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膜联蛋白A5低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响
目的 探讨膜联蛋白A5(ANXA5)低表达对人宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭的影响.方法 将细胞分为干扰组、阴性对照组、转染试剂对照组和空白对照组,采用脂质体转染法将siRNA转染干扰组HeLa细胞,在转染72h后采用RT-PCR和Western blotting检测各组ANXA5的表达以鉴定抑制效率;细胞划痕实验检测各组HeLa细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组HeLa细胞的侵袭能力;RT-PCR和Western blotting分别检测ANXA5低表达对E-钙黏蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-9 mRNA及蛋白表达的影响.结果 干扰组ANXA5蛋白及mRNA的表达均明显低于阴性对照组(P＜0.05);其表达均被显著抑制,干扰组细胞的迁移及侵袭能力比阴性对照组明显增强(P＜0.05),E-cadherin mRNA及蛋白的表达显著低于阴性对照组(P＜0.05);干扰组MMP-9mRNA及蛋白的表达均显著高于阴性对照组(P＜0.05).结论 靶向ANXA5的siRNA可有效抑制ANXA5的表达,且ANXA5低表达可能通过影响E-cadherin和MMP-9的表达来促进HeLa细胞的迁移和侵袭能力.
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胃液microRNA-133a在胃癌诊断和预后评估中的作用
目的 探讨胃液中microRNA-133a(MiR-133a)低表达是否与胃癌的进展和预后相关.方法 采集236例患者的胃液和胃黏膜样品,包括34例健康对照和202例胃癌样本,调查胃液中MiR-133a水平与胃癌的进展以及预后评估之间的相关性.通过Transwell小室实验和划痕实验观察胃癌细胞侵袭和迁移能力的变化.结果 胃癌患者胃液和癌组织中的MiR-133a水平显著下调,下调幅度与肿瘤分级、T分期和远处转移存在相关性.MiR-133a可显著抑制SGC-7901胃癌细胞的侵袭和迁移能力.结论 胃液中MiR-133a低表达与胃癌发展进程和不良临床后果呈现较高相关性,提示胃液中MiR-133a水平可以作为该疾病的进展和预后的鉴别指标.
关键词： microRNA-133a 胃液 胃癌 Transwell实验 划痕实验 人 -
上调miRNA-100对胃癌SGC-7901细胞侵袭和转移的影响
目的 探讨微小核糖核酸(miRNA)-100对人胃癌SGC-7901细胞侵袭、转移能力的影响.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,将细胞分为空白对照组、阴性对照组和miRNA-100转染组.应用脂质体法,miRNA-100转染组、阴性对照组分别用构建的miRNA模拟物、阴性对照转染SGC-7901细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞中miRNA-100的表达水平,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Tranwell实验检测细胞的侵袭能力.结果 RT-PCR结果显示,miRNA-100转染组miRNA-100的表达量明显高于空白对照组和阴性对照组(P均＜0.05).细胞划痕实验显示,与空白对照组及阴性对照组比较,24 h和48 h时miRNA-100组周边细胞迁移至中央划痕区的距离明显增大,差异有统计学意义(P均＜0.01).Transwell实验显示,与空白对照组和阴性对照组相比,转染miRNA-100后,穿越小室的SGC-7901细胞数目明显减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 转染miRNA-100可使SGC-7901细胞的迁移能力明显降低、细胞的侵袭能力被抑制,上调miRNA-100能抑制人胃癌SGC-7901细胞的侵袭、转移能力.
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KISS1基因激活ERK1/2磷酸化通路抑制鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的研究
目的:探讨KISS1及其受体基因KISS1-R在ERK1/2磷酸化通路中调节鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的分子机制.方法:采用实时荧光定量PCR以及蛋白免疫印迹技术,检测KISS1、KISS1-R基因、黏着斑激酶(FAK)的表达;验证ERK1/2信号通路的磷酸化激活,EZR蛋白的表达与鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的关系.构建过表达KISS1及KISS1-R基因载体,通过划痕实验及Transwell实验分析过表达KISS1(SUNE-KISS1)及KISS1-R(SUNE-1R)基因对SUNE-1-5-8F鼻咽癌细胞系的迁移能力的影响.通过蛋白免疫印迹技术,检测在过表达KISS1及KISS1-R基因后,磷酸化FAK(p-FAK)和磷酸化ERK(p-ERK)以及EZR蛋白的表达水平.通过阻断ERK1/2通路的磷酸化激活,验证KISS1及KISS1-R基因对鼻咽癌细胞迁移能力的影响,以及对细胞转移相关蛋白p-FAK、EZR表达量的影响.后,通过siRNA抑制KISS1基因表达,进一步验证KISS1基因对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的调控作用.结果:实时荧光定量PCR实验发现,KISS1基因在SUNE-1-6-10B细胞中表达量相对于SUNE-1-5-8F细胞中较高.蛋白免疫印迹分析发现,KISS1及KISS1-R的蛋白表达量,以及p-FAK的表达量与鼻咽癌细胞转移能力呈负相关;EZR与鼻咽癌细胞转移能力呈正相关关系.划痕及Transwell实验分析发现,过表达KISS1及KISS1-R基因均能够有效抑制SUNE-1-5-8F细胞的迁移和侵袭能力.蛋白免疫印迹分析发现,过表达KISS1及KISS1-R基因能增加p-FAK及p-ERK1/2的蛋白表达量,抑制EZR蛋白的表达.加入ERK1/2通路特异性的阻断剂PD98059后,由过表达KISS1及KISS1-R基因引起的细胞迁移和侵袭的抑制状态被阻断.同时,由过表达KISS1及KISS1-R引起的p-FAK与p-ERK1/2的上调,EZR的下调均被恢复.通过siRNA的干扰,抑制了KISS1基因表达,从而引起SUNE-1-5-8F细胞的迁移和侵袭能力的增加.结论:过表达KISS1基因可以显著抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力;同时,通过siRNA干扰KISS1基因的表达,能够增加鼻咽癌细胞的迁移能力.KISS1及KISS1-R基因通过磷酸化激活ERK1/2通路,进一步激活p-FAK并抑制EZR表达,从而抑制鼻咽癌细胞的迁移和侵袭能力.
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MiR-29 c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响
目的：观察miR-29c在具有不同转移能力的F4和F5M2细胞系中的表达差异；研究miR-29c模拟物对骨肉瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：利用qRT-PCR技术检测F4与F5M2间miR-29c的表达差异；将骨肉瘤细胞F5M2分为3组，运用细胞转染技术分别对两组转染miR-29c模拟物、模拟物阴性对照，第3组不作处理，随后用qRT-PCR技术检测3组间miR-29c的表达差异。Transwell法检测3组不同处理的F5M2细胞的侵袭和迁移能力是否存在差异。结果：MiR-29c在F4和F5M2细胞系中表达差异显著，miR-29c在高转移性的F5M2细胞中表达水平显著下降。与阴性对照组和空白组相比，转染miR-29c模拟物的F5M2细胞侵袭和迁移能力均明显减弱，且差异具有统计学意义（ p<0.05）。结论：MiR-29c在高转移性骨肉瘤细胞中低表达，且miR-29c模拟物具有抑制骨肉瘤细胞侵袭和转移的作用。MiR-29c有可能作为骨肉瘤转移基因治疗的一个新靶点。
