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EIF5A2在肿瘤中的作用研究进展
真核细胞翻译起始因子5A2(EIF5A2)是EIF5A家族中高度进化保守的基因之一.EIF5A2作为可能的癌基因在多种人类上皮源性肿瘤内呈高表达,并与肿瘤的分期和/或预后不佳相关.EIF5A2通过多种机制诱导肿瘤发生上皮间质转化进而促进肿瘤侵袭转移.EIF5A-MTA1/C-MYC轴可能是上皮源性肿瘤发生侵袭转移的重要调控通路之一.相关分子机制尚需进一步研究.
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构建EIF5 A2基因敲除Cal27细胞株及功能分析
目的 运用CRISPR/Cas9技术构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞系,观察EIF5A2在口腔鳞状细胞癌增殖与迁移中的作用.方法 根据EIF5A2基因结构域,设计2个CRISPR靶向位点,利用pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin构建2个导向RNA(sgRNA)质粒.将sgRNA质粒与pST1374-NLS-flag-linker-Cas9共转染至Cal27细胞中,用嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选,并挑取单克隆.将单克隆细胞的DNA进行目的片段扩增,经凝胶电泳及测序鉴定后筛选出大片段敲除细胞株Cal27-2C5及碱基突变株Cal27-2D1.real time PCR及WesternBlot鉴定两株细胞系中EIF5A2的表达情况.用Transwell实验及CCK8分别检测EIF5A2敲除对Cal27细胞的体外迁移能力及体外增殖能力的影响.结果 与对照组相比,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2在mRNA水平上表达均明显降低.在蛋白水平上,Cal27-2C5及Cal27-2D1细胞株中EIF5A2蛋白均基本不表达.敲除EIF5A2可明显降低Cal27细胞的体外迁移能力,而对Cal27细胞体外增殖能力没有明显影响.结论 成功构建EIF5A2基因敲除Cal27细胞株Cal27-2C5和Cal27-2D1,并初步验证EIF5A2可以影响Cal27细胞的体外迁移能力.
关键词： EIF5A2 CRISPR/Cas9 口腔鳞状细胞癌 基因敲除 迁移 -
EIF5A2基因在不同发育时期人胎盘绒毛膜中的定位表达及意义
目的 探讨EIF5A2 (eukaryotic transla-tion initiation factor 5A2)癌基因在人胎盘绒毛膜中表达及其定位. 方法 收集孕早期(8±周)绒毛膜、孕中期(20 ±周)及足月(38 ±周)胎盘组织,应用RT-PCR和Western blot及免疫组织化学等方法,从分子水平及蛋白水平检测EIF5A2在不同时段胎盘组织中的表达及定位. 结果 RT-PCR及Western blot检测结果显示各期胎盘组织中均有EIF5A2 mRNA及蛋白表达,孕中期达峰值,足月胎盘EIF5A2表达显著下降(P＜0.05);免疫组化结果显示孕早期绒毛膜中EIF5A2定位表达于合体滋养层及细胞滋养层细胞胞质,孕中期胎盘组织中EIF5A2主要表达于细胞滋养层,合体滋养层表达较弱,分娩期胎盘部分合体滋养层细胞内可见微弱的EIF5A2表达. 结论 EIF5A2在不同时段人绒毛膜、胎盘组织中均有表达,定位于胎盘绒毛膜合体滋养层及细胞滋养层细胞胞质,其表达丰度及优势表达细胞类别在不同孕期存在差异.
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子宫内膜样腺癌患者癌组织白细胞分化抗原147、真核翻译起始因子3 h和5 A2表达及意义
目的：研究子宫内膜样腺癌患者癌组织白细胞分化抗原（CD）147、真核翻译起始因子（EIF）3h和5A2表达及三者在判断肿瘤生物学行为中的作用。方法142例子宫内膜样腺癌根治手术后的肿瘤组织为观察组，97例复杂性增生的子宫内膜组织为对照组，97例单纯性增生的子宫内膜组织为正常对照组。采用免疫组化方法检测CD147、EIF3h和5A2蛋白表达。结果3组CD147、EIF3h和5A2阳性表达率差别显著。观察组CD147、EIF3h和5A2阳性表达率与肿瘤大径、肌层浸润深度、淋巴结转移及是否累犯宫颈管密切相关。观察组EIF3h和5A2表达呈正相关。结论子宫内膜样腺癌患者术后组织CD147、EIF3h和5A2高表达对肿瘤发生和进展有重要作用，EIF3h和5A2可能具有正向协同作用。
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GC7通过抑制eIF5A2活性增强槐耳醇提取物对胃癌细胞的增殖抑制作用
目的 研究真核翻译起始因子5A2(eIF5A2)蛋白在槐耳醇提取物对胃癌细胞的增殖抑制中的作用与机制,探讨eIF52A特异性激活抑制剂Deoxyhypusine Synthase Inhibitor(GC7)对胃癌细胞的细胞毒性及GC7联合槐耳醇提取物对胃癌细胞的增殖抑制作用,提高槐耳醇提取物对胃癌细胞的增殖抑制作用.方法 选用四种胃癌细胞株MGC-803、BGC-823、AGS、HGC-27,通过CCK-8实验检测槐耳醇提取物和/或GC7作用胃癌细胞后,对细胞的增殖抑制作用;通过Western blot实验检测细胞中eIF52A蛋白的变化.结果 槐耳醇提取物对不同胃癌细胞的增殖抑制作用存在差异;eIF5A2蛋白在胃癌细胞中普遍表达且表达量存在差异,在槐耳醇提取物处理胃癌细胞后其表达量上调(P<0.05);低浓度的GC7不抑制胃癌细胞的增殖(P>0.05).结论 槐耳醇提取物提高胃癌细胞中Eif5A2的表达量(P<0.05);GC7抑制胃癌细胞中的eIF5A2活性后,能明显提高槐耳醇提取物对胃癌细胞BGC-823、AGS和HGC-27的增殖抑制作用(P<0.05).
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食管癌中真核翻译起始因子5A2的表达及与预后的相关性
[目的]探讨真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及其临床意义.[方法]运用免疫组化方法,检测EIF5A2蛋白在135例食管鳞状细胞癌中的表达水平,分析其与临床病理参数之间的相关性及其预后价值.[结果]在135例ESCC患者中高表达68例,Pearson's卡方检验结果显示EIF5A2在ESCC中的表达水平与T分期(P=0.006)、淋巴结转移(P=0.031)、临床分期(P=0.026)显著相关;Cox比例风险模型分析EIF5A2是ESCC患者的独立预后危险因素;Kaplan-Meier分析结果显示,低表达组患者中位生存时间72.5个月,显著高于高表达组患者的中位生存时间51.7个月(P＜0.05).[结论]EIF5A2的过表达可能促进ESCC发生与发展而且是ESCC患者预后不良的标记物.
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MicroRNA 203对胃癌中EIF5A2表达的影响
目的:研究microRNA 203(miR-203)对胃癌EIF5A2表达的影响,为进一步阐明miR-203与胃癌的关系提供理论基础.方法:分别应用免疫荧光化学和免疫组织化学检测胃癌细胞和组织中EIF5A2的表达;脂质体miR-203转染干预胃癌细胞后,Real time PCR和Western blot检测细胞中EIF5A2 mRNA和蛋白的表达情况.结果:胃癌细胞株SGC7901胞浆中大量表达EIF5A2蛋白,而细胞核中表达较少;胃癌组织中EIF5A2的表达量明显升高;EIF5A2的表达在脂质体miR-203转染干预胃癌细胞后明显受到抑制.结论:胃癌细胞和组织中存在EIF5A2的表达,且miR-203显著抑制了EIF5A2的表达.
关键词： microRNA203 胃癌 EIF5A2
