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丹参酮ⅡA对人宫颈鳞癌细胞SIHa增殖及凋亡的影响
目的 测定不同浓度的丹参酮ⅡA对宫颈鳞癌细胞SIHa增殖的影响,并探讨丹参酮ⅡA的促凋亡作用.方法 常规体外培养人宫颈鳞癌细胞SIHa,24h后加入浓度为0.5、1.0、2.0和5.0mg/L的丹参酮ⅡA,继续培养24h.通过倒置显微镜观察细胞形态学变化,采用MTT试验检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞早期凋亡率,R123染色法检测线粒体膜电位改变.Western blot蛋白印记检测凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Caspase-3的表达情况.结果 细胞形态学观察结果显示,不同浓度丹参酮ⅡA均可导致细胞形态学发生改变;MTT试验表明,丹参酮ⅡA对SIHa细胞的生长有明显抑制作用,且抑制作用随药物浓度的增加而增强(P＜0.05或P＜0.01);培养24h后流式细胞仪检测结果表明,丹参酮ⅡA培养24h后SIHa细胞出现凋亡,早期凋亡比例分别为5.8％、7.9％,10.2％和20.44％.线粒体膜电位结果表明,anⅡA组细胞线粒体膜电位呈现降低趋势(P＜0.01).Western blot蛋白质印迹结果显示,同对照组相比,不同浓度丹参酮ⅡA处理细胞24h后,丹参酮ⅡA培养组SIHa细胞Bcl-2蛋白表达呈现降低趋势,而Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达呈现上升趋势.结论 不同浓度的丹参酮ⅡA可以抑制SIHa细胞增殖并诱导其凋亡,且具有剂量依赖性.
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蜈蚣提取物诱导SiHa细胞凋亡及其作用机制的研究
目的:研究蜈蚣提取物对官颈癌SiHa细胞生长的抑制及其作用机制.方法:观察不同浓度的不同蜈蚣提取物对宫颈癌SiHa细胞的生长抑制情况:运用体外细胞培养技术,以不同浓度的蜈蚣提取物和阳性对照药顺铂作用于培养的SiHa细胞48 h,采用MTT法测定药物对细胞生长的影响,以流式细胞术观察DNA含量和凋亡的变化情况,DNA片断化分析凋亡特有DNA梯形格局和Western Blot测定bax、Caspase 3蛋白水平的表达.结果:SiHa细胞用8、16、32 mg/ml的乙醚、乙醇蜈蚣提取物处理48 h后,细胞生长显著受抑;DNA周期改变明显,亚G1峰与对照组有显著性差异;DNA-Ladder显著:Western Blot提示相关凋亡蛋白bax、Caspase 3表达并显示活性,凋亡率增高明显.结论:中药蜈蚣乙醚、乙醇提取物在体外对宫颈癌SiHa细胞的生长有明显地抑制作用,其机制与改变细胞DNA周期,促进凋亡有关.
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生物能活力素单独及与顺铂联合对人宫颈癌Siha细胞的生长抑制作用
目的:探讨生物能活力素对人宫颈癌Siha细胞体外生长的抑制作用,以及生物能活力素增加Siha细胞对顺铂的敏感性,以期对治疗宫颈癌以及其他肿瘤寻找新的治疗药物.方法:体外培养人宫颈癌Siha细胞,分别用生物能活力素、顺铂、生物能活力素加顺铂处理24 h、48 h、72 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测生物能活力素和顺铂及两者联合应用Siha细胞的存活率.结果:生物能活力素对Siha细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.01)其24 h、48 h、72 h的IC50分别为56.23μg/ml、51.92μg/ml、48.92μg/ml.顺铂对Siha细胞的24 h、48 h、72 h的IC50分别为13.74μg/ml、4.38μg/ml、3.69μg/ml.两者合用可大大的提高对Siha细胞的抑制作用,比单用生物能活力素或单用顺铂均有明显的提高(P<0.01).结论:生物能活力素能抑制Siha细胞的生长,同时能够增加Siha细胞对顺铂的敏感性.
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清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响
目的 探讨清毒栓含药血清对人宫颈癌SiHa细胞的诱导凋亡作用及其对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法 以不同浓度清毒栓含药血清分别处理SiHa细胞24～72 h后,MTT法检测细胞的生长活性,显微镜观察细胞形态,Western Blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达.结果 显微镜下观察到细胞圆缩、染色体凝聚等凋亡细胞的形念学改变,随着清毒栓含药血清浓度的增加,Bax蛋白的表达增加而Bcl-2的表达减少.结论 清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞的生长具有抑制作用,可诱导SiHa细胞发生凋亡,Bcl-2蛋白表达减少与Bax蛋白表达增多可能是SiHa细胞凋亡的机制之一.
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紫草素对宫颈癌SiHa细胞增殖周期的影响
目的 观察紫草素(Shikonin,SK)对人宫颈癌SiHa细胞增殖周期的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养人宫颈癌SiHa细胞,不同浓度SK作用于细胞后,流式细胞术检测细胞增殖指数和周期分布;细胞水平免疫组织化学法观察SiHa细胞G蛋白偶联雌激素受体(GPER)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 作用48小时后,与空白对照组相比,雌二醇组SiHa细胞增殖指数升高,1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L SK各组SiHa细胞增殖指数下降(P<0.05),同时G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.01);与空白对照组相比,雌二醇组GPER、Cyclin D1蛋白表达增加,1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L SK各组GPER、Cyclin D1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性(P<0.05).结论 紫草素能够抑制人宫颈癌鳞癌SiHa细胞增殖,其诱导G0/G1期阻滞的分子机制可能与GPER、Cyclin D1蛋白相关.
关键词： 紫草素 SIHa细胞 G蛋白偶联雌激素受体 细胞周期蛋白D1 细胞周期 -
清毒栓对宫颈癌SiHa细胞及PTEN-MDM2-p53网络环路的影响
目的 从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及对PTEN-MDM2-p53网络中各个蛋白表达的影响.方法 以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,设立正常对照组、空白血清组、清毒栓组、保妇康栓组及干扰素组,通过MTT法检测含药血清对细胞增殖抑制的影响;同时运用Western blot法检测PTEN-MDM2-p53蛋白的表达情况.结果 经含药血清培养液作用后各组细胞数量减少,其中以4%浓度含药血清作用72 h时对细胞抑制作用强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时,含药血清可升高PTEN、P53抑癌蛋白的表达,降低癌蛋白MDM12的表达.结论 清毒栓含药血清可能是通过调控PTEN-MDM2-P53网络环路而达到抑制肿瘤的目的 .
关键词： 清毒栓 宫颈癌 SIHa细胞 PTEN-MDM2-p53网络 -
纳米雄黄混悬液诱导Siha细胞凋亡及对HPV16E6/E7表达的影响
目的:探讨纳米雄黄混悬液对人宫颈癌Siha细胞的抑制增殖、诱导凋亡作用及其对HPV16E6和E7致瘤基因的影响.方法:采用微射流法制备纳米雄黄混悬液,应用不同质量浓度(6.25,12.5,25,50 mg·L-1)的纳米雄黄混悬液作用于Siha细胞不同时间(12,24,48,72 h),光镜和透射电镜观察实验组(不同质量浓度的纳米雄黄混悬液处理组)和对照组(不加药物的细胞)细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DNA Ladder形成;MTT比色法测定细胞生长抑制情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期改变;RT-PCR方法检测HPV16E6和E7的表达.结果:纳米雄黄混悬液25～50 mg·L-1处理Siha细胞48,72 h后,细胞存活率降低,凋亡增加,作用呈时间-剂量依赖关系.电镜显示细胞呈典型的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞DNA Ladder形成;流式细胞术检测证实细胞凋亡率与纳米雄黄混悬液作用浓度呈明显相关,与对照组相比,差异有极显著意义(P<0.01),且细胞呈G0-G1期阻滞.RT-PCR检测显示随着纳米雄黄混悬液作用浓度的增加,HPV16E6和E7的表达不同程度地受到抑制.结论:纳米雄黄混悬液对于Siha细胞具有诱导凋亡、抑制增殖的作用,其机制可能与其抑制HPV16E6和E7致瘤基因的表达有关.
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异紫堇碱抑制裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的生长
目的 研究异紫堇碱(ICD)对裸鼠人宫颈癌Siha细胞移植瘤的影响,探讨异紫堇碱抑制宫颈癌发生发展的机制.方法 将人宫颈癌Siha细胞接种于BALB/c(nu/nu)裸鼠皮下建立动物模型,待移植瘤平均直径≥0.5 cm时,随机分为对照组及腹腔注射不同剂量异紫堇碱干预组.4周后取出瘤体组织,用HE染色法观察瘤体组织病理形态学,用免疫组化染色及Western blot方法观察负荷瘤组织中的蛋白表达.结果 经异紫堇碱干预后的宫颈癌Siha细胞裸鼠负荷瘤体积减小(P<0.05);细胞形态可由干细胞样向上皮样细胞转化;上皮细胞分化成熟标记E-cadherin表达明显升高,而HPV16E6蛋白和间叶组织标志物vimentin的表达下降.结论 异紫堇碱可能通过抑制携带HPV亚型的宫颈癌Siha细胞中E6蛋白的表达及EMT相关信号通路来抑制宫颈癌的发生发展.
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膜联蛋白A5重组质粒的构建及其过表达对SiHa细胞增殖的影响
目的 构建膜联蛋白A5(ANXA5)重组质粒并探讨过表达ANXA5对宫颈癌SiHa细胞的增殖产生的影响. 方法 将ANXA5基因克隆入含His标签的pcDNA3.1质粒载体,构建pcDNA3.1-ANXA5重组质粒;用磷酸钙共沉淀法将重组质粒和pcDNA3.1空质粒分别转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,G418加压培养,免疫印迹法筛选过表达ANXA5的细胞克隆,免疫组织化学筛选已转染pcDNA3.1空质粒的细胞克隆;将过表达ANXA5蛋白的细胞、载有pcDNA3.1空质粒的细胞以及未处理的SiHa细胞分别进行四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)实验和CCK-8实验检测细胞增殖情况. 结果 成功构建了peDNA3.1-ANXA5重组质粒,测序证实ANXA5基因序列正确;普通未处理的SiHa细胞和转染了pcDNA3.1空质粒的SiHa细胞生长速度较快,两组同无显著性差异(P>0.05);过表达ANXA5的SiHa细胞其增殖速度比前两组显著降低(P<0.05). 结论 膜联蛋白A5可能对宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖具有抑制作用.
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siRNA介导的HPV16 E6/E7基因沉默对宫颈癌SiHa增殖及凋亡的影响
目的 探讨小干扰RNA(siRNA)介导的人乳头状瘤病毒16型(HPV16) E6/E7基因沉默对宫颈癌SiHa细胞增殖及凋亡的影响.方法 设计靶向HPV16 E6/E7基因启动子区的siRNA序列,构建质粒转染SiHa细胞,筛选稳定沉默E6/E7基因的细胞系.用QT-PCR和RT-PCR检测细胞E6/E7基因mRNA的变化、Western blot检测细胞E6/E7蛋白变化;利用MTT、RT-PCR、免疫组化法检测细胞增殖情况,Tunel检测细胞的凋亡情况.结果 成功构建E6/E7基因稳定沉默的细胞株,其mRNA与蛋白沉降效率明显.MTT及Ki-67表达显示细胞增殖活性降低;Tunel显示沉默细胞凋亡增加.结论 siRNA技术可以成功诱导HPV16型E6/E7基因沉默,从而影响癌细胞的生长、增殖和凋亡.
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microRNA-21调节宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4的表达研究
目的 探讨microRNA(miR)-21-反义寡核苷酸(ASODN)对宫颈鳞癌SiHa细胞中PDCD4基因表达、细胞增殖与凋亡的影响.方法 宫颈鳞癌SiHa细胞分3组,采用LipofectamineTM2000转染试剂,miR-21调控组转染miR-21抑制剂的ASODN,miR-21抑制剂阴性对照的ASODN,空白对照组不转染.Cell Titer和荧光TUNEL分别检测转染前后SiHa细胞增殖和凋亡的变化,流式细胞仪分析细胞周期,实时RT-PCR检测miR-21和PDCD4mRNA水平表达,Western blot检测靶蛋白PDCD4表达.结果 AS-miR-21组与阴性、空白对照组相比,SiHa细胞生长明显抑制,而阴性和空白对照组比较无明显差异;细胞凋亡率分别为(9.7±0.52)%、(3.6±0.17)%和(3.4±0.36)%;细胞周期结果 显示AS-miR-21组G0/G1期细胞明显增多,S期细胞减少,与对照组间差异显著(P＜0.05);实时RT-PCR结果 显示,miR-21表达下降而PDCD4表达升高.Western blot检测结果 显示,PDCD4表达AS-miR-21组明显高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05).结论 AS-miR-21可有效抑制miR-21在宫颈鳞癌SiHa细胞中的表达并上调PDCD4基因表达,发挥抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用.
关键词： SIHa细胞 MicroRNA-21 宫颈鳞癌 PDCD4 -
K562和SiHA细胞株经γ-射线照射后细胞周期阻滞与ATM表达量的关系研究
共济失调毛细血管扩张症(ataxia telangiectasis,A-T)是由ATM(ataxia telangiectasis mutant)基因突变所致,其突出特点是对放射线敏感.为探讨K562和SiHA两种肿瘤细胞株ATM表达量与γ-射线照射后细胞周期阻滞即自我保护功能之间的关系,应用半定量RT-PCR测量它们的ATM mRNA表达,同时以6、10和15 Gy 60Co γ射线分别照射细胞,并于照射后6、12、24、48及60小时观察细胞周期阻滞现象和凋亡率的变化.结果显示,K562细胞株ATM RNA相对表达量为0.04,而在SiHA细胞株为0.80,SiHA的ATM RNA表达量约为K562的20倍.结论:照射后K562和SiHA细胞株均表现G2/M期阻滞,K562细胞周期阻滞即自我保护机制明显比SiHA差.
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反义miR-21对荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤生长和凋亡的影响
目的 构建荷人宫颈鳞癌裸鼠移植瘤模型,探讨干扰miR-21 表达对移植瘤生长、凋亡的影 响.方法 将人工合成的反义寡核苷酸ASODN(AS-miR-21)转染SiHa 细胞(抑制组),同时设阴性对照组和 空白对照组,对数生长期的SiHa 细胞分别接种于裸鼠皮下,绘制肿瘤生长曲线并计算肿瘤生长率.当肿瘤 体积达0.2 cm3 时采用AS-miR-21 多点瘤周注射,观察其对移植瘤的影响.应用免疫组化技术、荧光TUNEL 检测移植瘤细胞增殖活性和凋亡情况.结果 (1)成功构建人宫颈鳞癌裸鼠皮下移植瘤模型,抑制组、阴性 对照组及空白对照组成瘤率分别为37.5%、75.0%、100.0%,瘤体平均体积为(732.80 ±56.32 ) mm3 、(1228.46 ±78.53)mm3 、(1301.26 ±80.63)mm3,平均生长率为18.32%、30.71%和32.53%,瘤重为(0.73 ± 0.05)g、(1.26 ±0.12)g 和(1.35 ±0.25)g,抑制组与阴性、空白对照组比较差异均有统计学意义(P <0.05); (2)免疫组化显示抑制组裸鼠瘤体Ki67 表达显著下降;荧光TUNEL 凋亡检测显示抑制组裸鼠肿瘤细胞凋亡 率明显增多;(3)注射治疗剂量AS-miR-21 两周后观察肿瘤组织局部坏死严重,胞核裂解、消失,凋亡明显增 加.结论 AS-miR-21 可下调裸鼠人宫颈鳞癌移植瘤中miR-21 的表达,抑制移植瘤生长和促进其凋亡.
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低频电刺激对人子宫颈癌SiHa细胞增殖及迁移能力的影响
目的 探讨低频电刺激对人宫颈癌SiHa细胞的影响.方法 对处于生长对数期宫颈癌SiHa细胞,根据低频电刺激强度分为20 mA、40 mA和60 mA及对照组,刺激时间30 mins,采用CCK-8增殖试验检测细胞的增殖能力.采用Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭和转移试验,检测细胞侵袭和转移能力.结果 不同低频电刺激后,四组4、24、48、72 h细胞增殖力比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Transwell小室试验显示,不同低频电刺激后,四组细胞侵袭转移力比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 低频电刺激对人宫颈癌SiHa细胞的增殖和侵袭转移能力无明显影响,但尚需进一步研究证实.
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子宫颈癌SiHa细胞中NDRG1基因的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系
宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤,其发病率及病死率居妇科恶性肿瘤的第2位,仅次于乳腺癌,严重威胁妇女的身体健康.近年来发现,人类N-myc下游调节基因1(NDRG1)与肿瘤侵袭转移密切相关,普遍分布于人体多种组织中,包括生殖、泌尿、消化、免疫系统,具有调节肿瘤细胞生长、分化、应激反应及侵袭转移的作用.NDRG1基因参与多种肿瘤的发生、发展,如乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、肝癌、胰腺癌、脑肿瘤、黑色素瘤等[1].本研究使用基因转染技术增加NDRG1基因在宫颈癌细胞中的表达,探讨NDRG1基因对宫颈癌细胞的生长及侵袭转移的影响.
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米非司酮对子宫颈癌SiHa细胞增殖及其顺铂敏感性的影响
米非司酮为强效孕激素及糖皮质激素拮抗剂,广泛用于终止早中期妊娠、扩张宫颈和紧急避孕等.随着对其深入研究发现,米非司酮在脑脊膜瘤、子宫平滑肌瘤、子宫内膜癌等的治疗中起着积极作用[1].本研究探讨了米非司酮对宫颈癌SiHa细胞增殖及其顺铂敏感性的影响,并探讨其可能机制.
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慢病毒介导的AQP8稳定表达对子宫颈癌SiHa细胞迁移能力的影响
水通道蛋白(aquaporins,AQP)是一个疏水的、小而完整的膜蛋白家族,广泛表达于动植物体内,相对分子质量约为30 000,迄今为止,哺乳动物体内共发现有13个AQP成员(AQP0～12)[1].研究提示,AQP作为一个关键因素直接参与人类恶性肿瘤的发生过程[2],与正常人绒毛滋养层细胞相比,AQP8在绒毛膜癌(绒癌)细胞系JAR细胞中表达异常上调,可能是导致绒癌发生的原因之一[3].肿瘤细胞的迁移是肿瘤浸润和转移的关键步骤.目前已报道至少有12种肿瘤细胞在人或鼠体内表达AQP.本研究使用红色荧光蛋白(RFP)标记的重组慢病毒载体将AQP8转染入宫颈癌细胞系SiHa细胞,建立稳定表达AQP8的SiHa细胞系,探讨AQP8对SiHa细胞体外迁移能力的影响.
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siRNA对子宫颈癌SiHa细胞VEGF-165表达影响的研究
目的:探讨小分子干扰RNA(siRNA)对子宫颈癌细胞系SiHa细胞中VEGF-165的表达及细胞增殖的影响.方法:体外化学合成针对VEGF-165的siRNA,在转染试剂的介导下转染Si-Ha细胞.实验分为3组,设未转染细胞为空白对照组、VEGF-165特异性siRNA转染的实验组及无关序列siRNA转染的阴性对照组.利用MTT法检测siHa细胞转染后细胞增殖活性,荧光实时定量RT-PCR法分别检测转染12、24、48和72 h后Si-Ha细胞中VEGF-165 mRNA的表达情况,ELISA法检测细胞培养液中VEGF-165蛋白分泌量的变化.结果:VEGF-165 siRNA转染SiHa细胞后,各时间点与对照组相比VEGF mRNA表达水平明显下降(F值分别为99.94、169.27、460.90和115.86,P<0.05);VEGF蛋白分泌量明显减少,差异有统计学意义(F值分别为107.06、136.46、147.10和54.25,P<0.05);细胞生长较对照组明显受到抑制(F值分别为70.58、61.17、113.39和100.94,P<0.05).而阴性对照组与空白对照组比较,上述指标差异均无统计学意义,P>0.05.结论:VEGF siRNA可以有效抑制子宫颈癌SiHa细胞VEGF mRNA及其蛋白的表达水平,抑制细胞增殖,为子宫颈癌的基因治疗提供依据.
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清疣Ⅱ号方对SiHa细胞E7和PCNA蛋白表达的影响
目的 探讨不同浓度清疣Ⅱ号方对体外培养SiHa细胞中E7和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)还原法测定SiHa细胞的增殖抑制水平,采用间接免疫荧光技术观察各组细胞铺片中E7和PCNA蛋白的荧光表达情况.结果 随药物浓度梯度的升高,各实验组细胞增殖活性逐渐降低,增殖抑制率逐渐增高.经中药清疣Ⅱ号方处理后,强表达E7和PCNA荧光的阳性细胞数减少,弱表达E7和PCNA荧光的阴性细胞数增加.E7和PCNA蛋白荧光表达的平均灰度随药物浓度梯度的升高逐渐增高,阳性单位随药物浓度梯度的升高逐渐减小.结论 清疣Ⅱ号方能够有效下调E7和PCNA蛋白的表达,从而抑制体外培养的SiHa细胞增殖.这可能是其临床治疗尖锐湿疣.减少复发的药理作用机制之一.
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SAHA联合顺铂对裸鼠宫颈癌抑瘤作用及其机制
目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制药SAHA联合顺铂（cis-diamminedichloroplatinum，DDP）抑瘤作用及机制。方法饲养40只Balb/c-nu/nu雌性裸鼠，细胞悬液皮下注射法构建人宫颈癌SiHa细胞株裸鼠移植瘤模型，当移植瘤8~10 mm大小时，36只荷瘤裸鼠被随机分为6组（对照组、25 mg/kg SAHA组、50 mg/kg SAHA组、5 mg/kg DDP组、25 mg/kg SAHA+DDP组、50 mg/kg SAHA+DDP组），给药第17天拉颈处死裸鼠。对移植瘤的湿重、瘤体积、肿瘤生长抑制率输入SPSS 19.0软件进行统计学分析。结果与各对照组比，联合组显示出大程度的肿瘤体积的缩小及肿瘤生长抑制率增加（P＜0.05）。结论 SAHA与DDP联合治疗宫颈癌，其作用机制可能与组蛋白去乙酰化酶1（histone deacetylase 1，HDAC1）蛋白水平下调有关。
