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三氧化二砷对子宫颈癌细胞的放射增敏作用
宫颈癌是常见的女性生殖道恶性肿瘤,放疗是宫颈癌的主要治疗手段之一.近年来,随着肿瘤放射生物学的发展,人们逐渐认识到提高肿瘤的放射敏感性与改善患者的放疗效果有着重要关系.三氧化二砷(As2O3)是我国传统中药砒霜的主要成分,As2O3不仅对白血病有疗效,而且对多种实体瘤细胞株有杀灭作用[1].本研究旨在探讨As2O3是否对宫颈癌细胞株具有放射增敏作用,为宫颈癌的放射增敏作用提供理论和实验依据.
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吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对子宫颈癌细胞顺铂敏感性的影响
多个随机临床试验的结果肯定了化疗对控制局部晚期宫颈癌的作用,以顺铂为基础的同步放化疗可提高宫颈癌的生存率,可使宫颈癌死亡危险下降50%~([1]).但化疗中耐药的出现是棘手的问题,寻求增加化疗药物敏感性的研究对提高宫颈癌化疗的疗效有重大意义.
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miR-203调控ΔNp63异常表达与子宫颈癌发生的关系
已知HPV特别是持续性高危型HPV（HR-HPV）感染是子宫颈癌发生的重要原因，尤以HPV16为常见[1]。然而， HPV并非导致子宫颈癌的唯一因素。近年来，HPV感染与微小RNA（miRNA）协同作用导致子宫颈癌的发生是研究者关注的焦点。其中，miRNA 203（miR-203）是近年发现的参与肿瘤发生、发展的重要miRNA，具有抑癌基因的作用[2-6]。本课题组的前期研究发现，miR-203在HPV16阳性的子宫颈癌组织中的表达与正常子宫颈组织相比下调；另在HPV16阳性的子宫颈癌细胞系Caski细胞中，使miR-203的表达上调或下调可引起细胞凋亡、增殖及迁移能力的改变。然而， miR-203在HPV16阳性子宫颈癌细胞中的靶基因及其作用机制鲜有报道。有研究提出，p63基因的ΔN异构体（ΔNp63）是miR-203的潜在靶基因。本研究就miR-203是否在HPV16阳性的子宫颈癌细胞中调控潜在靶基因ΔNp63异常表达进行研究，旨在探讨HPV16感染后导致子宫颈癌发生、发展的可能作用机制。
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奇果菌素诱导子宫颈癌细胞凋亡机制的初步研究
天然中草药的抗癌作用靶点研究已经成为国内外药物研发的热点,中草药及自然产物正被应用于肿瘤治疗的临床试验中.奇果菌素(grifolin)是从传统中草药奇果菌中分离出的多糖,具有显著的抗炎、杀菌和免疫调节等作用[1-2].宫颈癌是常见的妇科恶性肿瘤之一.
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DNA甲基转移酶1在子宫颈病变组织和子宫颈癌细胞中的异常表达及其意义
目的 探讨DNA甲基转移酶1(DNMT1)在子宫颈病变组织和子宫颈癌细胞中的异常表达及其意义.方法 选择经病理学确诊的子宫颈鳞状细胞癌(SCC)患者80例、子宫颈上皮内瘤样变(CIN)患者105例(CIN Ⅰ 52例,CINⅡ/Ⅲ53例)和子宫颈正常(NC)者53名,收集其手术或活组织检查子宫颈组织标本.选择子宫颈癌Caski细胞(HPV16阳性)和C33A细胞(HPV阴性)进行体外实验.分别采用Western blot和实时荧光聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测子宫颈组织和细胞中DNMT1蛋白和mRNA的表达.结果 DNMT1蛋白和mRNA的表达水平在CIN及SCC组织中均较NC组织高,差异均有统计学意义(F=110.57,P＜0.001；F=2.68,P=0.048)；随着子宫颈病变程度的加重,DNMT1蛋白表达水平呈逐渐上升趋势(x2趋势=50.80,P＜ 0.001),但DNMT1 mRNA的表达在调整子宫颈癌相关因素后,未显示相同趋势(x2趋势=3.63,P＞0.05).Caski细胞DNMT1蛋白和mRNA的表达水平均较C33A细胞高,特别是mRNA的表达水平差异有统计学意义(t=7.134,P=0.002).结论 DNMT1蛋白和mRNA高表达均是导致子宫颈癌和癌前病变发生的危险因素,HPV16感染与DNMT1转录功能异常对子宫颈癌的发生可能有协同效应.
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白介素21基因联合放射对子宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用
目的 探讨外源性I L-21基因表达联合放射对子宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用.方法 将构建好的重组腺病毒Ad-IL-21转染人胚肾293A细胞,进行病毒扩增,采用TCID50方法测定腺病毒的滴度.将扩增的Ad-IL-21腺病毒于体外转染HeLa细胞,转染后进行6 Gy 137Cs γ射线照射,利用随机数字表法分为5组,空白对照组不加任何处理,含LacZ基因、但不含IL-21基因的对照腺病毒为Ad-LacZ对照组,Ad-IL-21组,单纯照射组以及联合处理组,观察HeLa细胞的细胞生长曲线、细胞周期、细胞凋亡、IL-21基因和蛋白表达的变化.结果 Ad-IL-21重组腺病毒在293A细胞中扩增成功,获得了高滴度的病毒颗粒,滴度为9×1010pfu/ml.Ad-IL-21组、单纯照射组和联合处理组中,HeLa细胞的生长均明显受到抑制,其中转染后96 h,与Ad-IL-21组和单纯照射组比,联合处理组HeLa细胞的抑制效应显著(F=85.26、72.98,P＜0.05).联合处理组HeLa细胞发生G.期阻滞,S期细胞数量减少(F=36.69、34.83,P＜0.05),凋亡细胞数量增加(F=28.23、25.57,P＜0.05).联合处理组HeLa细胞中IL-21基因表达量分别是Ad-IL-21组和空白对照组的1.54倍和2.43倍(F=22.31、36.65,P＜0.05)；蛋白表达量分别是Ad-IL-21组和空白对照组的1.62倍和2.31倍(F=27.36、35.86,P＜0.05).结论 IL-21基因联合放射对子宫颈癌细胞的抑瘤作用具有协同效应,有效地抑制肿瘤细胞的生长.
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HCCR mRNA在急性白血病患者中的表达及其临床意义
人类子宫颈癌基因(HCCR)是新近确认的一种致癌基因,早由韩国学者Ko等[1]通过差异显示RT-PCR方法从子宫颈癌细胞中筛选、鉴定而出.HCCR基因定位于人染色体12q,分为2个亚型,分别为HCCR1(基因库登记号AF195651)和HCCR2(基因库登记号AF315598).HCCR1和HCCR2编码序列具有高度同源性,为同一mRNA的不同剪切体.研究表明,将表达HCCR1或HCCR2的细胞接种到裸鼠体内可以形成肿瘤,HCCR基因导致肿瘤的发生可能是通过对p53抑癌基因的负向调控而实现的.
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腹腔镜下广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术对子宫颈癌细胞凋亡率的影响及机制研究
目的 分析腹腔镜下广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术对子宫颈癌细胞凋亡率的影响及其相关机制.方法 选取2014年3月至2016年3月收治的子宫颈癌患者80例及子宫肌瘤患者40例作为研究对象.80例子宫颈癌患者,40例进行腹腔镜下广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术,40例进行开腹广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术.子宫肌瘤患者行腹腔镜全子宫切除术.采用流式细胞分析分别测定40例宫颈癌腹腔镜手术患者,手术前、后子宫颈癌细胞的凋亡率,并观察Trail、Bcl2、MTA1和NM23基因的表达水平,将其与腹腔镜下子宫全切术的正常子宫颈细胞和开腹手术的子宫颈癌细胞的手术前、后进行比较.结果 子宫颈癌患者腹腔镜下治疗手术时间明显长于开腹治疗者(P<0.05),术中出血量、术后住院时间、胃肠道功能恢复时间明显短于开腹治疗者(P<0.05),术后并发症发生率与开腹手术者差异无统计学意义(P>0.05).子宫颈癌细胞的术前凋亡率是(4.25 ± 0.17)%,腹腔镜术后的凋亡率是(26.54 ± 0.64)%,明显高于术前,差异有统计学意义(P<0.05);开腹手术后的凋亡率是(5.08 ± 0.28)%,与术前相比,差异无统计学意义(P>0.05);子宫肌瘤患者术前的子宫颈细胞凋亡率是(18.26 ± 0.46)%,腹腔镜术后的凋亡率是(17.36 ± 0.57)%.行腹腔镜手术后的子宫颈癌细胞的抑制转移基因NM23和诱导凋亡基因Trail的表达水平明显比术前高,而相关转移基因MTA1和抑制凋亡基因Bcl2的表达水平则明显比术前低;正常的子宫颈细胞其相关基因Bcl2、MTA1、Trail和NM23的表达水平不受腹腔镜手术对机体的环境造成的变化而发生改变.结论 采用腹腔镜手术治疗子宫颈癌不会增加癌细胞的增殖能力与转移能力,不增加术后并发症发生率,具有较好的临床有效性和安全性.
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格尔德霉素增强子宫颈癌HeLa细胞热疗效的影响
背景与目的:苯醌安莎霉素类如格尔德霉素(geldanamycin,GA)通过抑制热休克蛋白(heat shock protain 90,HSP90)从而导致细胞内信号调节通路网络的多点阻断,如导致涉及细胞增殖、细胞周期调节及幸存调节等众多效应蛋白的降解.前期研究证明HSP90可作为抗肿瘤治疗的一个分子靶位.本研究以子宫颈癌HeLa细胞为研究对象,观察HSP90分子伴侣复合物阻止剂格尔德霉素能否增强加热对HeLa细胞的杀伤效应.方法:采用四唑盐比色实验(MTT)、流式细胞术(flow cytometry,FCM)、吖啶橙荧光染色等方法观察比较应用单纯热疗组、GA组、热疗联合GA组对HeLa细胞活力、凋亡率及细胞形态学的影响.结果:四唑盐比色实验观察到加热与GA化疗间有交互作用,加热联合GA组显著增强单独加热对HeLa细胞杀伤效应(P＜0.01);Annexin,V-FITC染色流式细胞术结果显示加热联合GA组、单纯加热组、单纯GA治疗组所致细胞凋亡率分别为92.1%、52.2%及26.8%.用吖啶橙荧光染色法观察到加热联合GA组明显见HeLa细胞固缩着色不均而且较深,细胞核浓缩、裂解等凋亡特征.结论:HSP90分子伴侣复合物阻止剂GA能增强热诱导的HeLa细胞的杀伤作用.
关键词： 热休克蛋白90(HSP90) 热疗 细胞凋亡 子宫颈癌细胞 -
上调2型大麻素受体诱导子宫颈癌HeLa细胞凋亡
目的:通过构建基因真核表达载体,探讨人2型大麻素受体(human cannabinoid receptor 2,hCB2R)对人子宫颈癌HeLa细胞体外凋亡的作用及机制.方法:选用人脑组织的cDNA作为模板,进行hCB2R基因的RT-PCR扩增,构建重组质粒GV230-hCB2R及其对照空质粒GV230并转染HeLa细胞,Western blotting法及免疫荧光细胞化学染色联合激光扫描共聚焦显微镜技术检测hCB2R表达及细胞内定位;流式细胞术检测HeLa细胞凋亡,Western blotting法及实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中hCB2R、Bcl-2、Bax、Bad的表达.结果:与空质粒转染组相比,GV230-hCB2R转染HeLa细胞后表达相对分子质量40 000的hCB2R蛋白,且细胞膜和细胞质中均有hCB2R的表达;GV230-hCB2R转染组的细胞凋亡率显著高于GV230空质粒对照组[(14.51±4.51)％vs(6.29±0.57)％,t=1.72,P＜0.05];与空质粒对照组相比,hCB2R转染组细胞内Bax和Bad 的表达水平明显上调(P＜0.05),而Bcl-2的表达明显下调(P＜0.05).结论:hCB2R对子宫颈癌HeLa细胞的生长表现出明显的抑制作用,其作用机制可能与hCB2R直接参与了细胞凋亡相关蛋白的表达变化有关.
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腹腔镜手术联合护理干预对子宫颈癌细胞凋亡率的影响及相关机制研究
目的:分析腹腔镜下广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术对子宫颈癌细胞凋亡率的影响及其相关机制.方法:选取本院2013年3月～2015年3月收治的80例老年子宫颈癌患者及40例子宫肌瘤患者作为研究对象.80例子宫颈癌患者,40例进行腹腔镜下广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术,40例进行开腹广泛子宫全切加盆腔淋巴结清扫术.40例子宫肌瘤患者行腹腔镜全子宫切除术.采用流式细胞分析分别测定40例宫颈癌腹腔镜手术患者,手术前、后子宫颈癌细胞的凋亡率,并观察Trai L、Bcl-2、MTA1和NM23基因的表达水平,将其与腹腔镜下子宫全切术的正常子宫颈细胞和开腹手术的子宫颈癌细胞的手术前、后进行比较.结果:子宫颈癌细胞的术前凋亡率是(4.25±0.17)％,腹腔镜术后的凋亡率是(26.54±0.64)％,明显高于术前,经统计分析,具有显著性差异(P＜0.05);开腹手术后的凋亡率是(5.08±0.28)％,与术前相比,经统计分析,不具有显著性差异(P＞0.05);子宫肌瘤患者术前的子宫颈细胞凋亡率是(18.26±0.46)％,腹腔镜术后的凋亡率是(17.36±0.57)％.行腹腔镜手术后的子宫颈癌细胞的抑制转移基因NM23和诱导凋亡基因Trail的表达水平明显比术前高,而相关转移基因M TA1和抑制凋亡基因Bcl-2的表达水平则明显比术前低;正常的子宫颈细胞其相关基因Bcl-2、MTA1、Trail和NM23的表达水平不受腹腔镜手术对机体的环境造成的变化而发生改变.结论:采用腹腔镜手术治疗子宫颈癌不会增加癌细胞的增殖能力与转移能力,具有较好的临床有效性和安全性.
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人寡肽转运体1转染 MDCK 细胞与转染 HeLa 细胞的比较研究
目的：筛选出更适宜的转染受体细胞，提高构建人寡肽转运体1（human peptide transporter 1，hPepT1）高表达细胞系的效率。方法利用 LipofectamineTM2000转染试剂将pcDNA3.1（＋）-hPepT1质粒分别转染进 MDCK 细胞与 HeLa细胞，并进行单克隆细胞的挑选和扩大培养。通过 qRT-PCR与 Western blot 技术来检测两种受体细胞中 hPepT1 mRNA与蛋白的表达水平，并利用超高效液相色谱－串联质谱法（UPLC-MS ／MS）对两种单克隆转染细胞的 hPepT1典型底物甘氨酰肌氨酸（Glysar）摄取能力进行考察。结果MDCK 细胞与 HeLa 细胞转染后，hPepT1 mRNA 与蛋白表达水平以及Glysar 的摄取能力均明显高于其野生型细胞（P ＜0.05）；虽然 Glysar 在 HeLa 细胞中的摄取量高于 MDCK 细胞，但 MD-CK-hPepT1细胞中 hPepT1 mRNA 与蛋白表达水平以及Glysar 的摄取能力却高于 HeLa-hPepT1细胞。结论在hPepT1稳定高表达转染细胞模型的构建中，为提高 hPepT1的转染效率，从而获得更高效的转染细胞模型，以 MDCK 细胞作为转染的受体细胞可能是更为适宜的选择。
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PCNA的shRNA的真核表达载体的构建及对子宫颈癌细胞的干预性研究
目的 构建PCNA的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在Hela细胞表达,同时观察PCNA的shRNA对人Hela细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变.方法 将PCNA的cDNA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4,并通过酶切和测序等方法进行鉴定,将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4转染子宫颈癌细胞,运用Western blot检测PCNA的蛋白表达,流式细胞仪分析细胞周期变化.结果 PCNA的shRNA能显著抑制人Hela细胞的生长,阻滞细胞G0/G1-S期,PCNA的蛋白表达同时受到抑制.结论 PCNA的shRNA能显著抑制人Hela细胞的生长,其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现,实验结果为进一步研究PC-NA的shRNA对子宫颈癌的基因治疗奠定了基础.
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PCNA的shRNA对子宫颈癌细胞的抑制研究
目的:构建增殖细胞抗原(PCNA)的小发夹结构RNA(shRNA)的真核表达载体并在 HeLa细胞表达,同时观察PCNA的shRNA对人HeLa细胞株体外增殖的影响及生物学特性的改变.方法:将PCNA的cDNA的shRNA引物插入真核表达载体pGenesil-1,构建真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4,并通过酶切和测序等方法进行鉴定,将真核表达质粒pGenesil-1-PCNA1-4转染子宫颈癌细胞,运用Western blot检测PCNA的蛋白表达,流式细胞仪分析细胞周期变化.结果:PCNA的shRNA能显著抑制人HeLa细胞的生长,阻滞细胞G0/G1-S期,PCNA的蛋白表达同时受到抑制.结论:PCNA的shRNA能显著抑制人HeLa细胞的生长, 其抑制作用可能通过阻断PCNA蛋白表达实现,实验结果为进一步研究PCNA的shRNA对子宫颈癌的基因治疗奠定了基础.
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共固定化细胞因子诱导的HeLa细胞凋亡中Bax、Bcl-2、P53基因的表达
我们研究了游离药物与共固定药物作用后HeLa细胞的Bax、Bcl-2和P53基因蛋白的表达变化. 人子宫颈癌细胞系(HeLa细胞)经过游离和共固定两种药物分别作用24、72、120、168 h后,用免疫组织化学的方法检测Bax、Bcl-2和P53基因蛋白表达, 经图像分析仪检测反应产物的光密度并进行统计分析. 发现两种药物作用120 h后的Bcl-2的平均光密度明显降低,而Bax的平均光密度明显上升,P53随着时间的延长平均光密度也随之升高;共固定药物在120 h后Bax/Bcl-2的比值明显比游离药物高. 研究表明,干扰素和肿瘤坏死因子共同作用HeLa细胞,P53表达上调诱导Bax基因表达、抑制Bcl-2基因的表达,很有可能是通过线粒体通路诱导细胞凋亡.
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艾叶萃取物引发子宫颈癌细胞凋亡的机制探讨
目的:子宫颈癌病变与人类乳突病毒(Human Papillomavirus,HPV)感染显著相关,民间常以艾叶等中草药做外洗剂治疗阴道发炎,本研究拟探讨艾叶萃取物是否能对子宫颈癌细胞(HeLa Cells)引发细胞凋亡.方法:本研究以不同浓度的艾叶(Artemisia Princeps)萃取物处理子宫颈癌细胞(HeLa cells) 48 h,再以流式细胞技术(Flow Cytometry)侦测Annexin V与PI,评估细胞凋亡之状况,并以西方墨点法(Western Blotting)评估Bcl-xl的表达量.结果:对照组Annexin V positive的比例为2.96％,实验组随着提高艾叶萃取物的浓度,Annexin V positive的比例逐渐增加,分别为2.92％、3.97％、8.76％、7.08％、13.1％、19.8％,且Bcl-xl的表达量越低.结论:艾叶萃取物能够引发子宫颈癌细胞(HeLaCells)的凋亡.
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重组腺病毒pAd/Pri-miR-21可促进HeLa细胞和树突状细胞及Raw264.7细胞增殖
microRNA在肿瘤细胞的发生、发展过程中均发挥着重要作用,包括控制其增殖与凋亡[1-2].microRNA-21(miR-21)是具有自主转录单位的微小RNA[3],已有研究表明肿瘤组织miR-21的高表达与疾病的预后呈负相关[4].为深入发掘miR-21其他的靶基因及其生物学作用,前期的研究中我们构建了可高表达miR-21小分子的重组腺病毒载体[5],本研究拟通过包装并扩增获取重组腺病毒颗粒,分别感染HeLa细胞、树突状细胞(dendritic cells,DC)、Raw264.7小鼠巨噬细胞,通过细胞增殖实验,以期发现miR-21对3种细胞生长的影响,为深入研究miR-21的生物学功能选择理想的细胞模型.
关键词： pri-miR-21 重组腺病毒 子宫颈癌细胞 树突状细胞 巨噬细胞
