首页 > 文献资料
-
乳酸杆菌对HeLa细胞免疫标志表达和效应影响的初步研究
乳酸杆菌是女性生殖道的主体益生菌,我们发现经热灭活的乳酸杆菌对宫颈癌细胞系HeLa细胞具有较强的黏附性.现已证实低表达MHCⅠ类分子或缺乏共刺激分子进而逃逸宿主的免疫监视是肿瘤细胞的重要特征,因此,提高肿瘤细胞的免疫原性,回复机体对肿瘤细胞的免疫监视功能是抗肿瘤治疗的重要策略.
-
纳米金材料放射增敏作用的研究进展
纳米金（ GNPs）是一种新型纳米材料，现被广泛用于各个学科的研究。在医学领域，GNPs材料在肿瘤诊断与治疗方面的研究已成为热点，其放射增敏作用在国内外已有一些文献报道。Herold等［1］发现将GNPs颗粒与肿瘤细胞混合或注射至肿瘤组织中，使用光子束照射后，与对照组比较，表明GNPs能够增加生物有效剂量，首次发现了GNPs材料的放射增敏作用。而近年来随着GNPs微粒研究的深入，放射增敏相关的研究也越来越多。研究者发现GNPs在MCF-7乳腺癌细胞系［2］、DU-145前列腺癌细胞系［3］和HeLa宫颈癌细胞系［4］等和一些肿瘤动物模型［5］中均具有放射增敏现象。目前研究表明GNPs这一新型材料相较一些常用的化学增敏剂，如氟尿嘧啶［6］、吉西他滨［7］等，不仅具有良好的放射增敏效果，而且可以作为抗肿瘤药物的载体，为肿瘤治疗的靶向性和高效性提供条件。本文就GNPs材料放射增敏的研究进展作一综述。
-
光动力疗法诱导Hela细胞凋亡的实验研究
资料与方法1 一般资料1.1 准备工作:细胞复苏、培养、传代、冻存:人宫颈癌细胞系Hela为贴壁细胞,从液氮中取出冻存的细胞后立即置于37℃水浴中融解.
-
HDAC6小分子RNA对子宫颈癌HeLa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制
宫颈癌的发生位居女性肿瘤的第3位,每年全球范围大约有371 200例新病例被诊断,由于其高达51％的病死率而成为公众关注的健康问题[1].然而,目前对于宫颈癌的治疗主要是基于铂类药物为基础的化疗以及手术和放疗,这些治疗的效果十分有限[2].组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)6属于Ⅱ型HDAC家族,在所有的18个HDAC家族成员中,HDAC6具有独特的结构和生物学特性,即具有两个功能性的去乙酰化结构域和一个锌指基序,这两个功能性的去乙酯化结构域是HDAC6发挥生物学活性所必需的[3-4].目前,越来越多的研究显示,HDAC6与肿瘤的发生、发展关系密切,包括卵巢癌[5]、小儿急性髓细胞样白血病[6]、神经母细胞瘤[7]、胃癌和结肠癌[8]等.本研究利用RNA干扰技术探讨HDAC6表达下调对宫颈癌细胞系HeLa细胞增殖和细胞凋亡的影响,并初步探讨其相应的分子机制.
-
小剂量甲磺酸伊马替尼对缺氧的子宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响
缺氧是导致肿瘤细胞放疗抵抗的主要原因之一.缺氧在实体瘤中是一个常见的现象,实体瘤中缺氧细胞占10%～50%,对放射线有较强的抵抗,成为肿瘤放疗后复发和转移的潜在根源[1].甲磺酸伊马替尼(其他名称:格列卫)是一种高效特异的酪氨酸激酶抑制剂,通过阻止酪氨酸激酶受体如Bcr-Abl、血小板源性生长因子受体(PDGFR)、干细胞因子(c-Kit)等的自身磷酸化,影响细胞信号传导,从而影响肿瘤细胞的增殖、分化与凋亡.本研究将分子靶向药物--甲磺酸伊马替尼作用于正常和缺氧状态下的宫颈癌细胞系HeLa细胞,研究小剂量甲磺酸伊马替尼对于缺氧状态下HeLa细胞放射敏感性的影响及其作用机制,为甲磺酸伊马替尼进一步应用于宫颈癌的放射增敏治疗提供实验依据.
-
miR-203调控ΔNp63异常表达与子宫颈癌发生的关系
已知HPV特别是持续性高危型HPV（HR-HPV）感染是子宫颈癌发生的重要原因，尤以HPV16为常见[1]。然而， HPV并非导致子宫颈癌的唯一因素。近年来，HPV感染与微小RNA（miRNA）协同作用导致子宫颈癌的发生是研究者关注的焦点。其中，miRNA 203（miR-203）是近年发现的参与肿瘤发生、发展的重要miRNA，具有抑癌基因的作用[2-6]。本课题组的前期研究发现，miR-203在HPV16阳性的子宫颈癌组织中的表达与正常子宫颈组织相比下调；另在HPV16阳性的子宫颈癌细胞系Caski细胞中，使miR-203的表达上调或下调可引起细胞凋亡、增殖及迁移能力的改变。然而， miR-203在HPV16阳性子宫颈癌细胞中的靶基因及其作用机制鲜有报道。有研究提出，p63基因的ΔN异构体（ΔNp63）是miR-203的潜在靶基因。本研究就miR-203是否在HPV16阳性的子宫颈癌细胞中调控潜在靶基因ΔNp63异常表达进行研究，旨在探讨HPV16感染后导致子宫颈癌发生、发展的可能作用机制。
-
慢病毒介导的AQP8稳定表达对子宫颈癌SiHa细胞迁移能力的影响
水通道蛋白(aquaporins,AQP)是一个疏水的、小而完整的膜蛋白家族,广泛表达于动植物体内,相对分子质量约为30 000,迄今为止,哺乳动物体内共发现有13个AQP成员(AQP0～12)[1].研究提示,AQP作为一个关键因素直接参与人类恶性肿瘤的发生过程[2],与正常人绒毛滋养层细胞相比,AQP8在绒毛膜癌(绒癌)细胞系JAR细胞中表达异常上调,可能是导致绒癌发生的原因之一[3].肿瘤细胞的迁移是肿瘤浸润和转移的关键步骤.目前已报道至少有12种肿瘤细胞在人或鼠体内表达AQP.本研究使用红色荧光蛋白(RFP)标记的重组慢病毒载体将AQP8转染入宫颈癌细胞系SiHa细胞,建立稳定表达AQP8的SiHa细胞系,探讨AQP8对SiHa细胞体外迁移能力的影响.
-
miRNA-34a过表达对4种人宫颈癌细胞放射敏感性研究
目的 研究miRNA-34a过表达对4种人宫颈癌细胞放射敏感性的影响.方法 运用脂质体2000转染试剂盒将pGenesil-1-miRNA-34a表达质粒转染宫颈癌细胞系C33A、HeLa、SiHa和CaSki,通过G418筛选构建过表达miRNA-34a宫颈癌细胞系(miRNA-34a/C33A、miRNA-34a/HeLa、miRNA-34a/SiHa和miRNA-34a/CaSki).细胞经不同剂量60 Coγ射线照射;运用TaqManRT-PCR和蛋白印迹法测定细胞中miRNA-34a表达;运用MTT法和克隆形成实验分别测定细胞增殖抑制率和克隆形成能力,流式细胞仪测定细胞凋亡率和蛋白印迹法测定细胞凋亡相关蛋白表达变化.结果 宫颈癌细胞系中miRNA-34a表达量显著高于阴性对照组(P<0.05),过表达miRNA-34a宫颈癌细胞增殖抑制率显著高于阴性对照组(P<0.05),细胞克隆形成率显著低于阴性对照组(P<0.05).流式细胞仪结果显示过表达miRNA-34a宫颈癌细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05).蛋白印迹法结果显示4 Gy+过表达miRNA-34a细胞中cleaved caspase 9和cleaved PARP蛋白表达量高于过表达miRNA-34a细胞.结论 本研究成功构建miRNA-34a过表达宫颈癌细胞系,miRNA-34a过表达增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制与激活细胞凋亡通路有关.
-
沉默Ku86基因对Hela细胞放射敏感性影响
目的 探讨siRNA沉默Ku86基因表达对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响.方法 X射线照射后采用qRT-PCR、蛋白印迹法检测Ku86基因在Hela细胞中的表达水平,利用siRNA沉默Ku86基因表达.将si-NC、si-KU86转染到宫颈癌Hela细胞中,0、2、4、6、8、10 GyX射线照射.CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,克隆形成实验分析转染前后细胞放射敏感性变化,检测p53、Caspase-8表达分析沉默Ku86基因表达对放射诱导的细胞凋亡影响.结果 X线照射后Ku86 mRNA和蛋白表达水平上调,沉默Ku86表达降低了Hela细胞的增殖能力和克隆形成能力,放射增敏比为1.57.沉默Ku86表达上调了p53和Caspase-8表达,细胞凋亡增加.结论 siRNA沉默Ku86表达提高了宫颈癌Hela细胞的放射敏感性.
-
青蒿琥酯对体外人癌细胞HeLa、SACC-83细胞增殖的影响
青蒿琥酯是青蒿素的衍生物，为二氢青蒿素的12-α-琥珀酸酯钠。青蒿琥及其衍生物具有抗疟疾、抗焦虫、抗血吸虫及抗肿瘤等药理活性以及临床的疗效。其抗疟机制被认为是该药化学结构含有过氧桥，在代谢过程中产生自由基的构效特点，使红细胞O2和H2O2活性氧浓度升高［1］。鉴于该化学结构中含有过氧桥，在组织有可能释放氧的机制。我们研究了青蒿琥酯对体外培养的人癌细胞系HeLa、SACC-83细胞增殖的影响。1 材料1.1 药物及试剂：青蒿琥酯，广西桂林制药二厂提供，白色粉剂，用前溶于2 mL 5%NaHCO3溶液中，经过滤除菌，用RPMI-1640培养液稀释。MISO，放射增敏剂，中科院生物物理研究所沈洵教授惠赠，用前溶于RPMI-1640，过滤除菌后，终浓度为1×10-3 mol/L。MTT, Gibco 公司产品，临用前现配制。DMSO(二甲基亚砜)，Gibco公司产品。1.2 仪器：德国贺利氏CO2培养箱，日本Olympus倒置显微镜，芬兰Labsystem MS MK3 ELISA检测仪。1.3 细胞系及培养条件：人肝癌细胞系BEL-7402，北京市肿瘤医院研究所提供。人乳癌细胞系BCH，人胃癌细胞系MGC-803，北京市肿瘤医院研究所提供。人涎腺样囊性癌细胞系SACC-83，北京医科大学口腔医学院提供。人舌鳞癌细胞系TC-83，天津医科大学肿瘤医院提供。人宫颈癌细胞系HeLa，本生物技术室提供。2 实验方法2.1 细胞敏感筛选实验：各细胞系传代至指数增殖期，经扩增培养，胰酶-EDTA消化后，计数后配成5×104 cfu/mL。接种于96孔板，培养液为15% FCS RPMI-1640， 5% CO2，37 ℃下培养，试验组分别加入青蒿琥酯(终浓度为6.25，12.5，25，50，100 μg/mL)，对照组细胞加入RPMI-1640，继续培养48 h，在终止前4 h，换成无血清PRIM-1640液，加入MTT 2 mg/mL，培养4 h，移液，加入DMSO，振荡，Labsystem MS MK3 ELISA仪570 nm测各细胞系的吸光度(A)。2.2 细胞增殖MTT分析实验：指数增殖期细胞接种，细胞数2×105 cfu/mL，5% CO2，37 ℃，孵育4 h，待贴壁，HeLa细胞系青蒿琥酯12.5～100 μg/mL浓度范围，SACC-83细胞系青蒿琥酯25～100 μg/mL浓度范围，不同浓度药物分别与培养20，44，68 h的细胞接触，于不同时期(20，44，68 h)按Mosman法［2］，采用Labsystem MS MK3 ELISA仪570 nm测两种细胞系的A值。2.3 统计学处理：按t检测比较实验和对照各组的A值(细胞生存)，采用线性回归计算IC50。
-
端粒酶活性在消化道肿瘤组织中的异常表达及其检测
1989年Morin等首先在人宫颈癌细胞系(Hela细胞)发现活化的端粒酶,1994年Kim首创高度敏感特异的PCR-TRAP法检测端粒酶活性,自此,端粒酶与肿瘤关系的研究方兴未艾.越来越多的研究表明,端粒酶与肿瘤的发生发展关系密切.利用端粒酶作为肿瘤的特异性标志物用于诊断和评估预后,是当前肿瘤研究的新热点之一.本文拟介绍端粒酶与消化道肿瘤的新研究进展,并对其在消化道肿瘤的检测及其应用作如下综述.
-
膜联蛋白A5与宫颈黏膜上皮细胞癌变的关系
目的:确定在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞中是否有膜联蛋白A5(anxA5)的表达,为研究anxA5的功能及其与宫颈癌的关系奠定基础.方法:培养Hela细胞和SiHa细胞.TRIzol法提取细胞总RNA,RT-PCR法检测anxA5在mRNA水平的表达并将其基因片段连接于T载体,测序仪测序;Western印迹法和免疫细胞化学ABC法检测anxA5的表达.结果:两种宫颈癌细胞的RT-PCR结果和Western印迹法均显示目的条带;免疫细胞化学染色可见胞质和核膜被染成棕黄色;测序并经NCBI的BLAST进行比对,显示为人anxA5.结论:anxA5在宫颈癌细胞系Hela细胞和SiHa细胞的mRNA水平和蛋白质水平均有表达.
-
化疗药物对宫颈癌细胞系作用的实验研究
目的:本实验通过研究顺氯胺铂(cDDP)、平阳霉素(PYM)、氟尿嘧啶(5-FU)在体外对宫颈癌Hela及Siha细胞系的作用,探索有效的宫颈癌新辅助化疗方案,以指导宫颈癌的临床化疗.方法:应用三磷酸腺苷生物发光法(adenosine triphosphate cell viability assay,ATP-CVA)检测以上3种化疗药物单用及联合用药对HeLa及Siha细胞的药物敏感性,药物浓度以血浆峰浓度(plasm peak concentration;PPC)计算.结果:从0.2～2倍PPC浓度时,各药物随着浓度的增加抑制率逐渐增加.1倍PPC时,5-FU、cDDP、cDDP+PYM和cDDP+5-FU对Hela细胞的抑制率均高度敏感,PYM随着药物剂量增加对HeLa细胞的抑制率无明显增加,且均不敏感.1倍PPC时,PYM、5-FU、cD-DP、cDDP+PYM和cDDP+5-FU对Siha细胞的抑制率均高度敏感.结论:1倍PPC时,cDDP、5-FU、cDDP+PYM、cD-DP+5-FU能有效抑制HeLa和Siha细胞的生长,PYM能有效的抑制Siha细胞的生长,而对Hela细胞无明显的抑制效应.临床宫颈癌的化疗可以以此作为参考依据.
关键词： 三磷酸腺苷生物发光法 药物敏感实验 宫颈癌细胞系 -
Toll样受体4在宫颈癌细胞系中的表达及与HPV16感染的关系
目的探讨Toll样受体4（Toll-like receptors 4，TLR4）在不同宫颈癌细胞系中的表达特点及其与人乳头状瘤病毒（human papillomavirus 16，HPV16）感染的关系。方法采用逆转录聚合酶联反应（RT-PCR）检测细胞系中HPV16的感染情况；细胞免疫荧光法对 H8、SiHa、Caski细胞进行 TLR4抗体荧光标记；蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测 H8、SiHa、Caski细胞中 TLR4蛋白的表达量。结果 H8、SiHa、Caski细胞中均有HPV16 E6的表达；荧光显微镜和激光共聚焦显微镜发现TLR4表达在 HPV16阳性宫颈癌细胞的细胞膜和细胞浆中；TLR4在不同宫颈癌细胞系中的表达差异具有统计学意义（P＜0．05），其中在Caski细胞中表达高，在Si-Ha细胞中次之，在 H8细胞中表达量低。结论 TLR4在宫颈癌细胞系中的表达与 HPV16感染有关， HPV16感染的程度对TLR4表达量有影响，推测TLR4参与了女性宫颈上皮 HPV16的感染，两者共同对宫颈上皮病变发展过程发挥重要作用。
