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共固定化细胞因子诱导的HeLa细胞凋亡中Bax、Bcl-2、P53基因的表达
我们研究了游离药物与共固定药物作用后HeLa细胞的Bax、Bcl-2和P53基因蛋白的表达变化. 人子宫颈癌细胞系(HeLa细胞)经过游离和共固定两种药物分别作用24、72、120、168 h后,用免疫组织化学的方法检测Bax、Bcl-2和P53基因蛋白表达, 经图像分析仪检测反应产物的光密度并进行统计分析. 发现两种药物作用120 h后的Bcl-2的平均光密度明显降低,而Bax的平均光密度明显上升,P53随着时间的延长平均光密度也随之升高;共固定药物在120 h后Bax/Bcl-2的比值明显比游离药物高. 研究表明,干扰素和肿瘤坏死因子共同作用HeLa细胞,P53表达上调诱导Bax基因表达、抑制Bcl-2基因的表达,很有可能是通过线粒体通路诱导细胞凋亡.
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共固定化细胞因子诱导的HeLa细胞凋亡
利用光化学固定方法,将干扰素-γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)共同偶联到高分子材料聚苯乙烯基板上,合成生物材料.从形态学、流式细胞仪定量、磷脂酰丝氨酸分析、Caspase活性四个方面进行研究.形态学和流式细胞仪研究结果显示,固定化(及游离)细胞因子都可以诱导HeLa细胞凋亡,而且发现游离细胞因子比共固定细胞因子发挥药效更快,但随着时间的增加,共固定化细胞因子的药效比游离的细胞因子更好、更持久有效.磷脂酰丝氨酸定量分析进一步证明了固定化细胞因子的长效活性.在Caspase-3活性研究中发现游离的药物处理后Capase-3活性的提高比共固定化药物处理后更明显,推测共固定细胞因子诱导的HeLa细胞的凋亡不仅存在Caspase依赖的通路,也可能存在caspase非依赖的通路.
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共固定化肿瘤坏死因子和干扰素的协同抗癌作用
研究重组人干扰素(IFN-γ)和重组人肿瘤坏死因子(TNF-α)的共固定化对体外培养的人宫颈癌细胞(Hela)生长的影响.利用光固定化方法将IFN-γ、TNF-α共固定在24孔聚苯乙烯培养板(PSt)上,培养Hela细胞,分别设为:共固定(IFN-γ+TNF-α)、单固定(IFN-γ、TNF-α)、游离(IFN-γ、TNF-α、IFN-γ+TNF-α)各组培养,研究癌细胞生长抑制曲线,透射电镜、流式细胞仪检测Hela细胞的增殖和凋亡.结果表明共固定化干扰素和人肿瘤坏死因子对Hela细胞的抑制作用显著,高达82%,显示IFN-γ对TNF-α具有良好的协同抗宫颈癌作用.
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肿瘤坏死因子-α的光化学修饰及其固定化研究
肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是具有强大抗肿瘤作用的蛋白质型的细胞因子,与4-叠氮苯甲酸反应,经红外光谱确认生成物在2 127 cm-1处有叠氮基团的典型吸收,证明合成得到了光活性的肿瘤坏死因子.采用光固定法将这种光活性蛋白质固定到组织培养聚苯乙烯膜上,制成生物材料.实验进一步表明,种植TNF和固定化TNF量之间的关系以及紫外辐射时间对固定化的影响.通过扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM),对光固定化TNF的微观形态的观察结果表明,光活性的肿瘤坏死因子在聚苯乙烯膜表面处于高度有序状态,且固定化的肿瘤坏死因子的粗糙度约为200～300 nm.
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螺旋藻蛋白质光固定材料的抑癌研究
将从钝顶螺旋藻提取、分离的生物活性蛋白(藻蓝蛋白及藻总蛋白)与已活化羧基的4-叠氮苯甲酸反应,合成具有光反应性的蛋白质.将蛋白质涂覆在组织培养聚苯乙烯基板(PSt)上,通过紫外光照射,蛋白质与聚苯乙烯基板通过共价键连接.研究两种蛋白质接枝生物材料对体外肝癌细胞7402生长的抑制作用.
