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核转录因子NF-κB在人子宫颈癌细胞株Siha、CaSki中的表达及意义
目的：：探讨核转录因子NF-κB在人子宫颈癌细胞株Siha、CaSki中的表达及意义。方法：选取我院2014年12月至2016年1月带有两种宫颈癌细胞的患者60例，采用免疫细胞化学法检测带有两种宫颈癌细胞株患者中的NF-κB和IL-8的表达情况。结果：NF-κB和IL-8在不同FIGO分期中宫颈癌细胞株Siha和CaSki中的表达，其数据之间均存在明显差异，统计学有意义(P<0.05)；NF-κB在无转移宫颈癌细胞株Siha、CaSki低于有转移者，数据对比均具有名下差异(P<0.05)。 NF-κB和IL-8具有较好的正相关性。结论：NF-κB在宫颈癌细胞株CaSki中具有较高的表达，与患者宫颈癌的转移和发展具有非常密切的关系。
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三氧化二砷对子宫颈癌细胞的放射增敏作用
宫颈癌是常见的女性生殖道恶性肿瘤,放疗是宫颈癌的主要治疗手段之一.近年来,随着肿瘤放射生物学的发展,人们逐渐认识到提高肿瘤的放射敏感性与改善患者的放疗效果有着重要关系.三氧化二砷(As2O3)是我国传统中药砒霜的主要成分,As2O3不仅对白血病有疗效,而且对多种实体瘤细胞株有杀灭作用[1].本研究旨在探讨As2O3是否对宫颈癌细胞株具有放射增敏作用,为宫颈癌的放射增敏作用提供理论和实验依据.
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顺铂对TRAIL蛋白抑制子宫颈癌细胞生长的调节作用
宫颈癌是世界范围内威胁妇女生命健康的主要妇科恶性肿瘤,对于晚期和复发患者,化疗是主要的治疗方法,但其严重的副反应及肿瘤耐药是导致患者死亡的主要原因.因此,寻求高效、低毒的化疗药物用于宫颈癌的治疗,是急需探寻的课题.TRAIL蛋白是新近发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族的成员,因其能够选择性地诱导多种肿瘤细胞凋亡而不影响正常细胞的生长,有望成为新型的化疗药物.本研究观察TRAIL蛋白以及顺铂调节TRAIL蛋白对宫颈癌细胞株HeLa和Caski细胞生长的影响,探讨TRAIL蛋白用于宫颈癌治疗的可行性,并为临床应用提供新的思路和科学依据.
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NF-κB与IL-8在宫颈癌细胞株中的表达及意义
目的 探讨核转录因子NF-kB及炎症相关的CXC趋化因子IL-8在人子宫颈癌细胞株Siha、CaSki中的表达及意义.方法 选择两种宫颈癌细胞(未转移的宫颈鳞癌细胞株Siha、宫颈癌肠转移细胞株CaSki细胞)采用细胞免疫化学SV两步法检测两种宫颈癌细胞中NF-κB及IL-8的表达情况；采用酶联免疫吸附试验ELISA法检测两种宫颈癌细胞上清液中IL-8的表达情况,同法检测两种宫颈癌细胞的蛋白提取液中NF-κB的表达情况.结果 NF-κB及IL-8在Siha、CaSki两种宫颈癌细胞中均高表达,且两者在肠转移的CaSki细胞中表达明显高于未转移的宫颈癌细胞Siha细胞,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NF-κB及IL-8在宫颈癌细胞株CaSki中的高表这与宫颈癌的转移及发展密切相关.
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干扰素γ诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及对FHIT Ki67和Bax表达的影响
干扰素(TFN)-α近年来已用于宫颈癌的临床治疗,干扰素(IFN)-γ对实体瘤的作用逐渐受到重视.本研究对IFN-γ对体外培养的宫颈癌细胞株的作用及机制进行探讨,以期为临床用药提供依据.
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宫颈癌组织和细胞株中PD-1的表达及意义
目的 探讨程序性死亡分子-1(programmed death-1,PD-1)在人宫颈鳞状细胞癌、腺癌组织及宫颈癌细胞株中的内源性表达,分析PD-1表达与宫颈癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组化法检测PD-1在宫颈癌组织中的表达,分析其与宫颈癌临床病理特征的关系;培养HPV阳性宫颈腺癌Hela细胞和HPV阴性宫颈鳞状细胞癌C33a细胞,并用Western blot法检测PD-1的表达.结果 宫颈癌组织中PD-1主要表达于肿瘤间质淋巴细胞及癌细胞,PD-1在宫颈癌组织中的阳性率为93.6％.PD-1表达与肿瘤分化程度和病灶大小均密切相关(P<0.001),与淋巴结转移相关(P<0.05);与患者年龄、FIGO分期、脉管浸润、神经浸润及HPV感染均无关(P>0.05).宫颈鳞状细胞癌和腺癌组织中PD-1的表达差异无显著性(P>0.05).在宫颈鳞状细胞癌组织中PD-1表达与患者年龄、淋巴结转移(P<0.05)相关;在宫颈腺癌组织中,PD-1表达与组织学分级密切相关(P<0.001),与肿瘤直径相关(P<0.05).在宫颈癌HPV+Hela细胞和HPV-C33a细胞中均有PD-1蛋白的表达,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 人宫颈癌组织中PD-1阳性率较高,宫颈癌细胞株亦表达PD-1,该基因与肿瘤的多个临床指标密切相关,PD-1可能参与了肿瘤的发生及恶性转化过程.
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TLR4在宫颈癌与不同HPV亚型宫颈癌细胞株中表达及意义
目的 探讨TLR4在正常宫颈组织、宫颈上皮不典型增生、宫颈癌组织以及不同HPV亚型宫颈癌细胞株中表达与意义.方法 采用SP免疫组织化(IHC)检测TLR4在12例正常宫颈组织、30例宫颈轻度不典型增生(cervical intraepithelial neoplasia Ⅰ,CINⅠ)、30例宫颈中-重度不典型增生(cervical intraepithelial neoplasiaⅡ-Ⅲ,CIN Ⅱ-Ⅲ)以及49例宫颈癌(invasive cervical carcinoma,ICC)组织中的表达;应用细胞免疫荧光法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4在不同HPV亚型宫颈癌细胞株HPV18(+)HeLa、HPV16(+)Siha以及HPV(-)C33a宫颈癌细胞株上的表达.结果 TLR4的表达随着宫颈病变程度的增高逐渐增强,在正常宫颈组织、CINⅠ、CIN Ⅱ～Ⅲ、ICC中阳性表达率分别为8.33 %(1/12)、20.00 %(6/30)、26.67 %(8/30)和55.10 %(27/49),ICC与正常宫颈组织、CINⅠ、CINⅡ～Ⅲ之间均有显著性差异(P＜0.01).TLR4表达与HPV感染有关,在HPV阳性宫颈癌细胞株上表达强于HPV阴性细胞株.结论 TLR4可能参与宫颈癌起始、发展,TLR4的表达与功能与HPV感染有关.
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三氧化二砷对人宫颈癌Hela细胞生长增殖的影响
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人宫颈癌Hela细胞的生长抑制作用及对增殖细胞核抗原(PC-NA)和凋亡相关蛋白bcl-2表达的影响.方法MTT法观察生长抑制作用;膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)+碘化丙啶(PI)双参数流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡,FCM测定细胞周期及pCNA、bcl-2表达.结果As2O3可显著抑制Hela细胞生长增殖,且剂量-效应关系显著(r=0.98,P＜0.01),其48h的IC50值为5.59μmol/L.Hela细胞经As2O3处理后可发生凋亡.As2O3能显著下调PCNA表达并使细胞周期阻滞于G2/M期(P＜0.01),但对bcl-2表达无影响(P＞0.05).结论As2O3在体外可显著抑制人宫颈癌Hela细胞生长并诱导凋亡,其机制可能与细胞周期阻滞及降低PCNA蛋白表达有关.
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葡萄籽原花青素增强X射线辐射敏感性的实验研究
目的:研究葡萄籽原花青素(GSPs)对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞和人白血病K562细胞的X射线增敏作用,并探讨其作用机制.方法:应用SRB法和集落形成法测定GSPs对三株细胞的X射线增敏作用,单因素方差分析确定各因素对细胞杀伤的贡献,单击多靶模型曲线拟合计算增敏比.结果:SRB检测结果表明,GSPs可以抑制三株细胞的增殖,呈现时间和剂量依赖效应；但对不同细胞的增殖抑制作用差异较大,对人白血病K562细胞的抑制作用强,对人肝癌HepG2细胞、人宫颈癌Hela细胞的抑制作用较弱；对X射线增敏作用结果表明,GSPs对人白血病K562细胞的增敏作用强,佳增敏剂量为6.25～12.5μg/mL,对人肝癌HepG2和人宫颈癌Hela细胞的增敏作用相似,佳增敏剂量为12.5～25 μg/mL；集落形成法检测结果表明,应用增敏剂量的GSPs后,对人白血病K562细胞表现出较好的辐射增敏作用,平均致死剂量D0值和准阈剂量D.减小,细胞对X射线辐射敏感性增加,亚致死损伤修复减少,增敏比为1.94.结论:GSPs可以增强肿瘤细胞对X射线的敏感性,佳增敏剂量为12.5～25μg/mL,其机理可能通过抗氧化作用,调节细胞细胞内氧平衡,诱导细胞产生G1期阻滞而发挥辐射增敏作用.
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5-氨基酮戊酸光动力疗法对宫颈癌细胞株凋亡的诱导作用
背景与目的:5-氨基酮戊酸-光动力疗法(5-aminolevulinic acidmediated photodynamic therapy,ALA-PDT)是近年来兴起的一种肿瘤消融新技术,其作用于宫颈癌细胞的机制尚不清楚.本课题探讨ALA-PDT对宫颈癌细胞凋亡的影响及其相关机制.方法:用MTT法检测ALA-PDT对8种人宫颈癌细胞增殖的影响,并筛选出ALA-PDT对宫颈癌细胞增殖影响的佳作用参数.采用Annexin V-FITC/PI双染法、Hoechst 33342染色法和May-Grunwald-Farbstoff Giemsa染色法检测ALA-PDT对Me180细胞凋亡的影响.采用PI染色结合流式细胞术分析ALA-PDT对Me180细胞周期的影响.采用实时荧光定量RT-PCR法检测ALA-PDT对Me180细胞survivin等基因mRNA的影响,Western blot检测对Survivin蛋白表达的影响.结果:8种人宫颈癌细胞株中,Me180细胞株对ALA-PDT敏感,与其它细胞株比较差异有统计学意义.ALA 2 mmol/L、10 J/cm2激光剂量孵育3 h为ALA-PDT体外杀伤Me180细胞较理想的实验条件,在该条件下 ALA的IC50为7.28×10-4mmol/L.ALA-PDT可显著诱导Me180细胞凋亡,并可将细胞阻滞于G0/C1期.ALA-PDT可显著抑制Me180细胞survivin基因的mRNA和蛋白表达.结论:ALA-PDT在体外对人宫颈癌Me180细胞有明显的增殖抑制作用,能诱导Me180细胞发生凋亡,其机理可能与抑制survivin基因表达有关.
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宫颈癌细胞株和宫颈上皮组织中Pin1和Cyclin D1的表达及临床意义
背景与目的:肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在人类多种肿瘤中过表达,Pin1过表达可增强Cyclin D1表达,在肿瘤发生发展中起重要作用.本研究拟探讨宫颈癌细胞株及宫颈上皮组织中Pin1、Cyclin D1的表达及其临床意义.方法:应用RT-PCR、Western blot法检测HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞中Pin1和Cyclin D1基因蛋白表达,免疫组化法检测10例正常宫颈、21例宫颈上皮内瘤样病变、57例浸润癌组织中Pin1和Cyclin D1的表达状况,评价其临床意义.结果:HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞存在不同程度Pin1 mRNA及蛋白过表达(P＜0.05).正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变、浸润癌组织中Pin1蛋白表达逐渐增强,分别为0%、47.62%、64.91%(P＜0.05).Pin1蛋白过表达与宫颈癌临床分期、病理分级、淋巴结转移无关(P＞0.05);但宫颈腺癌组织中Pin1表达明显高于鳞癌(P＜0.05).Pin1过表达与Cyclin D1表达呈显著正相关(P＜0.05).结论:Pin1在宫颈癌细胞株及宫颈癌组织中存在mRNA及蛋白水平上的过表达,Pin1过表达与Cyclin D1表达密切相关,Pin1和Cyclin D1异常表达可能参与宫颈癌的发生发展.
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两株宫颈癌细胞株中HPV16E6/E7蛋白的表达
目的:探索及检测宫颈癌细胞株Caski、SiHa细胞内HPV16(16型人乳头瘤病毒)E6/E7蛋白含量,筛选宫颈癌基因治疗研究的合适细胞株.方法:用间接免疫荧光染色及流式细胞术检测Caski、SiHa宫颈癌细胞株中HPV16E6、HPV16E7蛋白含量(荧光强度值).结果:Caski细胞中HPV16E6、HPV16E7蛋白含量分别为:20.72±6.35、56.80±4.30;SiHa细胞中HPV16E6、E7蛋白含量分别为:1.77±0.75、49.27±8.06.2细胞株间HPV16E7蛋白表达量无明显差异(P＞0.05).结论:Caski、SiHa宫颈癌细胞株中HPV16E6、E7蛋白的表达是不平行的.Caski细胞适用于以HPV16E6,HPV16E7蛋白为观察对象的研究,SiHa细胞可用于HPV16E7蛋白的研究,但不适宜用于以HPV16E6蛋白为观察对象的研究.
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3种不同的HPV型别宫颈癌细胞株分泌蛋白非标记定量技术分析
目的:分析3种不同HPV型别的宫颈癌细胞株Siha、Caski和C33的分泌蛋白表达及种类,寻找其共性分泌蛋白标志物,为临床早期发现及针对性干预提供依据.方法:采用非标记(label-free)定量技术分析3种不同宫颈癌SiHa、Caski和C33细胞株的分泌蛋白,运用LC-MS/MS和Maxquant的非标记技术,筛选出宫颈癌分泌蛋白的种类及分类.结果:共鉴定肽段数21 609个,蛋白数2 895个.其中3种宫颈癌细胞株共性蛋白共729种,占29.2％;特异性蛋白Siha细胞株含128种,Caski细胞株含143种,C33细胞株含859种.对于结果中729种共性蛋白进行分析,有以下4类较为集中的类型:热休克蛋白类(HSPs)共14种;异质性核糖核蛋白类(HNRP)共8种;层黏连蛋白类(LN)共4种;阿尔多酮还原酶1类(AKR1)共2种.其中,溶酶体信号通路所占比例大(39种).结论:SiHa、Caski和C33细胞株的分泌蛋白中共有729种共性蛋白,其中4类集中的蛋白类型均先后在研究中证实对宫颈癌的进程和发展有影响,并且可能与溶酶体信号通路有关.可为筛选高危型HPV感染的宫颈癌患者的血清标志物提供依据.
