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二陈汤对肺癌A549细胞中黏附分子-1和p38表达的影响
目的 研究二陈汤对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的肺癌A549细胞中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和p38表达的影响.方法 实验分为空白对照组、二陈汤对照组、TNF-α诱导组、二陈汤干预组、p38阻滞组,并给予相应干预.采用TNF-α诱导肺癌A549细胞产生ICAM-1高表达,以二陈汤含药血清处理ICAM-1高表达的肺癌A549细胞,采用Western blot免疫印迹法测定p38蛋白表达,以PCR法测定ICAM-1 mRNA水平,对二陈汤处理前后的ICAM-1表达水平及p38蛋白表达进行分析.结果 二陈汤干预组肺癌A549细胞中血清ICAM-1表达及p38活性与TNF-α诱导组比较显著降低(P＜0.01).结论 在体外实验中,二陈汤有可能通过抑制p38的活性而实现对ICAM-1表达的调控,这可能为二陈汤控制肺癌转移的机制之一.
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坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对大鼠脊髓后索损伤修复的影响
目的:研究大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中miRNomes改变对脊髓后索损伤修复的影响.方法:39只雌性Wistar大鼠随机分为A、B、C、D组.A组(n=12)坐骨神经损伤造模后7d进行T10节段脊髓后索损伤造模,B组(n=12)仅进行T10节段脊髓后索损伤造模,C组(n=12)仅进行坐骨神经损伤造模,D组(n=3)不进行任何造模操作.A组和B组分别于脊髓后索损伤造模后4h、3d、7d、14d取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测,于脊髓后索损伤造模后14d取损伤中心脊髓组织行神经丝蛋白200(NF-200)免疫组织化学染色和HE染色;C组于A组各时间点取材的同时取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测;D组取背根神经节行总RNA提取和Western blot检测.对A、B两组各时间点背根神经节miRNA表达谱进行微阵列芯片分析和生物信息学分析,观察与坐骨神经预损伤促进脊髓后索损伤修复有关的miRNA,选出A组中与B组相比变化倍数明显、经过生物信息学分析靶蛋白为Dusp4的miR-199a-5p进行研究.并用RT-qPCR技术对各组miR-199a-5p及A、B和D组Dusp4 mRNA表达进行检测,用Western blot技术检测各组Dusp4蛋白以及A、D组p38蛋白和p-p38蛋白,对A组和B组脊髓后索损伤中心脊髓组织用NF-200免疫组织化学染色及HE染色观察损伤脊髓的恢复情况.结果:芯片分析结果显示miR-199a-5p在A组各个时间点表达与D组相比明显下调,B组miR-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调,3d、7d和14d的表达量无明显变化.RT-qPCR结果显示A组各时间点miR-199a-5p表达与D组相比下调(P＜0.05),B组miR-199a-5p在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比上调(P＜0.05),3d、7d和14d的表达量与D组比较无明显变化,C组各时间点miR-199a-5p表达与D组比较无明显变化.A组和B组各时间点Dusp4 mRNA表达与D组相比无明显变化.A组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后各个时间点与D组比较均有上调且存在统计学差异(P＜0.05).B组Dusp4蛋白在脊髓后索损伤后4h表达与D组相比显著下调(P＜0.05),脊髓后索损伤后3d、7d、14d与D组比较无明显差异.C组Dusp4蛋白在各时间点的表达水平与D组比较无明显差异.A组p38蛋白及p-p38蛋白的表达变化趋势与miR-199a-5p趋势一致.在脊髓后索损伤后14d,与B组比较A组损伤中心尾端脊髓NF-200表达明显增加,且损伤中心尾端脊髓白质纤维束形态规整、后索纤维束排列有序.结论:大鼠坐骨神经预损伤后背根神经节中miR-199a-5p表达下调可以促进脊髓后索损伤的修复.
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微炎症状态促进血液透析患者血清体外诱导血管新生研究
目的：探讨微炎症状态促进维持性血液透析患者血清体外诱导血管新生的作用，为研究透析患者临床并发症的产生机理提供依据。方法免疫速率散射比浊法及ELISA法检测血液透析患者血清超敏C‐反应蛋白（hs‐CRP）、肿瘤坏死因子‐α（TNF‐α）及白细胞介素‐6（IL‐6）水平，根据hs‐CRP、TNF‐α及IL‐6检测结果，入选对象分为微炎症组和无炎症组，每组各包含9例患者，人脐静脉内皮细胞分别培养于10％微炎症组血清培养基和10％无炎症组血清培养基，光学显微镜下观察血管样结构形成，MTT法检测细胞增殖，Transwell小室测定细胞迁徙能力，Western‐blot法检测p‐p38蛋白表达。结果微炎症状组患者hs‐CRP（7．18±0．66）mg／L、TNF‐α（63．60±7．06）pg／ml及IL‐6（69．77±6．96）pg／ml水平高于无炎症组，差异有统计学意义，微炎症组内皮细胞培养30h有血管样结构形成，MTT平均吸光度A值1．073±0．046升高，Transwell小室迁移过滤膜细胞数增多，10h时微炎症组内皮细胞p‐p38表达增加0．268±0．023，与无炎症组比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论微炎症状态通过增加内皮细胞p‐p38表达促进维持性血液透析患者血清在体外诱导血管新生。
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活脑康对缺血大鼠脑组织P38蛋白表达影响的实验研究
目的探讨缺血大鼠脑组织P38的变化及中药活脑康的保护作用.方法应用免疫组化方法,测定正常对照组(A组)、假手术组(B组)、模型组(C组)、活脑康治疗组(D组)、脑心通组(E组)P38的表达.结果与A组、B组比较,C组、D组、E组P38表达增多(P＜0.001),与C组比较,D组、E组表达明显增多(P＜0.001或P＜0.05).结论活脑康可上调突触素P38的表达,具有促进突触再建和增强、完善再建突触效能的作用.
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p38信号蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与淋巴结转移的关系
目的:探讨p38信号蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达及其与临床病理特征之间的关系.方法:应用免疫组织化学S-P法检测60例乳腺浸润性导管癌,Western blot方法检测30例乳腺浸润性导管癌及5例癌旁正常组织中p38、磷酸化p38(p-p38)的表达,分析p38、p-p38与淋巴结转移等临床病理特征之间的关系.结果:免疫组化结果显示,p38蛋白主要分布于乳腺癌上皮细胞与正常乳腺上皮细胞的胞浆内,癌细胞胞浆浓染,正常乳腺细胞胞浆淡染;p-p38蛋白阳性信号定位于乳腺癌细胞核.有淋巴结转移与无淋巴结转移的乳腺癌组织中p38的阳性率分别为76.3%和40.9%,差异十分显著(P＜0.01);p-p38的阳性率分别为68.4%和36.4%,差异显著(P＜0.05).p38、p-p38表达与临床分期有关,与患者年龄、肿瘤大小无明显相关性.Westernblot也证实,p38、p-p38在有淋巴结转移患者中表达高于无淋巴结转移者(P＜0.05).结论:p38、p-p38表达与乳腺癌淋巴结转移有关,p38MAPK信号传导途径在乳腺癌侵袭与转移中起重要作用.
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JTV1基因及其编码蛋白的研究
JTV1基因的转录物编码p38蛋白质,也称AMIP2.p38/JTV1是人类tRNA合成酶复合物的支架蛋白质,是氨酰tRNA连接酶复合物的核心分子,对复合物的组装起到重要的作用.p38/JTV1的结构中包含了谷胱甘肤S-转移酶(GST)结构域,可以与损害的DNA结合,起到分子伴侣的作用;p38/JTV-1可以通过与FBP相互作用而下调c-myc,从而促进细胞的凋亡;AIMP2/p38是p53的正性调节因子,缺失AIMP2/p38,可增加DNA损伤引起的凋亡,因为JTV1拥有上述这些活性,并且人类肿瘤组织经常发生突变,提示JTV1可能作为一种新的肿瘤抑制剂.
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细胞衰老相关分泌表型因子及其分子调控机制研究进展
细胞衰老是增殖细胞脱离细胞周期呈永久性生长停滞的状态,其显著特点之一是分泌大量生物活性物质,即细胞衰老相关分泌表型(SASP)因子.SASP因子的分泌大致可分为DNA损伤快速旁分泌期、SASP早期、SASP成熟期3个阶段.SASP因子的分子调控机制复杂,涉及DNA损伤反应、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、核因子B(NF-B)及CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBP)激活、SASP基因表观遗传学改变、基因转录后调控和自噬等.SASP因子能改变细胞微环境导致的多种病理状态的发生,已成为调节衰老效应的药物靶标,为肿瘤和年龄相关性疾病提供了新的治疗方向.基于此,本文对SASP因子进行了分类,总结了其在生物过程中的作用,并深入探讨其调控机制.
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丁胱亚磺酰亚胺对正常肝细胞的毒性作用及其机制探讨
目的 探讨丁胱亚磺酰亚胺(BSO)对人胚正常肝细胞株L-02的毒性及其机制.方法 ①用0、10、25、50、100和200 μmol/L的BSO孵育L-02细胞48 h,用MTT法测算细胞存活率.②用0、10、25、50、100、200 μmol/L的BSO培养L-02细胞48 h,用DTNB法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)水平.③用200 μmol/L的BSO培养L-02细胞0、2、12、24、36、48 h,用Western blotting法测算细胞p38磷酸化水平.④用200 μmol/L的BSO培养L-02细胞0、2、6、12、24、48 h,用荧光探针H2DCFDA法测算细胞活性氧簇(ROS)水平.⑤L-02细胞分为对照组、BSO组、SB203580组和BSO+SB203580组.对照组不加任何药物;BSO组加入终浓度为200 μmol/L的BSO;SB203580组加入终浓度为20 μmol/L的SB203580;BSO+SB203580组先加入终浓度为20 μmol/L的SB203580孵育15 min后加入终浓度为200 μmol/L的BSO.24 h后采用MTT法测算各组细胞存活率,采用荧光探针H2DCFDA法检测ROS水平.结果 ①从50 μmol/L开始,BSO可以剂量相关性地降低L-02细胞的存活率(P均<0.05).②BSO可剂量相关性地降低L-02细胞GSH含量,BSO浓度为25 μmol/L时达到低值.③BSO呈时间依赖性增加L-02细胞内p38磷酸化水平(P均<0.05).④加入BSO后L-02细胞ROS水平均较对照组提高(P均<0.05),培养24 h时达到高峰.⑤BSO组L-02细胞ROS水平高于对照组(P<0.05),细胞存活率低于对照组(P<0.05);SB203580组L-02细胞ROS水平和细胞存活率与对照组相比P均>0.05;BSO+SB203580组L-02细胞ROS水平低于BSO组(P<0.05),细胞存活率高于BSO组(P<0.05).结论 BSO对人正常肝细胞具有毒性作用,其机制可能是通过促进p38磷酸化和ROS生成,降低GSH水平实现的.
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丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1和p38在内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化过程中的表达变化
目的:观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化和p38MAPK及丝裂原激活蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)表达的动态变化.方法:分别用免疫组化、免疫印迹(Western blot)和逆转录-聚合酶链反应方法检测假损伤组(S组)和损伤组损伤后不同时间点血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)、p38蛋白和MKP-1 mRNA及蛋白表达的变化.结果:①S组中膜VSMC及内皮细胞PCNA为阴性表达;中膜于损伤后1～14 d,新生内膜(NI)于5～14 d阳性细胞率逐渐增加,28 d后开始逐渐减少,NI阳性率高于中膜.②S组中膜SMα-actin表达为阳性,内皮为阴性;中膜阳性表达于损伤后1 d开始减少,3 d为明显,5d后开始逐渐增加,NI阳性表达弱于中膜.③S组中膜p38呈阴性或弱阳性;损伤后1～35 d呈持续高表达,NI阳性表达强于中膜.p38与PCNA表达变化呈正相关.④S组中膜MKP-1呈弱阳性或阳性表达;损伤后1 d即开始下降,14～28 d稍有回升,至35 d仍未回到S组水平,NI阳性表达稍弱于中膜.MKP-1与PCNA表达变化呈负相关.结论:VSMC增殖能力与其表型转化密切相关,p38MAPK和MKP-1参与了损伤后VSMC表型转化的信号转导及其调节.
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雌激素对戊四唑致痫大鼠海马内GABA和P38的影响
目的:分析月经性癫痫中,雌激素对大鼠海马内γ-氨基丁酸(γ-amiobutyric acid,GABA)和P38的影响,探讨雌激素促癫痫发作的作用机理.方法:利用去卵巢(ovaiectomized, OVX)SD大鼠,用雌激素替代疗法及戊四唑(petylenetetrazole,PTZ)致痫,诱发大鼠癫痫发作,并采用免疫组织化学技术,对大鼠背侧海马不同脑区GABA和P38的免疫反应产物进行观察.结果:(1)GABA免疫组化检测结果显示,实验对照组(OVX+ NS+PTZ)与空白对照组(OVX+NS+NS)相比及实验给药组(OVX+E2+PTZ)与实验对照组相比,背侧海马门区内GABA免疫反应阳性神经元数目均显著性减少.(2)P38免疫反应产物的观察:其免疫反应产物呈特征性点状或颗粒状.在CA1区始层和辐射层、CA3区透明层,空白对照组与实验对照组相比免疫反应强度无明显变化,实验给药组比实验对照组免疫反应增强.在齿状回分子层,3组的免疫反应强度无明显变化.结论:雌激素使海马门区GABA含量减少,从而降低了GABA对癫痫发作的抑制作用,增强了癫痫发作的敏感性.雌激素可使背侧海马CA1区始层和辐射层、CA3区透明层P38的表达增加(即使该区的突触密度增加),从而增加了海马内兴奋性递质的释放,使海马内的兴奋性增强.
