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淋病奈瑟菌青霉素、四环素耐药的分子检测
淋病奈瑟菌(Neisseria Gonorrhoeae,NG)的青霉素、四环素耐药表型研究(即药敏分析)国内已有较多文献报导.但不同的药敏检测方法其检出率的差异颇大.NG对青霉素、四环素耐药多数分别为获得TEM基因和Tet M基因的质粒所致.为精确了解常州地区NG对青霉素、四环素的耐药状况,我们应用以TEM基因为靶基因的套式聚合酶链反应(nested Polymerase Chain Reaction,nPCR)和以Tet M基因为靶基因的PCR技术对分离自常州地区的50株NG进行了分析检测,现将结果报告如下.
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E2F转录因子在细胞周期调控中作用的研究进展
目前研究表明多种细胞因子参与细胞周期调控,其中E2F转录因子家族已被证明是重要的调控环节之一[1].它们通过调节控制细胞DNA合成及与细胞增殖有关的基因表达而起作用,同时其本身的活性又受另一些在细胞周期进程中有重要作用的蛋白所调控.这样调节E2F家族的蛋白,E2F转录因子及它们的靶基因就形成了一条对细胞增殖有调节作用的途径.现对E2F转录因子在细胞周期调控中的作用及E2F家族与细胞凋亡及肿瘤的关系进行综述.
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基因芯片技术及其在生殖生物学中的初步应用
基因芯片技术发展简史基因芯片(genechip),又称为DNA微阵列(DNA microarray),简单的讲就是将大量靶基因或寡核苷酸片段有序、高密度地排列在玻璃片或膜等载体上形成的高密度的DNA微点阵[1].
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Let-7的靶基因研究以及与妊娠的相关性
microRNAs（miRNAs）是长度约为19～24个核苷酸的一类高度保守的能够在转录后水平调控基因表达的内源性的非编码小分子 RNA。Let-7家族是发现比较早、研究比较多的 miRNAs 之一，早发现 let-7在线虫中能调控细胞分化和增殖时序。此后大量的研究表明 let-7家族参与动物器官发育调控，并与多种癌症的发生相关。近几年的研究发现，let-7与妊娠有一定相关性。本文主要综述 let-7家族在妊娠组织中的研究，初步阐述其调控妊娠的可能机制。
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microRNA在酒精毒性机制中作用及叶酸保护机制的研究
MicroRNAs(miRNAs)是一种由22个核苷酸组成的小的非编码的RNAs,序列特异性的靶向结合并调节mRNAs的表达.miRNAs调节的靶基因广泛涉及到发育、细胞增生、凋亡、和肿瘤基因.
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晶芯(R)RT-Cycler636实时荧光定量PCR仪
仪器简介博奥生物有限公司暨生物芯片北京国家工程研究中心自主研发的晶芯(R)RT-Cycler636实时荧光定量PCR仪是致力于生命科学研究和分子诊断应用领域的新型产品.它采用离心式实时荧光检测方式,通过热循环PCR对特异性的靶基因进行扩增并定量.
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聚合酶链反应鉴定结核分枝杆菌常用靶基因序列的研究进展
分枝杆菌种类繁多,至今已发现有150余种,包括结核分枝杆菌复合群、麻风分枝杆菌以及非结核分枝杆菌,而结核分枝杆菌复合群是引起人类结核病的主要病原菌.分子生物学技术的发展为实现结核分枝杆菌的快速鉴定提供了方向,建立了各种以核酸序列为靶基因,如IS6110、16S rRNA、16S-23S rRNA ITS、hsp65、rpoB和gyrB等的快速鉴定方法.本文对聚合酶链反应(PCR)检测方法中鉴定结核分枝杆菌常用靶基因序列鉴定方法的敏感度和特异度研究进展进行综述.
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miRNA通过信号通路对中药抗癌作用及肿瘤细胞增殖凋亡的影响
微小RNA（microRNAs，miRNA）是真核生物中广泛存在的一种长约22个核苷酸的非编码RNA分子，其与靶基因mRNA通过碱基不完全的互补结合，使靶mRNA降解或翻译抑制而发挥负调控基因表达作用，从而广泛参与机体的病理生理过程。目前，人类基因组中已确认的miRNA已达2578个（miRNA base release 20.0），估计至少有60%编码蛋白的基因上存在miRNA作用的靶点上［1］。研究提示，肿瘤组织中异常表达的miRNA，与肿瘤的发生、发展和耐药等有密切关系。近些年，从miRNA为切入点对肿瘤的研究引起了广泛关注。目前中药对降低肿瘤患者化疗的毒副作用，提高化疗效果发挥重要作用，但从miRNA方面研究中药抗癌作用的机制较少。本文概述了近年来miRNA 通过各种信号通路对肿瘤细胞增殖凋亡影响以及中药抗癌作用相关miRNA的研究，归纳如下。
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鳖甲煎丸对CCl4致大鼠肝纤维化模型中NF-κB信号通路的影响
目的:通过研究鳖甲煎丸对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝纤维化的抑制作用及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路信号分子及靶基因的影响,探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制.方法:使用CCl4复制肝纤维化大鼠模型,鳖甲煎丸药物溶液灌胃,8周末腹主动脉采血,留肝组织检测指标.苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理形态学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清中肝纤维化4项,基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,组织基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的表达;免疫组化法检测大鼠肝组织中p65,转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肝组织中p65,NF-κB抑制蛋白(IκB)α,IκB激酶(IKK)α/β,TGF-β1的表达.结果:病理学结果显示模型组肝小叶被破坏,纤维组织增生严重,而鳖甲煎丸治疗组肝细胞坏死减少,纤维组织增生明显减少,纤维间隔薄;与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组大鼠肝纤维化4项指标,TIMP-1含量明显降低(P<0.05),而MMP-2,MMP-9含量明显上升(P<0.05);免疫组化结果显示鳖甲煎丸治疗组肝组织p65,TGF-β1表达较模型组明显降低,Western blot检测结果显示与模型组比较,鳖甲煎丸治疗组肝组织中p65,TGF-β1蛋白表达明显减少(P<0.05),IκBα蛋白表达明显增加(P<0.05),而IKKα/β则无显著变化.结论:鳖甲煎丸能够显著减轻四氯化碳致大鼠肝纤维化的程度,减缓其发展,主要与鳖甲煎丸能够抑制p65的表达,从而阻断NF-κB信号通路,减少其下游靶基因TIMP-1,TGF-β1的合成,上调MMP-2,MMP-9的表达,从而加快细胞外基质的降解有关.
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2型糖尿病肾阴虚证患者差异lncRNA的筛选及分析
目的 找出与2型糖尿病肾阴虚证发生、发展相关的lncRNA,并探讨其调控的作用机制.方法 采用lncRNA/mRNA芯片对6例2型糖尿病肾阴虚证患者和4例健康成人外周血进行基因表达谱检测,两组数据对比得到差异lncRNA,再对差异lncRNA进行靶基因的预测,并将靶基因与差异mRNA联合分析,从中找出可能与2型糖尿病肾阴虚证发病相关的lncRNA.结果 筛选出差异lncRNA 275条,其中上调lncRNA数为217条,下调IncRNA数为58条.采用顺式调控预测,相关的差异lncRNA有161条;采用反式调控预测,相关的差异lncRNA有107条.在与差异mRNA数据中对比发现,靶基因表达水平有改变的lncRNA 7条.结论 lncRNA AF116618、HMIincRNA880与2型糖尿病肾阴虚证的发生、发展可能有着密切的关系,有作为2型糖尿病肾阴虚证新的诊断标志物和药物靶点的可能.
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健脾温肾方对皮下移植瘤术后模型裸鼠肺转移瘤体中miRNAs及相关靶基因mRNA表达的影响
目的 探讨健脾温肾方对肺癌术后复发转移的预防作用及可能机制.方法 建立NCI-H460-Luci细胞皮下移植瘤术后裸鼠模型,随机分为健脾温肾组、化疗组、对照组,每组16只.健脾温肾组术后第1天开始给予健脾温肾方溶液(1.1 g/ml)0.3ml/d灌胃,每日1次,干预13周;化疗组给予紫杉醇注射液15 mg/kg,每隔5天腹腔注射1次,共用3次;对照组给予生理盐水0.3ml/d灌胃,每日1次,干预13周.每周1次至术后13周,采用活体成像观察裸鼠肿瘤转移情况,分析各组术后无瘤转移生存时间;术后第6周,采用实时荧光定量PCR法检测瘤体中miR-18a-5 p、miR182-5 p、miR21、miR106b-5p及相关靶基因乳腺癌易感基因1 (BRCA1)、重组人磷酸酶及张力蛋白同源体(PTEN)、P53肿瘤蛋白(TP53)、表皮生长因子受体(EGFR) mRNA表达量. 结果 与对照组比较,健脾温肾组、化疗组裸鼠瘤体中miR-18a-5 p、miR182-5p表达降低,BRCA1 mRNA表达升高(P＜0.05或P＜0.01);化疗组裸鼠瘤体中miR21、miR106b-5p表达亦较对照组降低(P＜0.05或P＜0.01).各组裸鼠瘤体中EGFR、PTEN、TP53 mRNA表达差异均无统计学意义(P＞0.05).健脾温肾组和对照组无瘤转移生存时间比较差异具有统计学意义(P＜0.05),化疗组与健脾温肾组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 健脾温肾方在预防肺癌术后转移方面有一定作用,其机制可能与调节miRNAs及相关靶基因mRNA有关.
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鳖甲煎丸对肝纤维化模型大鼠肝组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白及其靶基因表达的影响
目的 探讨鳖甲煎丸治疗肝纤维化的可能作用机制.方法 48只大鼠随机分为空白对照组、模型组、秋水仙碱组和鳖甲煎丸低、中、高剂量组,每组8只.除空白对照组外其余各组大鼠腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立肝纤维化模型.首次注射后第2天开始给药,鳖甲煎丸低、中、高剂量分别给予为鳖甲煎丸混悬液0.55、1.1、2.2 g/(kg·d)灌胃,秋水仙碱组给予秋水仙碱片混悬液0.11 mg/(kg·d)灌胃,空白对照组和模型组给予2 ml生理盐水灌胃,共8周.Masson染色观察肝脏病理形态学改变;检测各组大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝功能指标,及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(HYP)、转化生长因子β1 (TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)水平;Westemblot法检测大鼠肝组织中β-链蛋白(β-catenin)、糖原合成酶激酶3β (GSK-3β)、磷酸化糖原合成酶激酶3β(p-GSK-3β)、蛋白激酶B(AKT)和磷酸化蛋白激酶B (p-AKT)的表达.结果 与模型组比较,鳖甲煎丸各剂量组均不同程度纤维组织增生明显减少,血清ALT、AST含量及MDA、HYP、TGF-β1、CTGF、TNF-α、VEGF水平降低,SOD水平升高(P＜0.05),肝组织中β-catenin、p-GSK-3β和p-AKT蛋白表达明显减少,且以鳖甲煎丸高剂量组效果更佳(P＜0.05).各组大鼠肝组织中GSK-3β和AKT蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 鳖甲煎丸能够显著减轻CCl4致大鼠肝纤维化的程度,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化、减少其下游靶基因的表达水平有关.
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EB病毒编码microRNA的靶基因研究进展
EB病毒(EBV)是一种疱疹病毒,与多种肿瘤的发生密切相关.EBV可表达多种病毒microRNA (miRNA),并作用于细胞和病毒基因,参与信号转导、细胞增殖、分化等多种功能,这与EBV的致病机制密切相关.探索EBV编码miRNA相关靶基因及功能有助于进一步了解EBV的致病机制,也将为临床治疗提供新的启示.自EBV编码miRNA被发现以来,一些靶基因已经逐渐被验证.本文将对目前已验证的EBV编码miRNA的靶基因及功能进行综述.
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狂犬病病毒反向遗传学及其应用
反向遗传学是相对于经典遗传学而言的.经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律.反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,如定点突变、基因插入缺失置换等,再按组成顺序构建含有生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体,研究生物体基因组的结构和功能,以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容.
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MicroRNA-505与肿瘤的研究进展
microRNA-505(miR-505)编码基因定位于Xq27.1,与多种疾病相关.miR-505可作为一种抑癌RNA,在肿瘤的发生和发展中有类似抑癌基因作用,与肿瘤细胞的增殖、侵袭密切相关.此外,miR-505还可以调节细胞凋亡过程,对不同信号传导的靶蛋白起关键作用.随着对miR-505功能研究的不断深入,miR-505可能成为疾病早期诊断和基因治疗新的分子靶标.
关键词： microRNA-505 肿瘤 靶基因 -
永久性房颤的转录组分析及miRNA调控网络的建立
目的 探索永久性房颤(pAF)发病相关的关键miRNAs及其调控的靶基因.方法 联合应用表达谱芯片和miRNA芯片分析pAF患者(n=7)和健康成人(n=4)的左房组织,筛选pAF相关差异表达的miRNAs,进行靶基因预测后,与表达谱芯片的筛选结果进行负相关分析后的基因集合进行显著性功能分析(GO-analysis);利用miRNA与靶基因之间的靶向调控关系,构建差异miRNA与交集靶基因的调控网络(miRNA-gene-network),得到网络中起核心调控作用的miRNA和被调控的关键靶基因;采用RT-qPCR方法检验另一组pAF患者(n=5)和健康成人(n=4)的左房组织标本.结果 表达谱基因芯片发现610个mRNA有显著性改变(fold change＞2,P＜0.05),miRNA-靶基因调节网络发现与pAF显著相关的20个miRNAs和107个靶基因,相关度高的是miR-144、niR-1284、miR-1827、miR-1、miR-3613-3p和miR-101;其调控的重要靶基因包括CACNB2、EFNB1、PTEN、TAOK1、RUNX1和TPM3等;RT-qPCR验证结果显示这些miRNAs和靶基因密切相关.结论 通过表达谱基因芯片与miRNAs芯片联合分析pAF左房组织标本,构建miRNA调控网络,发现pAF重要的miRNA-靶基因调控及功能,结果更加准确.
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竞争性内源RNA与肿瘤发生的研究进展
微小RNA(miRNA)可与信使RNA(mRNA)的3'端非翻译区(3'UTR)互补结合,降低mRNA的稳定性或抑制mRNA的翻译,负性调节靶基因的表达.然而一些mRNAs、假基因、长链非编码RNA (LncRNA)以及环状RNA(circRNA)含有某些miRNA结合位点,可通过miRNA应答元件(MREs)竞争性结合相同的miRNA,解除或减轻miRNA对靶基因的抑制作用,调节靶基因的表达,这种作用机制称为竞争性内源RNA(ceRNA)假说.在肿瘤的发生过程中,mRNAs、假基因转录物、lncRNA、circRNA可作为ceRNA,通过竞争性结合相同的致瘤性或抑瘤性的miRNA,起到抑制或促进肿瘤发生的作用.
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miRNA-205调控靶基因的研究进展与趋势
传统的miRNA-靶基因-生物学功能研究思路忽略了靶基因之间、靶基因所在信号通路之间的联系，使得miRNA调控作用的整体性与关联性无法得到全面的阐释。运用整体、系统且联系的思维方式，通过对荧光素酶报告实验验证的miR-205靶基因及其信号通路的整理和分析，将明确miR-205的研究方向，并为突破现有miRNA研究的整体格局，探索新颖的miRNA调控机制提供帮助。
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干扰CDK4和CyclinD1的表达抑制MCF-7细胞的增殖
目前研究表明,CyclinD1、CDK4参与细胞周期G1/S期的转换,在多种恶性肿痛中存在CyclinD1、CDK4表达增加,并且 CyclinD1、CDK4的表达水平与肿瘤的恶性程度成正相关[1].鉴于RNA干扰技术可以明显地抑制靶基因的表达,同时CyclinD1和CDK4在细胞周期调控中的重要作用,本研究选择以CyclinD1、CDK4为靶点进行了RNA干扰,观察其对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用.
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微RNA-140-3p的研究进展
微RNA（microRNA，miR）是一类存在于动植物基因组中的功能性非编码小分子RNA，大多由21～23个核苷酸构成，可在转录后水平负性调节蛋白编码基因的表达。miR主要通过其种子序列（一般为5′端的第2个至第8个核苷酸）识别靶基因，通过结合靶基因mRNA的互补序列，导致靶基因翻译抑制或mRNA降解，进而调节多种基因的表达［1］。目前Sanger miRBase16.0收录的人类miR已超过1000个，虽然仅占人类基因组序列的1%～3%，却参与约1/3基因表达的调控。miR在生长发育、细胞分化、增殖、凋亡、肿瘤发生等过程中发挥重要作用。
