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MnSOD过量表达与BSO对食管癌细胞系的增敏效应
目的 研究过量表达锰超氧化物歧化酶( MnSOD)在丁胱磺酰亚胺(BSO)作用下对食管癌TE-1细胞放射敏感性的影响.方法 采用慢病毒转染法建立MnSOD过量表达的稳定转染细胞(TE-1 Mm)及空载体细胞(TE-1Mn).RT-PCR、Western blot及流式细胞术等方法检测MnSOD过量表达对细胞增殖、凋亡、放射增敏、活性氧荧光强度及蛋白表达变化的影响.结果 RT-PCR及Western blot证实建立了稳定过量表达MnSOD的TE-1细胞系.TE-1 Mm细胞平皿克隆集落形成能力、活性氧荧光强度降低,细胞凋亡率、细胞生长抑制率、放射增敏比及MnSOD蛋白表达相对量明显增加,与TE-1细胞相比差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 MnSOD过量表达与BSO通过抑制增殖、诱导凋亡、下调细胞内活性氧浓度提高食管癌细胞放射敏感性.
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丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌谷胱甘肽系统的影响
目的:观察采用谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂--丁胱亚磺酰亚胺(BSO)排空大鼠心肌谷胱甘肽(GSH)是否影响大鼠心肌组织GSH的稳态,以及是否对GSH代谢相关酶活性及mRNA表达产生影响.方法:采用长时间力竭运动、注射BSO排空GSH两种实验模型,比较对照组与注射BSO组SD大鼠心肌在静息状态和长时间力竭运动后GSH状态及其代谢变化.结果:注射BSO 8天后,大鼠心脏GSH含量分别为对照组?%,且GSH的下降伴随着氧化型谷胱甘肽(GSSG)的下降,GSH/GSSG的比值无显著变化.GSH排空导致GSH代谢酶活性发生适应性变化,注射BSO后心肌中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性与对照组相比显著下降(P < 0.001).注射BSO组与对照组相比,心肌谷氨酰转肽酶(GGT)活性显著增加(P < 0.05).注射BSO力竭组与注射BSO组相比,心肌GGT活性显著增加(P < 0.001),心肌注射BSO抑制γ-谷氨酰半胱酸合成酶(GCS)活性,注射BSO力竭组大鼠心肌GCS mRNA表达量高于注射BSO组,表明极度排空谷胱甘肽后,GCS mRNA表达量的增加可能是机体产生的应激反应.
关键词： 力竭运动 丁胱亚磺酰亚胺 谷胱甘肽 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 γ-谷氨酰转肽酶 -
BSO增强MRP过表达肺癌细胞对顺铂敏感性的作用机制研究
目的:评价使用丁胱亚磺酰亚胺(BSO)克服肿瘤细胞由于高表达MRP而引起对顺铂耐药的可行性,并初步探讨其增敏的作用机制.方法:用基因转染的方法成功建立了一株mrp基因高表达的肺癌细胞株(SPC-A-1/MRP)的基础上,检测BSO作用前后转染细胞对顺铂敏感性的差异,从酶活性测定和转录水平观察了上述过程中谷胱甘肽解毒系统的变化.结果:实验表明同对照(转染不含目的基因的空载质粒)的SPC-A-1/MRP(-)细胞相比,SPC-A-1/MRP细胞对顺铂出现了明显的耐受,BSO可以有效增强MRP高表达的细胞对顺铂的敏感性.BSO通过显著抑制由顺铂引起的肿瘤细胞内GSH解毒系统的活化和MRP蛋白含量升高,有效的克服了肿瘤细胞接触顺铂后过表达MRP而引起的化疗耐受.结论:高表达MRP可以引起肿瘤细胞对顺铂的耐受,BSO针对MRP介导的顺铂耐药有很好的增敏效果.
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丁胱亚磺酰亚胺增强DAAO/D-Ala系统杀伤K562e细胞作用的研究
目的:研究丁胱亚磺酰亚胺(BSO)增强D-氨基酸氧化酶(DAAO)/D-丙氨酸(D-Ala)自杀基因系统在白血病基因治疗中的作用.方法:应用逆转录病毒转染技术获得稳定表达DAAO的高致瘤性K562e单克隆细胞KDfGC,用PCR、原位杂交对DAAO基因修饰的KDGc进行鉴定.应用MTT法检测D-Ala对BSO预处理过的K~rc细胞的杀伤作用.结果:PCR和原位杂交分析证明DAAO基因已整合至细胞基因组中,并在mRNA水平上表达.D-Ala作用24 h,KDfGc细胞的半数抑制浓度(C50)为10.21 mmol/L,KDfGc+BSO的IC50为7.92 mmol/L,两者的95%可信区间不重叠.结论:BSO可增强DAAO/D-Ala系统杀伤K652e细胞作用.
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丁胱亚磺酰亚胺对正常肝细胞的毒性作用及其机制探讨
目的 探讨丁胱亚磺酰亚胺(BSO)对人胚正常肝细胞株L-02的毒性及其机制.方法 ①用0、10、25、50、100和200 μmol/L的BSO孵育L-02细胞48 h,用MTT法测算细胞存活率.②用0、10、25、50、100、200 μmol/L的BSO培养L-02细胞48 h,用DTNB法检测细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)水平.③用200 μmol/L的BSO培养L-02细胞0、2、12、24、36、48 h,用Western blotting法测算细胞p38磷酸化水平.④用200 μmol/L的BSO培养L-02细胞0、2、6、12、24、48 h,用荧光探针H2DCFDA法测算细胞活性氧簇(ROS)水平.⑤L-02细胞分为对照组、BSO组、SB203580组和BSO+SB203580组.对照组不加任何药物;BSO组加入终浓度为200 μmol/L的BSO;SB203580组加入终浓度为20 μmol/L的SB203580;BSO+SB203580组先加入终浓度为20 μmol/L的SB203580孵育15 min后加入终浓度为200 μmol/L的BSO.24 h后采用MTT法测算各组细胞存活率,采用荧光探针H2DCFDA法检测ROS水平.结果 ①从50 μmol/L开始,BSO可以剂量相关性地降低L-02细胞的存活率(P均<0.05).②BSO可剂量相关性地降低L-02细胞GSH含量,BSO浓度为25 μmol/L时达到低值.③BSO呈时间依赖性增加L-02细胞内p38磷酸化水平(P均<0.05).④加入BSO后L-02细胞ROS水平均较对照组提高(P均<0.05),培养24 h时达到高峰.⑤BSO组L-02细胞ROS水平高于对照组(P<0.05),细胞存活率低于对照组(P<0.05);SB203580组L-02细胞ROS水平和细胞存活率与对照组相比P均>0.05;BSO+SB203580组L-02细胞ROS水平低于BSO组(P<0.05),细胞存活率高于BSO组(P<0.05).结论 BSO对人正常肝细胞具有毒性作用,其机制可能是通过促进p38磷酸化和ROS生成,降低GSH水平实现的.
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丁胱亚磺酰亚胺联合放射线对食管癌细胞株TE-1的增敏效应
目的 研究丁胱亚磺酰亚胺( buthionine sulfoximine,BSO)联合放射线对食管癌细胞株TE-1放射增敏的影响.方法 四甲基偶氮唑蓝比色实验(MTT法)观察BSO及放射线对细胞增殖的抑制作用及BSO对食管癌细胞株TE-1的放射增敏作用.流式细胞法观察BSO、放射线对细胞凋亡及细胞周期的影响.反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chine reaction,RT-PCR)、Western blot法观察BSO对锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD) mRNA及蛋白表达的影响.结果 BSO能抑制食管癌TE-1细胞的增殖,具有明显的量效和时效关系；BSO对食管癌TE-1细胞有明显的放射增敏作用；BSO与放射线联合作用于TE-1细胞后,G2/M期细胞比例及凋亡率明显增加,MnSOD mRNA及蛋白表达下降.结论 BSO可能通过影响TE-1细胞周期,降低MnSOD mRNA及蛋白的表达,从而抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡来增强放射线对食管癌细胞的杀伤作用.
