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苦参素对肺癌A549细胞的放疗增敏作用及机制探讨
目的：：研究苦参素对肺癌A549细胞的放疗增敏作用及其作用机制。方法：于2014年12月至2015年12月体外培养肺癌A549细胞，使用0g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L和4g/L浓度的苦参素对肺癌细胞处理，采用CCK-8检测方法对细胞增殖率进行检测，将肺癌A549细胞分为4组(药物组、放疗组、药物+放疗组、对照组)，对经不同条件处理后细胞Ku70mRNA和蛋白的表达水平进行检测。结果：苦参素处理24h、48h细胞增殖率存在较大差异，有统计学意义(P<0.05)；相同处理时间下，苦参素浓度越大，增殖率越小(P<0.05)；药物组、药物+放疗组的放疗组 Ku70mRNA、Ku70蛋白表达水平均比放疗组和对照组低(P<0.05)；Ku70mRNA、Ku70蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05)。结论：苦参素对肺癌A549细胞的放疗增敏作用较明显，苦参素主要通过对细胞Ku70mRNA和蛋白的表达进行抑制而使肺癌A549细胞DNA损伤修复机制减弱来发挥其放疗增敏作用。
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清热解毒类与活血化瘀类中药对肺癌A549细胞增殖抑制的机制研究
目的 探讨清热解毒类与活血化瘀类中药对肺癌A549细胞抑制增殖的可能机制.方法 利用动物含药血清技术平台获得清热解毒类、活血化瘀类中药及正常血清.对数期A549细胞株随机分为3组(清热解毒药组、活血化瘀药组、正常血清组),将相对应的血清分别作用48h后,WB法检测CyclinD1、P53、PCNA、TNF-α、IL-1、CD4、CD8、BCL-2、Bax、VEGF,RT-PCR法检测BAX、bcl-2、VEGF,ELISA法检测TNF-α、IL-1.结果 清热解毒药组与空白组相比,CyclinD1、PCNA表达明显下降(P<0.01),TNF-α、IL-1,CD4、CD8表达明显升高(P<0.01),CD4/CD8升高;P53、Bcl-2、Bax、VEGF无明显变化(P>0.05).活血化瘀组与空白组相比,PCNA、BCL-2、VEGF表达明显下降(P<0.01),P53、Bax表达明显上升(P<0.01),CyclinD1、TNF-α、IL-1,CD4、CD8表达无明显差异(P>0.05).结论 清热解毒药与活血化瘀药既有共同的抗肿瘤机制,也有各自不同的抗肿瘤机制.清热解毒药的抗肿瘤机制体现在抑制增殖,诱生细胞因子,增强免疫活性方面,而活血化瘀类中药的抗肿瘤机制具体体现在抑制增殖,促进凋亡,抑制血管生成方面.
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二陈汤对肺癌A549细胞中黏附分子-1和p38表达的影响
目的 研究二陈汤对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的肺癌A549细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和p38表达的影响.方法 实验分为空白对照组、二陈汤对照组、TNF-α诱导组、二陈汤干预组、p38阻滞组,并给予相应干预.采用TNF-α诱导肺癌A549细胞产生ICAM-1高表达,以二陈汤含药血清处理ICAM-1高表达的肺癌A549细胞,采用Western blot免疫印迹法测定p38蛋白表达,以PCR法测定ICAM-1 mRNA水平,对二陈汤处理前后的ICAM-1表达水平及p38蛋白表达进行分析.结果 二陈汤干预组肺癌A549细胞中血清ICAM-1表达及p38活性与TNF-α诱导组比较显著降低(P＜0.01).结论 在体外实验中,二陈汤有可能通过抑制p38的活性而实现对ICAM-1表达的调控,这可能为二陈汤控制肺癌转移的机制之一.
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石蒜碱诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究
为探讨石蒜碱诱导肺癌A549细胞的凋亡作用及其机制.该研究以肺癌A549细胞为实验对象,通过不同浓度的石蒜碱(0,0.5,1.0,2.0,4.0,8.0 μmol·L-1)处理A549细胞,MTT观察细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞的凋亡率;酶标仪检测凋亡因子Bcl-2,Bax,p53的活性;流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位变化;Real-time PCR检测凋亡相关基因Bcl-2,Bax,p53和Survivin的表达.研究结果表明:石蒜碱可显著抑制A549细胞增殖(P＜0.05)、诱导A549细胞凋亡(P＜0.05).同时增强Bax和p53的活性,降低Bcl-2活性和线粒体膜电位,显著改变Bcl-2,Bax,p53和Survivin的基因表达(P＜0.05).综上表明石蒜碱可诱导A549细胞凋亡,具有治疗肺癌的应用前景,其机制可能与其调节Bcl-2信号通路中相关因子活性有关.
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丹酚酸A逆转肺癌多药耐药基因MDR1相关microRNA的筛选与鉴定
通过将人肺癌A549细胞分为正常对照组和给药组,采用实时定量PCR对MDR1的表达水平进行测定.运用microR-NA芯片对给药组和对照组进行microRNA表达谱分析;采用Targetscan预测上调microRNA中与多药耐药基因MDR1相关的miRNA以及实时定量PCR的方法对筛选出的miRNA进行验证,研究丹酚酸A逆转肺癌多药耐药基因MDR1相关microRNA.实验结果表明,与对照组相比,给药组MDR1的表达水平明显下调;microRNA芯片对人肺癌A549细胞的给药组和对照组进行了miRNA表达谱分析,共筛出426个差异表达的miRNA;然后对差异表达上调的miRNA进行靶基因预测,发现有4个明显上调的miRNA与多药耐药基因MDR1相关.对4个miRNA进行实时定量PCR验证,结果与芯片一致.因此认为丹酚酸A下调肺癌多药耐药基因MDR1可能是通过影响miRNA表达进而调控靶基因,对进一步阐明中药逆转多药耐药作用机制提供了实验依据.
关键词： 丹酚酸A 多药耐药 MDR1 microRNA芯片 肺癌A549细胞 -
人参水提液对TAMs与肿瘤细胞共培养体系肺癌A549细胞生物学行为的影响
目的 探讨人参水提液(water extract of ginseng,WEG)对肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)与肺癌A549细胞共培养体系肺癌A549细胞增殖、迁移及骨架蛋白F-actin表达等生物学行为影响.方法 采用佛波酯(PMA)联合IL-4及IL-13诱导人急性白血病单核细胞株(THP-1)成为TAMs.以TAMs细胞上清与肺癌A549细胞共培养,模拟肿瘤微环境构建共培养模型.将细胞分为空白组(A549)、共培养组(TAMs+A549)、WEG高、中、低剂量组(TAMs+A549+WEG)o分别采用MT-T-法、实时细胞分析技术及高内涵细胞成像系统检测分析不同条件下A549细胞增殖、迁移和骨架蛋白F-actin表达情况.结果 与空白组比较,共培养组A549细胞增殖明显增加,细胞迁移能力和细胞骨架面积均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与共培养组比较,WEG高、中、低剂量组A549细胞增殖和迁移能力受抑制,细胞骨架面积和微丝条数减少,且呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 人参水提液在共培养体系中能有效抑制A549细胞增殖迁移能力,可能通过调节TAMs免疫活性而影响肿瘤细胞的生物学行为.
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羟丙基β环糊精分子包合物促进姜黄素抑制肺腺癌A549细胞体外增殖和诱导凋亡
目的 探讨羟丙基β环糊精分子包合是否促进姜黄素CUR抑制A549细胞增殖和诱导凋亡.方法 以游离姜黄素为对照,用MTT法检测CUR羟丙基β环糊精分子包合物(CURCD)对A549细胞增殖的抑制;采用DAPI荧光染色,观察CURCD对A549细胞凋亡的影响;用流式细胞术检测CURCD对A549细胞周期、凋亡、活性氧和钙离子浓度、线粒体膜电位的影响.结果 相对于游离CUR,CURCD对A549细胞增殖有显著抑制作用,显微镜下可见明显的形态改变,MTT检测显示细胞存活率降低,细胞生长被抑制在S/G2期,细胞凋亡率增加,细胞内活性氧和钙离子浓度上升,线粒体膜电位水平下降.结论 羟丙基β环糊精分子包合可显著促进姜黄素抑制A549细胞增殖和诱导凋亡.
关键词： 姜黄素 羟丙基β环糊精包合物 肺癌A549细胞 细胞凋亡 -
肺癌A549细胞上皮-间质转化及其对微小RNA表达的影响
目的 探讨肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)对微小RNA(miRNA)表达的影响.方法 采用不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺癌A549细胞发生EMT,应用相差显微镜观察A549细胞形态学变化,采用Western blot法检测EMT相关标记蛋白表达的变化,应用miRNA芯片检测EMT前后miRNA表达的变化,应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCT)验证芯片结果的可靠性.结果 肺癌A549细胞发生EMT后,细胞形态拉长,细胞间连接变得疏松.肺癌A549细胞发生EMT后,上皮标记蛋白E-钙黏附素(E-cadherin)表达降低,而间质标记波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)表达上调.miRNA芯片获得51个miRNA在诱导前后有统计学意义(P＜0.05),且表达差异在2倍以上.18个表达上调,33个表达下调,其中mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了92.8%和86.5%;荧光定量RT-PCR检测mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了73.1%和56.6%.结论 EMT可影响肺癌A549细胞中miRNA的表达变化,miRNA可能通过EMT调节肺癌侵袭转移.
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紫杉醇载药胶束对人肺癌A549细胞增殖与凋亡的影响
本文研究了以聚乙二醇-聚己内酯共聚物为载体制备的紫杉醇载药胶束(mPEG-PCL-PTX)对人肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响,探讨其抗肿瘤的可能机制.以体外培养的人肺癌A549细胞为研究对象,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测mPEG-PCL-PTX对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;Hoechst/PI染色检测细胞凋亡;RT-PCR检测A549细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达;Westemblot检测A549细胞Bax、Bcl-2蛋白表达.结果显示,空白聚合物胶束体外基本无毒性,mPEG-PCL-PTX对A549细胞增殖有明显抑制作用,并使细胞周期阻滞于G2/M期;载药胶束促进A549细胞凋亡,使A549细胞Bcl-2基因和蛋白表达下调,Bax表达上调,同时上调Caspase-3基因表达.结果表明,含腙键pH敏感聚合物体外基本无毒性,载药胶束mPEG-PCL-PTX对人肺癌A549细胞的增殖有抑制作用,对A549细胞的凋亡有促进作用.
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榄香烯诱导肺癌A549细胞凋亡作用的剂量和时间依赖性研究
目的 探讨榄香烯对肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响.方法 每批细胞按空白对照组和药物处理组随机分组,检测榄香烯对癌细胞的增殖抑制作用;采用流式细胞光度分析术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞周期时相分布,同时进行细胞的形态学观察.结果 榄香烯存在剂量依赖性和时间依赖性,榄香烯在48 h、72 h对A549细胞周期有明显影响;榄香烯可阻滞A549细胞于S期并诱导细胞凋亡,但细胞凋亡率并不完全与药物浓度成正相关.结论 榄香烯对肿瘤细胞具有较强的增殖抑制作用,在一定药物浓度范围内,随药物浓度的增加榄香烯可使细胞凋亡率升高,但超过一定作用浓度,药物的细胞毒作用增强,细胞凋亡率则呈下降趋势.
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亚麻木酚素对肺癌A549细胞的抑制作用及其机制
目的 观察亚麻木酚素(SDG)对肺癌A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及机制.方法 在体外培养的肺癌A549细胞株中加入不同浓度的SDG (5、10、20、40μmol/L),NM观察细胞增殖情况;Transwell小室评价细胞侵袭能力;Hochest 染色观察细胞凋亡情况;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3 )活性;Real Time PCR、Western Blotting检测基质金属蛋白酶-2 (MMP-2) mRNA和蛋白表达.结果 SDG呈时间-浓度依赖性抑制A549细胞的增殖(P<0.05).细胞侵袭能力明显下降、凋亡比率和Caspase-3活性明显升高、MMP-2 mRNA和蛋白的表达显著下降(P<0.05).结论 SDG呈时间和剂量依赖性抑制A549细胞的增殖和侵袭,其机制可能与其促凋亡、抑制MMP-2的表达有关.
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芹菜素诱导肺癌A549细胞凋亡及其机制研究
目的 研究芹菜素诱导肺癌A549细胞凋亡效应及其机制.方法 常规培养肺癌A549细胞,分别用10、20、40、80 μnol/L芹菜素作用于A549细胞;MTT法检测A549细胞增殖率;Western blotting检测聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Bcl-2的蛋白表达水平;RT-PCR检测bcl-2 mRNA的表达;Annexin V/PI双染法检测A549细胞凋亡率.结果 随着芹菜素浓度的增高,A549细胞的增殖抑制率明显增高,具有统计学意义(P＜0.05);Western blotting显示PARP的剪切带逐渐增加,Bcl-2表达呈减少趋势;RT-PCR结果显示bcl-2 mRNA转录减少;0、10、20、40、80 μmol/L芹菜素对A549细胞凋亡率分别为(2.41 ±0.072)%、(10.56±0.054)%、(15.32±0.071)%、(28.98±0.012)%、(78.24±0.064)%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 芹菜素通过抑制Bcl-2的表达有效地诱导肺癌A549细胞凋亡.
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虾青素对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性的影响
目的：探讨虾青素对人肺癌A549细胞裸鼠移植瘤放射治疗敏感性的影响。方法20只BALB/c Nude裸鼠随机均分为4组：对照组（小鼠灌胃10%DMSO的超纯水），虾青素组（小鼠灌胃10%DMSO的虾青素悬液，剂量为50 mg/kg，每隔1 d给药1次，共给药7次），照射组（小鼠灌胃10%DMSO的超纯水，肿瘤生长部位使用加速器局部照射，5 Gy/次，总剂量15 Gy）及联合组（同时进行虾青素灌胃和局部照射处理）。肿瘤短直径达到5 mm以上开始实验，每隔1d测量移植瘤长短直径计算肿瘤体积并绘制移植瘤生长曲线，末次给药后第2天处死小鼠，取肿瘤块称质量并将其制成石蜡切片。免疫组化方法检测石蜡切片内肿瘤细胞增殖抗原Ki-67、磷酸化STAT3（p-STAT3）表达及细胞凋亡（Tunnel染色）情况。结果与对照组比较，虾青素组、照射组及联合组瘤体生长速度减慢（P<0.05），以联合组瘤体生长速度慢。对照组、虾青素组、照射组和联合组瘤体质量、Ki-67、p-STAT3表达水平均依次降低，抑瘤率、细胞凋亡率均依次升高，组间多重比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论虾青素能够通过抑制p-STAT3表达增加肺癌A549细胞裸鼠移植瘤的放疗敏感性。
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Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响
目的:探讨Survivin siRNA对肺癌A549细胞吉西他滨化疗敏感性的影响.方法:肺癌A549细胞分为siRNA转染组、吉西他滨组、siRNA转染+吉西他滨组和正常对照组;噻唑蓝比色法(MTT法)检测各组细胞增殖率的变化,流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期和存活率.结果:Survivin siRNA+吉西他滨组细胞的增殖率和存活率均明显低于siRNA转染组和吉西他滨组(P<0.01);且siRNA+吉西他滨组与siRNA转染组、吉西他滨组比较,更高比率的A549细胞被阻滞于S期(P<0.01).结论:siRNA沉默Survivin表达,增加了肺癌A549细胞对吉西他滨的化疗敏感性.
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MTT法检测夏枯消瘤丸含药血清对人肺癌A549细胞的实验研究
目的:通过体外实验观察夏枯消瘤丸含药血清对人肺癌A549细胞的细胞毒作用.方法:MTT比色法检测人肺癌A549细胞的增殖,探讨夏枯消瘤丸含药血清对人肺癌A549细胞的细胞毒作用,从而明确夏枯消瘤丸对肿瘤的抑制作用;观察各组对人肺癌A549细胞的细胞形态及生长状态的影响,从而探究抑制肿瘤生长的有效浓度及剂量.结果:与正常对照组相比,5％含药血清组24h细胞抑制率差异无统计学意义(P＞0.05),其余含药血清组、DDP及综合组抑制率升高(P＜0.05);随着时间延长,48 h、72 h抑制率也随之升高(P＜0.05).结论:夏枯消瘤丸含药血清对A549细胞增殖有明显抑制作用,并随血药浓度增大抑制作用增强,但不及DDP单用.
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远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用研究
目的:观察远志皂苷元诱导肺癌A549细胞凋亡作用,初步探讨其可能作用机制.方法:以肺癌A549细胞为实验对象,通过不同浓度的远志皂苷元(0、5、10、20、40、80 μmol/L)处理A549细胞,MTT观察细胞增殖情况;AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞的凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)的活性;Real Time PCR检测凋亡相关基因TNF-0α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的表达.结果:远志皂苷元可显著抑制A549细胞增殖(P＜0.05)、诱导A549细胞凋亡(P＜0.05).同时增强Caspase-3和Caspase-9的活性,显著改变TNF-α、Bcl-2、Caspase-3和Survivin的基因表达(P＜0.05).结论:远志皂苷元可诱导A549细胞凋亡,其机制可能与其调节Caspase家族因子活性有关.
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西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响
目的 探讨西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的影响.方法 通过Transwell小室分析西瑞香素对肺癌A549细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测西瑞香素对肺癌A549细胞迁移能力的影响;West-ern blotting检测西瑞香素作用于A549细胞后MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达.结果 Transwell小室实验结果提示,西瑞香素对A549细胞侵袭能力有抑制作用;划痕实验结果提示,西瑞香素对A549细胞迁移能力有抑制作用;Western blotting结果提示,西瑞香素抑制MMP-2、MMP-9侵袭相关蛋白的表达.随着药物浓度增加,MMP-2、MMP-9表达减少,具有剂量依赖性.结论 西瑞香素对A549细胞体外侵袭及迁移有抑制作用,这种作用与抑制MMP-2、MMP-9表达有关.
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透骨草体外抑制肺癌A549细胞增殖有效部位研究
目的:筛选透骨草抑制肺癌A549细胞增殖的有效部位,为透骨草药效物质基础研究阐明并提供依据.方法:将透骨草分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取后各部位分别在体外用MTT法检测透骨草对肺癌A549细胞的增殖影响,并根据实验结果确定透骨草的有效部位.结果:透骨草的各部位均有抑制肺癌A549细胞增长的作用,其中乙酸乙酯层提取物抑制肺癌A549细胞增殖的作用为明显;而石油醚提取物的抑制作用弱.结论:透骨草具有确切的抑制肺癌A549细胞增殖的作用,其乙酸乙酯层提取物为其有效成分集中部位.
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斑蝥素通过MAPK途径对肺癌A549细胞周期阻滞及其分子机制的研究
目的:探讨斑蝥素对人肺癌A549细胞的周期阻滞作用及其分子机制.方法:采用MTT法检测斑蝥素对A549细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;以蛋白印迹法分析斑蝥素作用后细胞周期蛋白B1(cyclinB1)、p34cdc2、phos-p34cdc2、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变.结果:斑蝥素能抑制A549细胞的增殖;斑蝥素作用于A549细胞后引起G2/M期阻滞;斑蝥素处理后,p34cdc2、phos-p34cdc2表达量没有改变,cyclinB1、survivin蛋白表达量减少,p21蛋白表达量增加.ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2表达量降低.结论:斑蝥素通过调节cyclinB1、p21、survivin、ERK1/ERK2、phos-ERK1/phos-ERK2等蛋白表达或活性的改变引起G2/M期阻滞.
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中药白毛夏枯草水提液体外抗肿瘤研究
目的:探讨中药白毛夏枯草的体外抗肿瘤活性.方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物细胞毒效应,应用流式细胞术分析药物对肺癌A549、肝癌SMMC 7721细胞周期和凋亡率的影响.结果:白毛夏枯草在体外对A549、SMMC 7721具有明显的抑制作用,抑制率达到60%、16.99%.流式细胞仪测定结果显示白毛夏枯草可以诱导肿瘤细胞凋亡.结论:中药白毛夏枯草对肿瘤细胞增生有明显的抑制作用,可引起肿瘤细胞凋亡.
关键词： 白毛夏枯草 肺癌A549细胞 肝癌SMMC-7721细胞 抗肿瘤 凋亡
