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Annexin A5在相关疾病中作用机制的研究进展
Annexin A5（膜联蛋白A5）是Ca2＋依赖的磷脂结合蛋白家族的一名成员，它存在于组织细胞中，因为其具有的独特结构而参加多种细胞内、外的抗凝，促凋亡等重要功能。并且Annexin A5与系统性红斑狼疮、肿瘤等多种疾病的发病机制有着一定关联性。
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膜联蛋白A5在人子宫颈鳞癌组织中的表达
目的 探讨人子宫颈鳞痛发生发展过程中,膜联蛋白A5(ANXA5)表达的变化. 方法 收集人子宫颈鳞癌组织25例和人正常子宫颈组织15例,细胞裂解液裂解组织细胞,蛋白定量试剂盒进行蛋白定量后,Westernblotting法检测ANXA5在人子宫颈鳞癌组织和人正常子宫颈组织中的表达;为进一步确定ANXA5的表达部位及其变化,我们收集人子宫颈鳞癌蜡块45例和人正常子宫颈组织蜡块20例,用免疫组织化学ABC法对两种组织ANXA5的表达进行检测,原位杂交法在RNA水平进行检测. 结果 Westen blotting显示人子宫颈鳞癌组织ANXA5比人正常子宫颈组织表达增强;免疫组织化学及原位杂交均显示人子宫颈癌组织中ANXA5的染色比人正常子宫颈组织染色重,阳性信号分布于细胞质和细胞膜. 结论 ANXA5在人子宫颈鳞癌组织中的表达比在人正常子宫颈组织中的表达增高;ANXA5与人子宫颈鳞癌的发生有密切联系.
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膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响.方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响.结果 干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P＜0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P＜0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P＜0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P＜0.05).结论 靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力.
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宫颈鳞癌患者血清膜联蛋白A5含量的检测及其临床意义
目的 检测膜联蛋白A5(ANXA5)在人宫颈鳞癌患者外周血中的含量改变,探讨ANXA5作为宫颈癌诊断标志物的可行性.方法 收集人宫颈鳞癌患者外周血清48例和正常育龄妇女外周血清38例,低速离心取上清,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测血清中ANXA5和鳞状细胞癌抗原(SCCAg)的含量;离心后取红细胞行RT-PCR进行患者与正常组ANXA5表达的检测.组间检验采用t检验;并进行肿瘤患者中ANXA5与SCCAg的相关性分析.结果 宫颈鳞癌患者血清中ANXA5的含量均比正常人显著增多,血细胞中ANXA5 mRNA的表达显著增多,差异有显著性(P<0.05);SCCAg在肿瘤组中的含量同样显著高于正常组(P<0.05);ANXA5与SCCAg具有明显的相关性,但ANXA5的阳性率大于SCCAg.结论 ANXA5在宫颈鳞癌患者外周血中含量增高,特异性和敏感性较高,可作为临床诊断和预后宫颈鳞癌的备选标志物.
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膜联蛋白A5在不同临床分期的宫颈鳞癌组织中的表达
目的 检测膜联蛋白A5(ANXA5)在临床不同分期的宫颈癌组织中的表达差异,探讨膜联蛋白A5作为宫颈鳞癌分期标志物的可行性.方法 采用国际妇产科协会(FIGO)的国际分期法,将病例分为Ⅰ期26例,Ⅱ期20例,Ⅲ期14例.用RT-PCR检测RNA水平ANXA5的表达情况;用Western blotting法和免疫组织化学法检测蛋白水平ANXA5的表达.组间结果采用t检验进行两两比较.结果 RT-PCR结果显示,随着临床分期增高,ANXA5 mRNA表达也增高,且3个分期的癌组织任意两组间差异均有显著性(P <0.05);Western blotting结果显示,Ⅰ期癌组织ANXA5的表达显著低于Ⅱ期和Ⅲ期癌组织(P<0.05);Ⅱ期和Ⅲ期癌组织ANXA5的表达没有显著性差异(P > 0.05).结论 随着宫颈鳞癌组织临床分期的增高,膜联蛋白A5的表达也增高,具有宫颈鳞癌临床分期标志物的潜在可能.
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敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响
目的 探讨敲低膜联蛋白A5(ANXA5) 对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响.方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂.转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Realtime PCR和Western bloting检测各组p21cip1 mRNA和P21cip1的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1(cyclinD1) 蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况.结果 敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21cip1mRNA和P21cip1蛋白均显著降低(P＜0.05) , cyclinD1(P＜0.05) 也显著降低.结论 敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21cip1mRNA和P21cip1蛋白以及cyclinD1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展.
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膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖与凋亡的影响
目的 观察宫颈癌细胞系HeLa细胞在膜联蛋白A5表达降低后,细胞增殖和凋亡的情况. 方法 采用BNA干扰的方法,通过免疫印迹法筛选出对HeLa细胞中膜联蛋白A5的表达抑制效率高的siRNA,脂质体法将siRNA转染入细胞48h后,用MTT法检测细胞增殖的改变情况,用细胞凋亡光学检测试剂盒检测细胞的凋亡.结果 Helm细胞中膜联蛋白A5的表达被显著抑制,其增殖速度与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,无显著性差异;细胞凋亡显著减少,与未转染siRNA的普通HeLa细胞相比,有显著性差异. 结论 膜联蛋白A5低表达对宫颈癌细胞系HeLa细胞的增殖未见显著影响,但可能影响了细胞的凋亡.
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膜联蛋白A5重组质粒的构建及其过表达对SiHa细胞增殖的影响
目的 构建膜联蛋白A5(ANXA5)重组质粒并探讨过表达ANXA5对宫颈癌SiHa细胞的增殖产生的影响. 方法 将ANXA5基因克隆入含His标签的pcDNA3.1质粒载体,构建pcDNA3.1-ANXA5重组质粒;用磷酸钙共沉淀法将重组质粒和pcDNA3.1空质粒分别转染宫颈癌细胞系SiHa细胞,G418加压培养,免疫印迹法筛选过表达ANXA5的细胞克隆,免疫组织化学筛选已转染pcDNA3.1空质粒的细胞克隆;将过表达ANXA5蛋白的细胞、载有pcDNA3.1空质粒的细胞以及未处理的SiHa细胞分别进行四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)实验和CCK-8实验检测细胞增殖情况. 结果 成功构建了peDNA3.1-ANXA5重组质粒,测序证实ANXA5基因序列正确;普通未处理的SiHa细胞和转染了pcDNA3.1空质粒的SiHa细胞生长速度较快,两组同无显著性差异(P>0.05);过表达ANXA5的SiHa细胞其增殖速度比前两组显著降低(P<0.05). 结论 膜联蛋白A5可能对宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖具有抑制作用.
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胃癌多药耐药蛋白的相互作用蛋白鉴定及分子机制
目的:研究多药耐药蛋白(multidrug resistance protein,MRP)的相互作用蛋白及其对肿瘤耐药性的影响.方法:采用免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定MRP的相互作用蛋白,并对其中的耐药相关蛋白之一Annexin A5进行功能研究,Western blot及siRNA干扰技术分析MRP、Annexin A5 蛋白表达的变化、相关性及胃癌SGC-7901细胞的耐药性变化.结果:经免疫沉淀结合质谱方法分离鉴定发现了14个MRP的相互作用蛋白,其中Annexin A5为其中得分高的蛋白;Western blot检测显示耐药细胞株SGC-7901/DDP中MRP、Annexin A5蛋白表达均高于SGC-7901和siRNA-SGC-7901/DDP,siRNA干扰Annexin A5表达后,siRNA-SGC-7901/DDP中MRP 蛋白表达下调,MRP、Annexin A5蛋白在SGC-7901和siRNA-S GC-7901/D DP-之间表达无明显差异;MTT法结果显示经siRNA干扰SGC-7901/DDP后,顺铂、5-Fu和紫杉醇作用后的IC50值明显减少,对其的敏感性分别增加了36倍、17倍和4倍.结论:Annexin A5表达与胃癌细胞耐药有关,是MRP的相互作用蛋白之一.
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膜联蛋白在动脉粥样硬化中的研究进展
膜联蛋白亦称为钙磷脂结合蛋白,是一类钙离子依赖的膜磷脂结合蛋白超家族,其家族各成员主要以四聚体的结构形式存在,并具有极高的同源性.虽然膜联蛋白是依赖于钙离子的调节蛋白,但一些家族成员还受到酸碱度的调节而发生结构改变.膜联蛋白的编码基因具有高度保守性,首先发现于脊椎动物体内,随后发现,膜联蛋白基因广泛存在于原核和真核生物体内[1].膜联蛋白早用于研究钙通道的结构,进而又发现其参与生物膜的形成、信号传导、抗炎以及调控细胞迁移和凋亡等生物学过程[2].在动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的过程中,膜联蛋白家族的3个成员膜联蛋白A1、膜联蛋白A2和膜联蛋白A5发挥了主要作用,现就这3种膜联蛋白和AS发生、发展的关系加以综述[3-4].
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超敏C反应蛋白和人谷胱甘肽硫转移酶Pi及膜联蛋白A5在老年陈旧性心肌梗死患者的表达及临床意义
目的 研究陈旧性心肌梗死老年患者循环超敏C-反应蛋白(high-sensitivity C-reactive protein,hs-CRP)、人谷胱甘肽硫转移酶Pi(glutathione S-transferase Pi,GSTPi)和膜联蛋白A5(annexin A5,AnxA5)水平的变化.方法 前瞻性研究,连续入选2012年12月至2015年11月老年陈旧性心肌梗死患者185例.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测GSTPi和AnxA5水平的变化,应用免疫散射比浊法测定hs-CRP的水平.结果 随老年陈旧性心肌梗死患者冠状动脉狭窄程度的加重,GSTPi水平下降,AnxA5和hs-CRP水平升高.冠状动脉狭窄＞95％组GSTPi(190.0±37.0)μg/L、AnxA5(33.9±4.0) μg/L、hs-CRP(15.3±1.3) mg/L,与冠状动脉狭窄55％～65％组GSTPi (289.0±86.0)μg/L、AnxA5 (8.1±2.9)μg/L、hs-CRP(5.9±0.8)mg/L比较,差异有统计学意义(均P＜0.01);左心室射血分数(LVEF) 45％～54％组GSTPi(219.0±61.0)μg/L、AnxA5(12.9±3.9)μg/L、hs-CRP(10.1±1.0) mg/L,与LVEF＜30％组GSTPi(198.0±39.0) μg/L、AnxA(538.9±5.10)μg/L、hs-CRP(17.9±1.9)mg/L比较,差异有统计学意义(均P＜0.01);NYHA Ⅰ级组GSTPi、AnxA5、hs-CRP与NYHAⅣ级组比较,差异有统计学意义(均p＜0.01).结论 GSTPi、AnxA5和hs-CRP水平的变化可能影响老年陈旧性心肌梗死患者冠状动脉狭窄和心力衰竭的严重程度.
关键词： 谷胱甘肽S-转移酶pi 膜联蛋白A5 C反应蛋白质 心肌梗死 -
99Tcm-Annexin B1探测荷瘤鼠化疗后肿瘤细胞凋亡的实验观察
目的:探讨99Tcm-Annexin B1探测化疗后肿瘤细胞凋亡的潜力与可行性.方法:乳腺癌细胞MDA-MB-435荷瘤小鼠经大剂量(30 mg/kg)紫杉醇单次化疗后,注射99Tcm-Annexin B1,计算化疗后不同时间(0、5、10、15、20和25 h)每克肿瘤组织摄取99Tcm-Annexin B1的百分注射剂量率(%ID/g).内瘤细胞W256荷瘤大鼠经大剂量(200 mg/kg)环磷酰胺单次化疗后24 h注射99Tcm-Annexin B1,对照组荷瘤大鼠注射生理盐水;行SPECT平面显像观察肿瘤摄取情况.结果:乳腺癌荷瘤小鼠化疗后15 h,肿瘤摄取99Tcm-Annexin B1达高峰,由0 h的(0.15±0.013)%ID/g上升至(0.22±0.026)%ID/g.肿瘤对99Tcm-An-nexin B1的摄取与肿瘤细胞凋亡指数(AI)具有相关性,r=0.88,P<0.01.W256细胞荷瘤大鼠化疗后24 h显像发现,肿瘤时99Tcm-Annexin B1的摄取较对照荷瘤大鼠显著升高,对照组的肿瘤与非肿瘤摄取比值(T/B)为1.39±0.21,化疗组为2.57±0.43.结论:99Tcm-Annexin B1对探测化疗后肿瘤细胞凋亡具有潜力与可行性.
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Annexin A5基因沉默对Hep-2细胞凋亡的影响
目的 探索annexinA5基因及其表达沉默后对人喉癌Hep-2细胞凋亡的影响.方法 培养人喉癌细胞Hep-2,经Lip2000转染特异siRNA片段沉默annexin A5基因;TRlzol法提取细胞总RNA;RT-PCR法检测annexinA5在mRNA水平的表达是否降低;Western blot法检测annexin A5的蛋白表达是否下降;经流式细胞仪AnnexinV-FITC法检测annexin A5基因沉默后的人喉癌Hep-2细胞的凋亡情况.采用SPSS 13.0软件对数据进行单因素方差分析.结果 特异siRNA片段成功转入Hep-2细胞;RT-PCR结果显示实验siRNA组、阴性siRNA组、脂质体组及空白细胞组的相对灰度值为0.70±0.03、1.18±0.05、1.17±0.06及1.23±0.07;经统计学分析表明实验组annexin A5在mRNA水平的灰度明显弱于阴性siRNA组(t=-14.77)、脂质体组(t=-13.23)及空白细胞组(t=-12.99),P值均＜0.05;Western blot结果显示实验siRNA组、阴性siRNA组、脂质体组及空白细胞组的相对灰度值为1.21±0.03、3.88±0.06、3.87±0.02及3.95±0.08;统计学分析表明annexin A5的蛋白的相对灰度值明显弱于阴性siRNA组(t=-70.34)、脂质体组(t=-150.62)及空白细胞组(t=-56.32),P值均＜0.05;AnnexinV-FITC法结果当annexin A5基因沉默后,人喉癌细胞Hep-2凋亡率实验siRNA组、阴性siRNA组、脂质体组及空白细胞组分别为4.43％±0.12％、13.67％±0.22％、13.66％±0.12％及13.35％±0.13％,实验组细胞凋亡率较阴性siRNA组(t=-62.50)、脂质体组(t=-14.16)及空白细胞组(t=-11.47)明显降低,P值均＜0.05.结论 在人喉癌Hep-2细胞中,annexin A5可能促进凋亡,有可能成为喉癌诊断、治疗及预后的新的生物靶标.
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乳腺癌组织EphA7蛋白和膜联蛋白A5的水平研究
目的：探讨乳腺癌组织中Eph基因家族A 7蛋白（EphA 7）和膜联蛋白A 5（ANXA 5）的表达水平及临床意义。方法采用免疫印迹法检测84例乳腺癌组织及对应癌旁组织的EphA 7和ANXA 5蛋白水平，分析两者的相关性及与乳腺癌不同临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织中EphA 7和ANXA 5的蛋白水平均高于癌旁组织（P<0.05），且乳腺癌组织中两者的蛋白水平在瘤体直径、临床分期及脉管癌栓上的分布均有统计学差异，且“瘤体直径>2 cm”、“临床分期为Ⅲ+Ⅳ”、及“伴有脉管癌栓”的水平较高（P<0.05）；不同淋巴结转移情况的EphA 7蛋白水平差异有统计学意义；乳腺癌组织中EphA 7和ANXA 5的蛋白水平呈正相关（r=0.715,P<0.05）。结论乳腺癌组织中EphA 7和ANXA 5的蛋白水平较高，且与肿瘤的发生发展密切相关，有可能成为乳腺癌诊断、治疗及预后预测的重要指标。
关键词： 乳腺癌组织 Eph基因家族A7蛋白 膜联蛋白A5 临床意义 -
膜联蛋白A5水平检测在妊娠中期胎儿宫内生长受限诊断中的应用研究
目的 研究膜联蛋白A5水平检测在妊娠中期胎儿宫内生长受限诊断中的应用价值.方法 以137例孕15～24周的孕妇为研究对象,行羊膜腔穿刺,获取羊水标本,行ELISA检测,确定膜联蛋白A5的水平.根据是否发生胎儿宫内生长受限及膜联蛋白A5表达水平是否＞20 ng/L进行分组:①以出现胎儿宫内生长受限为观察A组(n=27),其余为对照A组(n=110),比较两组的膜联蛋白A5水平;②以膜联蛋白A5水平表达水平＞20 ng/L为观察B组(n=92),其余为对照B组(n=45),比较两组的胎儿宫内生长受限率.结果 观察A组的膜联蛋白A5表达水平为(26.54±2.77)ng/L,明显高于对照A组的(19.42±2.21)ng/L,差异有统计学意义(t=14.2384,P＜0.01).观察B组出现胎儿宫内生长受限24例,占26.1％(24/92),而对照B组出现3例,占6.7％ (3/45),观察B组的胎儿宫内生长受限率明显高于对照B组,差异有统计学意义(x2=7.2024,P＜0.01).结论 膜联蛋白A5的表达水平与妊娠中期胎儿宫内生长受限存在直接关系,对于该蛋白表达水平＞20 ng/L的孕妇,需要重点预防胎儿宫内生长受限的发生.
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膜联蛋白A5-1C/T基因多态性与煤工尘肺易感性
目的 探讨AnnexinA5基因多态性(-1C/T)在煤工尘肺患者发病遗传易感性中的作用.方法 采用病例-对照研究方法,选择470例汉族煤工尘肺病例为观察对象,428例汉族煤尘接触者为对照,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测AnnexinA5-1C/T位点的基因多态性,分析多态位点与煤工尘肺的关系.结果 煤工尘肺组与对照组各基因型分布频率差异无统计学意义(P＞0.05).调整年龄及吸烟混杂因素后,以CC基因型为参比,粉尘暴露时间较长(≥27年)且携带CT/TT基因型者患煤工尘肺的危险性降低(P=0.039),OR值为0.65 (95％CI:0.44～0.98)；对Ⅱ期煤工尘肺病例,调整了年龄、接尘工龄和吸烟率后,携带CT/TT等位基因的个体患煤工尘肺的危险性降低(P±0.028),OR值为0.55 (95％CI:0.34～0.90).结论 AnnexinA5-1C/T多态性位点可能影响中国汉族人群煤工尘肺的发生.
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膜联蛋白A5在人宫颈鳞癌不同分化型的表达及临床意义
目的:检测膜联蛋白A5(ANXA5)在不同分化的宫颈癌细胞中的表达差异,探讨其作为宫颈鳞癌组织分化标志物的可行性.方法:将收集的宫颈鳞癌组织52例HE染色后分为高分化型12例,中分化型25例,低分化型15例.RT-PCR法和Western Blot法分别在mRNA转录水平和蛋白水平检测ANXA5在各分化型宫颈鳞癌的表达情况；用免疫组织化学法对其在细胞内的定位以及表达量进行检测.结果:随着癌细胞分化从高到低,ANXA5在mRNA水平的表达逐渐增高,且组间多重比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).在蛋白水平,高分化型组表达低于中、低分化型组(均P＜0.01),中、低分化组之间差异无统计学意义(P＞0.05).ANXA5主要定位于宫颈癌细胞的细胞质中.结论:ANXA5具有作为临床宫颈癌细胞分化标志物的潜在可能.
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重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞员伤时p-PKCα和p120-catenin表达的影响
目的 评价重组人膜联蛋白A5对内毒素诱发心肌细胞损伤时磷酸化蛋白激酶Cα(p-PKCα)和p120-catenin表达的影响.方法 体外培养H9c2心肌细胞,采用随机数字表法分为3组(n=18):对照组(C组)、内毒素组(L组)和重组人膜联蛋白A5组(A组).A组加入重组人膜联蛋白A5(终浓度5 ng/ml)孵育2h,然后L组和A组给予内毒素(终浓度1μg/ml)孵育.于孵育4h时,采用凋亡试剂盒检测细胞凋亡率,免疫共聚焦法测定细胞间隙,采用Western blot法测定p-PKCα和p120-catenin的表达.结果 与C组比较,L组细胞凋亡率升高,细胞间隙增加,p120-catenin表达下调,p-PKCα表达上调(P＜0.05);与L组比较,A组细胞凋亡率降低,细胞间隙减少,p120-catenin表达上调,p-PKCα表达下调(P＜0.05).结论 重组人膜联蛋白A5可抑制PKCα磷酸化,进而上调p120-catenin表达,减轻内毒素诱发的心肌细胞损伤.
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膜联蛋白A5真核表达质粒的构建
目的:构建在哺乳动物细胞中表达的膜联蛋白A5(anxA5)的重组质粒.方法:Trizol法从人胎盘中抽提细胞总RNA,RT-PCR法反转录为cDNA,以cDNA为模板,扩增膜联蛋白A5的基因序列,引入酶切位点XhoI和BamHI.将真核表达载体pEGFP-N1和anxA5的PCR产物分别双酶切后用T4连接酶连接,转化大肠杆菌后抽质粒,测序鉴定.结果:重组质粒测序后,与genebank中anxA5的mRNA进行比对,证明anxA5基因序列正确,质粒构建成功.结论:成功构建了pEGFP-anxA5重组质粒,为研究膜联蛋白A5的功能及其在细胞系中的作用奠定了基础.
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膜联蛋白A 5在宫颈癌细胞系中的表达
目的:检测膜联蛋白A5(ANXA5)在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中的表达,为研究ANXA5在宫颈癌中的作用奠定基础.方法:采用Western blot和ABC免疫组化法在蛋白水平检测ANXA5的表达.结果:在Hela细胞和SiHa细胞中均检测到了ANXA5的表达,阳性产物位于细胞浆,少数细胞在胞膜和胞核上也有表达.结论:ANXA5在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中均有表达.
