提示其可能在肾细胞癌的早期诊断、治疗、判断预后等方面具有重要意义.
关键词： 癌 肾细胞 MicroRNA-21 病理分期 -
mir-21在食管鳞癌中的表达及其与临床病理行为的关系
目的:探讨原发性食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系.方法:应用Real-time RT-PCR法及2-△△CT分析法检测ESCC患者组织及相对应癌旁组织中mir-21的表达及其与ESCC临床病理行为的关系.结果:96例ESCC标本中,40例(41.6％)mir-21存在高表达,mir-21高表达与患者分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关(均P＜0.05).结论:在原发性ESCC中,mir-21有较高的表达率,与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及TNM分期密切相关,可能在ESCC的发生发展中有重要作用.
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胰岛素对血管内皮细胞中miRNA-21表达和分泌影响的研究
目的 探讨胰岛素对血管内皮细胞中miRNA-21的表达和分泌影响. 方法 用不同浓度胰岛素(0、1、10、50、100和1000 nmol/L)干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs),48 h后收集细胞上清液及细胞,用实时荧光定量PCR方法检测细胞及上清液中miRNA-21的表达情况. 结果 与0 nmol/L胰岛素组相比,10、50、100和1000 nmol/L胰岛素组HUVECs中miRNA-21表达均下调(P均＜0.05),1000 nmol/L胰岛素组细胞中miRNA-21表达低(P＜0.05),但1与0 nmol/L胰岛素组HUVECs中miRNA-21表达差异无统计学意义(P＞0.05).与0 nmol/L胰岛素组相比,1和10 nmol/L胰岛素组HUVECs上清液中miRNA-21表达升高(P＜0.05),而50、100和1000nmol/L胰岛素组上清液中miR-NA-21表达降低(P均＜0.05),50 nmol/L胰岛素组上清液中miRNA-21表达含量低(P＜0.05).结论 不同浓度胰岛素可影响HUVECs中miRNA-21表达,这种变化反映了不同浓度胰岛素对HU-VECs的凋亡和增殖影响.
关键词： MicroRNA-21 血管内皮细胞 胰岛素 -
脐带间充质干细胞治疗糖尿病足的研究进展
全球大约有15％的糖尿病患者有发展成为足溃疡的可能,其中6％需要住院治疗.糖尿病足(DF)的治疗已成为威胁人类健康的世界性公共卫生问题,需要更为有效的治疗方案.脐带间充质于细胞(UCMSCs)是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞,可通过改善糖尿病下肢缺血、修复糖尿病周围神经病变(DPN)及调节免疫等方面促进足部创面愈合,且Wnt/β-catenin信号通路在治疗中发挥重要的调节作用.UCMSCs治疗已成为治疗糖尿病及其并发症的一种有潜力的治疗新方法,具有广阔的应用前景.
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MicroRNA-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4在动脉粥样硬化中的作用
目的 探讨microRNA(miR)-21及其靶基因程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在动脉粥样硬化(AS)发生发展中的作用.方法 收集38例急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者及34例非冠心病患者的血浆,实时定量PCR检测miR-21的表达水平.在Lipo3 000的介导下,将miR-21类似物、抑制剂及沉默PDCD4(siPDCD4)分别转染鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,并用氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)与细胞共同孵育,设立空白对照组(未转染且未加ox-LDL)及ox-LDL组(仅加ox-LDL).采用油红O染色检测细胞泡沫化程度,实时定量PCR及Western blot分别检测泡沫细胞中miR-21及PDCD4蛋白水平.此外,建立ApoE-/-小鼠AS模型20只,按随机数字表法分为3组:单纯高脂喂养组6只、过表达miR-21组7只及阴性对照组(NC,7只),鼠尾静脉注射胆固醇包裹的miR-21激动剂(agomiR-21)及阴性对照agomiR-NC分别建立过表达miR-21组及NC组.选用正常饲料喂养的C57BL/6小鼠作为正常对照组.实时定量PCR检测miR-21在AS斑块及正常动脉组织中的表达;Western blot及免疫组化分别检测PDCD4蛋白水平.结果 与相应的对照组比较,miR-21在STEMI患者血浆、泡沫细胞及单纯高脂喂养ApoE-/-小鼠斑块组织中的表达水平均明显升高(P<0.001;P<0.01;P<0.01);泡沫细胞及单纯高脂喂养ApoE-/-小鼠斑块内PDCD4蛋白水平明显增多;与ox-LDL组比较,ox-LDL+miR-21类似物组及ox-LDL+siPDCD4组巨噬细胞泡沫化程度明显下降,ox-LDL+miR-21抑制剂组细胞泡沫化程度明显增加.过表达miR-21组AS斑块内PDCD4蛋白水平较NC组明显减少,且斑块较NC组明显减小.结论 miR-21在急性STEMI患者血浆中、泡沫细胞及AS斑块内的水平明显升高.过表达miR-21及沉默PDCD4可抑制巨噬细胞向泡沫细胞的转化,这与动物组织实验结果一致,表明miR-21或可靶向调控PDCD4的表达,从而发挥抗AS的作用.
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MicroRNA-21与舒张心功能不全的研究进展
微小RNA(MicroRNA)是内源基因编码的一类长度约为22~26个核苷酸的单链非编码RNA分子,它是一种负性调节基因表达的非编码RNA,通过切断靶基因的mRNA分子或抑制靶基因的翻译等方式,在转录水平调控蛋白质的表达.舒张性心功能不全是临床上应越来越重视的疾病,它往往因症状不典型而被忽视,而它的发病率和死亡率与收缩性心功能不全相近,严重影响老年人的寿命和生活质量.一些研究表明细胞可通过外分泌的方式使microRNA进入循环血中并稳定存在,这个特点可以通过检测含量来研究与疾病相关性的价值.本文就MicroRNA-21与舒张性心功能不全研究进展做如下综述.
关键词： MicroRNA-21 舒张性心功能不全 -
microRNA-21对于神经胶质瘤辅助治疗的研究进展
神经胶质瘤作为常见高发病率和病死率的原发性脑肿瘤,是成人和儿童死亡的一个重要原因.目前通过手术切除辅助放疗和化疗治疗神经胶质瘤预后不佳,胶质细胞瘤患者自确诊后中位生存期很短.神经胶质瘤的发病过程中,microRNA-21(miR-21)调节胶质瘤细胞相关分子的表达,影响下游信号通路从而耐受胶质瘤的放化疗.本文就miR-21与神经胶质瘤发病相关性,及神经胶质瘤放化疗研究进展进行综述.
关键词： MicroRNA-21 神经胶质瘤 放化疗耐受 脑肿瘤 综述 -
肺癌患者血清microRNA-21表达临床意义探讨
目的:探讨miRNA-21在肺癌患者血清中的表达及其在肺癌早期诊断的应用价值.方法:收集中山大学孙逸仙纪念医院2011-06-09-2012-10-06收治的90例肺癌患者、40例肺部良性疾病患者和90名健康体检人群作为研究对象,采用Taqman探针实时定量PCR对miRNA-21血清含量进行半定量测定,并依据肺癌患者和两对照组血清miRNA-21相对表达量,利用ROC曲线评价其在肺癌诊断上的灵敏度和特异度.结果:健康组、良性病变组和肺癌组miRNA-21血清平均表达量分别为0.70±0.49、1.38±0.67和1.86±0.85.肺癌患者miRNA-21血清水平显著高于健康对照纽和良性肺部疾病组(LSD-t=10.918,P＜0.001;LSD-t=3.523,P＜0.001),其相对表达量与患者年龄(u=940.000,P=0.626)、性别(u=801.000,P=0.243)、病理类型(x2=4.109,P=0.128)和临床分期(u=777.000,P=0.085)无关.ROC曲线下面积为0.808(0.750～0.866),当临界值取1.32时,其灵敏度为0.711,特异度为0.823.结论:肺癌患者血清miRNA-21水平显著升高,提示可能是肺癌诊断的潜在肿瘤标志之一.
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microRNA-21对乳腺癌MCF-7/ADR细胞株多柔比星耐药性影响的研究
目的:探讨microRNA-21(miR-21)基因表达改变对乳腺癌细胞多柔比星化疗耐药的影响.方法:人工合成miR-21模拟序列或干扰序列,以脂质体为载体,转染乳腺癌细胞MCF-7及其多柔比星耐药细胞株MCF-7/ADR;应用荧光定量RT-PCR检测miR-21的表达；应用MTT法检测细胞转染前后对多柔比星的耐药性；应用流式细胞仪检测细胞凋亡；应用蛋白质印迹法检测PTEN、BAX及Bcl-2蛋白的表达.结果:MTT检测结果示,MCF-7及其耐药株MCF-7/ADR细胞多柔比星半数抑制浓度(IC50)分别为(0.28±0.03)和(17.5±0.12) μmol/L.miR-21表达上调,MCF-7细胞对多柔比星的IC50明显增高为(3.65±0.12) μmol/L;miR-21表达下调,MCF-7/ADR细胞对多柔比星的IC50明显降低为(7.53±0.11) μmol/L.流式细胞分析显示,miR-21下调后MCF-7/ADR细胞凋亡率明显增加.同时,细胞内PTEN、BAX蛋白表达水平增加,Bcl-2表达降低.结论:miR-21在乳腺癌化疗耐药中具有重要作用,抑制miR-21的表达可以逆转乳腺癌多柔比星耐药细胞株对多柔比星的耐药性.
关键词： 乳腺肿瘤 MicroRNA-21 抗肿瘤药 耐药性 -
表皮生长因子对HaCaT细胞miR-21/PCD4的表达研究
目的 探讨表皮生长因子(EGF)对角质形成细胞(HaCaT细胞)miR-21/PDCD4表达的调控作用.方法 聚合酶链反应(PCR)法检测不同浓度EGF(0、5、15、25 ng/mL)对HaCaT细胞miR-21表达的影响;蛋白免疫印迹法检测不同浓度EGF(0、5、15、25 ng/mL)对HaCaT细胞PDCD4蛋白表达的影响.结果 EGF浓度依赖性促进HaCaT细胞miR-21的表达,与对照组比较,5 ng/mL EGF组、15 ng/mL EGF组、25 ng/mL EGF组HaCaT细胞miR-21表达分别为1.46±0.11、2.44±0.05、3.19±0.08(P＜0.05);EGF浓度依赖性抑制HaCaT细胞HaCaT细胞PDCD4表达,跟对照组比较,25 ng/mL EGF组能显著抑制HaCaT细胞PDCD4表达.结论 EGF促进HaCaT细胞miR-21的表达,抑制HaCaT细胞PDCD4的表达水平.
关键词： 表皮生长因子 MicroRNA-21 程序化细胞死亡分子4 银屑病 -
单纯疱疹性角膜炎免疫调节因子 IL-12 A与 microRNA-21靶向作用关系的实验研究
目的：寻找一种可同时调控白细胞介素-12A（IL-12A）等多个单纯疱疹性角膜炎（HSK）免疫调节因子的microRNA（miRNA）。鉴定miRNA与IL-12A等免疫调节因子的靶向调控作用并预测其在HSK中可能的作用机制。方法选取293T人胚肾细胞等培养材料进行实验。实验主要包括运用TargetScan v7．1、miRanda v2010、miRBase v2014及miRTarBase v6．0数据库进行多个免疫调节因子的miRNA预测，寻找共同的miRNA；运用miRBase数据库对各物种miR-21序列进行对比；通过RGator v3．0数据库分析hsa-miR-21在各组织中的表达情况；通过数据库检索，找出尚未验证的hsa-miR-21候选靶基因进行结合位点验证；通过构建IL-12A的3′-非翻译区（ UTR）野生型及突变型载体质粒，将相应的质粒与hsa-miR-21模拟物转染到293T细胞中；通过双荧光素酶报告系统检测萤光素酶活性，初步验证两者的靶向结合作用；运用以上数据库进行hsa-miR-21的候选靶基因预测，得出候选靶基因集合；对候选靶基因集合进行基因功能富集分析和信号转导通路富集分析，并预测hsa-miR-21在HSK中可能的作用机制。结果通过以上数据库检索，发现hsa-miR-21是可以同时调控以上多个HSK免疫调节因子的miRNA，且各物种miR-21的序列基本一致。研究发现IL-12A是尚未验证的候选靶基因。双荧光素酶报告系统分析表明hsa-miR-21能够靶向作用于IL-12A的3′-UTR （t＝－24．43，P＜0．05），初步证明两者有靶向结合作用。结合数据库筛选出hsa-miR-21的候选靶基因共609个，其基因功能主要富集于调节细胞、细胞蛋白质代谢等过程（ P＜0．05），并涉及到丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路、单纯疱疹感染通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路、NF-κB信号通路及多种癌症通路（ P＜0．05）。研究结果表明，hsa-miR-21可能通过MAPK信号转导通路中的27个靶基因、单纯疱疹感染通路中的19个靶基因、TNF信号通路中的15个靶基因及NF-κB信号通路中的10个靶基因来调控HSK的发生和发展。结论 HSK免疫调节因子IL-12A等多个靶基因可同时被hsa-miR-21调节。 hsa-miR-21的靶基因参与多个生物学过程，与癌症和免疫炎症密切相关，其中MAPK信号转导通路、单纯疱疹感染通路、TNF信号通路及NF-κB信号通路可能是其参与HSK免疫调节中主要的作用机制。
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慢病毒介导的miR-21对化疗所致大鼠卵巢早衰的治疗作用
目的 探讨miR-21在化疗所致的卵巢早衰大鼠模型中的治疗潜能.方法 采用分子生物学方法成功构建慢病毒介导的miR-21(LV-miR-21)载体.100只成年雌性Wistar大鼠随机分为:空白对照组、模型组、空载组以及miR-21组,每组25只.后3组采用环磷酰胺(CTX)腹腔注射构建化疗所致卵巢早衰大鼠模型,空载组及miR-21组于建模后分别在双侧卵巢注射空载体及LV-miR-21,空白对照组则注射生理盐水.于注射后第1、15、30、45、60天分批处死大鼠,留取血及卵巢标本.通过阴道脱落细胞涂片检测大鼠动情周期.采用化学发光法、放射免疫法检测雌二醇(E2)及卵泡刺激素(FSG)水平;测定卵巢重量、进行卵泡计数;采用TUNEL法测定卵巢颗粒细胞凋亡率.结果 注射完成后15～30d、30～45d及45～60d,miR-21组分别有8、5、3只大鼠恢复规律的动情周期;注射完成后第15、30、45、60天,miR-21组的E,浓度高于模型组、空载组,而FSH浓度低于模型组及空载组(p=0.000);注射完成后第30、45、60天,miR-21组卵巢重量大于模型组及空载组(P=0.000);注射完成后第45、60天,miR-21组各级卵泡数目均高于模型组和空载组,.但仍低于空白对照组(P=0.000);注射完成后第15、30、45、60天,miR-21组卵巢颗粒细胞凋亡率低于模型组和空载组(P=0.000).结论 上调miR-21能够部分修复CTX损伤的卵巢结构及功能.
关键词： MicroRNA-21 卵巢早衰 环磷酰胺 慢病毒 颗粒细胞 -
去甲斑蝥素降低人胃癌细胞程序性细胞死亡因子4的表达
目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制.方法 MTT法测定NCTD 5～640 μmol·L-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0,6,30和60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD60 μmol· L-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L-1作用4h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRTPCR)测定NCTD 60 μmol· L-1作用BGC-823细胞6,12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达.Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响.结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24,48和72 h IC50分别为74.5,35.0和10.3 μmol·L-1.NCTD 6,30和60 μmol· L-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9％,47％和62％.NCTD对PDCD4mRNA表达无影响.与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响.NCTD 60 μmol-L-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P＜0.01).细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用.结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达.
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MicroRNA-21在卵巢癌中的表达及其与临床病理因素之间的关系
目的 检测卵巢癌组织中microRNA-21基因的表达,并探讨其与临床病理因素间的关系.方法 采用实时定量PCR方法检测64例卵巢癌组织和30例正常卵巢组织中microRNA-21的相对表达量,并分析microRNA-21的表达量在不同临床病理因素间的差异.结果 在正常卵巢组织、卵巢癌组织中microRNA-21的相对表达量分别为4.23±1.02、7.64±0.87,其差异具有统计学意义(P＜0.05);无淋巴结转移组与有淋巴转移组的相对表达量分别为4.99±1.02,7.24±0.91,其差异有统计学意义(P＜0.05);临床分期为0～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期的卵巢癌组织中microRNA-21的相对表达量分别为4.42±0.82、7.75±1.13,其差异有统计学意义(P＜0.05),但microRNA-21在卵巢癌组织中的表达与患者年龄、临床病理分型无关,其差异无统计学意义(P＞0.05).结论 microRNA-21的表达量在卵巢癌组织中较正常卵巢组织显著增加,其异常高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关.
关键词： MicroRNA-21 卵巢癌 qRT-PCR
