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60Coγ-射线诱导人白血病细胞HPRT基因突变的研究
属于电离辐射的60Coγ-射线的损伤效应早已被证实,但主要集中在对人体正常细胞或实体瘤细胞的影响方面,而有关γ-射线对人白血病细胞的损伤效应,特别是细微分子水平损伤及其生物化学进程还了解得较少.次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase,简称HPRT)基因由于具有以下的特点而成为研究电离辐射致突变的较为理想的生物标记:HPRT基因是细胞存活非必需的,定位于X性染色体上,人类细胞的HRPT基因结构与序列已经清楚等.以往由于实验条件限制,主要采用放射自显影法、多核细胞检测法以及5-溴脱氧尿嘧啶核苷法,但共同的缺陷是不能进一步进行基因突变的定位与定性[1,2].因此,本研究采用单细胞克隆培养技术,观察不同剂量γ-射线对人体白血病细胞HPRT基因的影响作用,为深入研究电离辐射的致突变效应及其应用提供一定的资料.
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贯众影响衰老模型小鼠不同组织酶活性研究
贯众(Polystichum falcatum Diels)能清热解毒,补阳壮肾,强腰膝,治疗阳痿、遗精、遗尿等功效.已有实验证明,贯众能抗乙肝病毒、流感病毒、艾滋病毒等,对子宫平滑肌有明显的收缩作用,还能抑制体内的白血病细胞[1].贯众可提高果蝇的平均寿命[2],能有效提高果蝇体内SOD的活性,降低MDA的含量[3].本研究进一步探索饲喂贯众水提剂一个月后,衰老模型小鼠不同组织有关酶活性的变化.
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4-氧和4-羟-四甲基哌啶氮氧自由基及衍生物对体外鼠肝谷胱甘肽影响及铁离子的络合作用
4-氧-4-羟-四甲基呱啶氮氧自由基(4-TEMPO)是一类稳定的氮氧自由基,应用于自旋标记技术及辐射化学、低毒、无致癌及致突变作用[1].有研究发现其有抗H2O2诱导的红细胞溶血作用,对白血病细胞DNA合成具有明显的抑制作用,能抗大鼠组织脂质过氧化[1,2].本文就4-TEMPO对大鼠肝组织GSH含量影响及对Fe2+络合作用做了进一步的探讨.
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整肠生防治儿童白血病化疗继发腹泻的临床观察
儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)是小儿常见的肿瘤性疾病,治疗首选全身化疗,但全身化疗过程中,在杀死白血病细胞的同时,另一方面也导致身体其他器官功能损害,尤其胃肠道黏膜损害较为常见,易造成菌群失调致腹泻发生可能,部分病人因此被迫中断治疗而影响疗效.我科于2009年1～12月在58例次ALL患儿化疗期间应用整肠生口服防治化疗继发腹泻发生取得一定效果,现报告如下.
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白血病患者的健康教育
健康指导的内容疾病知识指导:白血病是一种造血系统的恶性疾病,特点为骨髓及其他造血组织中的白血病细胞大量增生积聚,并浸润破坏内脏器官和组织,正常造血受抑制,可分为急性和慢性两大类.
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强静磁场对白血病细胞内谷胱甘肽含量的影响
目的 研究强静磁场(SMF static magnetic fields)照射对白血病细胞株Jurkat细胞内谷胱甘肽(GSH)含量的影响.方法 采用4T的强静磁场分别连续照射细胞1、8、24 h,采用生物化学DTNB法测定细胞内GSH含量.结果 在强静磁场照射后,1、8h和24h细胞内谷胱甘肽含量分别为(6.52±1.12)、(6.22±1.09) mg/L和(5.18±1.08) mg/L,低于相应对照组细胞内含量(9.99±1.85)、(9.971±1.28) mg/L和(9.88±1.18) mg/L,两组差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 强静磁场照射能降低白血病细胞内谷胱甘肽的含量.
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从南山藤属植物苦绳中分离得6种新的多羟基类固醇糖苷类化合物
作者从苦绳的根部分离鉴定出6种新的多羟基类固醇糖苷类化合物(1～6)，并对其体外细胞毒活性进行了评估。化合物3和4显示了抗人类白血病细胞(HL-60)的微弱活性，其IC50值分别为14.10μM和19.16μM。
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髓清丸对HEL细胞系作用的血清药理学研究
目的:研究中药复方髓清丸对白血病细胞的作用.方法:采用血清药理学方法体外培养观察人红白血病细胞系(HEL)的增殖、凋亡、细胞周期、细胞形态等细胞学指标.结果:活细胞百分率各含药血清组均较对照组低,MTT法测定髓清丸中剂量组和高剂量组OD值明显低于对照组(p<0.01),中剂量组和高剂量组细胞毒活性均大于20%,高剂量含药血清组G1期DNA含量明显低于对照组(P<0.05),中剂量组凋亡细胞百分率较高(P<0.05).结论:髓清丸能抑制HEL细胞的增殖,并有一定的诱导HEL细胞分化、凋亡的作用.
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中医药治疗白血病研究概况
白血病是一种造血组织的原发性血液病.其病理特征是在骨髓和造血组织中有广泛的白血病细胞异常增生及浸润其他组织器官.在周围血液中,白细胞有质与量的改变,数目增多或减少,并伴有幼稚细胞增多,由于异常白血病细胞增生而影响造血组织的正常造血.临床常有贫血、发热、出血及肝、脾淋巴结肿大等征象.本病起病多急骤,进展迅速,自然存活期在6个月～1年之内,经化疗取得完全缓解后,长期无病生存率可达20%～40%,骨髓移植后可有50%以上患者获得长期无病生存.
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雄黄纳米微粒对于白血病细胞的诱导凋亡及坏死作用
目的:考察雄黄纳米微粒对于HL-60和K562细胞的增殖抑制作用与诱导凋亡及坏死作用,并初步探寻表现药理活性的化学物种.方法:采用"溶剂接力"法制备雄黄纳米微粒悬浮液,应用MTT法检测雄黄纳米微粒对HL-60和K562细胞的增殖抑制作用,通过Annexin V-PI双染流式细胞术和细胞形态学观察检测细胞凋亡和坏死,并以H3AsO3(As2O3在该溶液中的主要存在形式)作为阳性对照.结果:雄黄纳米微粒的平均粒径为159.0 nm.MIT实验结果显示,该制剂对于这2种细胞系均有明显的增殖抑制作用.双染实验表明,雄黄纳米微粒可诱导这2种细胞凋亡和坏死,此结果得到形态学观察的进一步证实.结论:雄黄纳米微粒对于HL-60和562这2种细胞系均具有诱导凋亡和坏死的双重作用,既含有As-0又含有As-S键的硫代亚砷酸盐可能是表现药理活性的主要化学物种之一.
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续断皂苷抗白血病作用的机制探讨
目的 探讨续断皂苷(akebia saponin D,ASD)抗白血病细胞及其作用机制.方法 用不同剂量(10、30、50、100 μg/mL)皂苷处理人急性白血病细胞株U937细胞和人早幼粒白血病细胞株HL-60细胞,采用MTT比色法观察ASD对白血病细胞的作用.以Annexin-(Ⅴ)染色法检测细胞凋亡并以PCR法检测凋亡相关基因的表达.采用Westem blot法检测P53蛋白的变化.采用Griess分光光度法检测样品中一氧化氮(NO)的代谢产物亚硝酸盐的含量.结果 与未处理组相比,50 μg/mL ASD能明显抑制U937细胞和HL-60细胞的生长并呈剂量依赖性,同时伴随bcl-2 mRNA表达的明显下调.Western blot检测结果显示,P53蛋白的表达水平随ASD作用而升高.另外,ASD可以促使U937细胞和HL-60细胞中NO的含量显著提高(P＜0.05).结论 ASD对U937细胞和HL-60细胞具有增殖抑制和诱导凋亡的作用,其机制与bcl-2基因的下调,p53蛋白上调,以及促进白血病细胞内NO含量提高相关.
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清开灵注射液及其有效成分诱导人急性早幼粒白血病细胞凋亡的研究
目的:研究清开灵注射液及其有效成分治疗急性白血病的作用机理.方法:采用体外培养技术、MTT法、细胞形态学、DNA凝胶电泳及流式细胞检测技术,对清开灵及其有效成分诱导的人急性早幼粒白血病(HL-60)细胞凋亡进行分析.结果:清开灵及其有效成分黄芩甙、猪去氧胆酸对HL-60细胞均有很强的细胞毒作用,牛黄胆酸的作用次之;前三者在体外作用6h即可诱导细胞凋亡,流式细胞仪检测出现典型凋亡峰;牛黄胆酸无诱导HL-60细胞凋亡作用.结论:清开灵注射液及其有效成分可在体外诱导白血病细胞凋亡,可能是其治疗急性白血病的作用机理之一.
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中西医结合治疗急性白血病并发带状疱疹21例
急性白血病是一种造血系统的恶性疾病,由于骨髓中白血病细胞大量增殖,并浸润组织器官使正常造血功能受到抑制.临床上除常见进行性贫血及出血外还常合并各种类型的继发感染.带状疱疹即是因机体抵抗力下降由水痘-带状疱疹病毒沿神经纤维末梢发生的一种特殊皮肤感染.急性白血病患者化疗期间易合并带状疱疹,带状疱疹病情重,恢复时间长,易于发生疱疹后遗神经痛,给患者带来极大痛苦,而且严重影响疾病的治疗效果.2006年1月-2010年12月,我科采用中西医结合方法治疗21例急性白血病合并带状疱疹的患者,现就其临床特点和疗效、对急性白血病的治疗的影响报告如下.
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MicroRNA-26a的表达对急性髓系白血病细胞增殖的影响
目的 观察构建has-miR-26a重组慢病毒的表达载体对急性髓系白血病细胞增殖能力的影响.方法 构建人MicroRNA-26a慢病毒表达载体(LV-miR-26a-GFP)并感染人急性髓系白血病细胞系NB4；分为未感染组、感染组(感染LV-miR-26a-GFP)以及阴性对照组(感染LV-GFP)；用real-time RT-PCR检测miR-26a在NB4细胞内的表达水平,Western blot检测PTEN的表达；用CCK-8法绘制细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成实验检测细胞的增殖.结果 成功构建miR-26a重组慢病毒的表达载体,感染白血病细胞NB4后,能够成功过表达miR-26a.生长曲线的结果显示与感染LV-GFP阴性对照组和未感染组相比,LV-miR-26a-GFP感染组细胞的增殖速度显著增加(P＜0.01),软琼脂克隆形成实验证实了感染LV-miR-26a-GFP的NB4细胞的克隆形成能力(GFP+克隆数为75+10)与阴性对照组(感染LV-GFP)相比(GFP+克隆数为26 +5)显著增强(P＜0.05).在NB4细胞中过表达miR-26a后,其靶基因PTEN的表达明显被抑制.结论 MicroRNA-26a的表达可增强急性髓系白血病细胞的增殖能力,促进白血病细胞的增殖.
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VEGF反义核酸增强HL60和K562细胞对柔红霉素敏感性
研究发现恶性血液病细胞高表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),并不同程度表达VEGF受体[1～2],VEGF在白血病中的作用不够明确,可能是通过自分泌作用机制,促进白血病细胞存活和生长、降低白血病细胞对化疗药物的敏感性等.
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二甲双胍通过调节成脂影响脂肪细胞对白血病细胞作用
目的:探讨二甲双胍对3T3-L1前脂肪细胞的诱导分化作用,并研究处理后脂肪细胞对白血病细胞的影响.方法:在3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成熟过程中分别给予不同浓度二甲双胍处理,诱导后通过油红O染色和吸光度值(OD值)检测其分化程度;应用rea1-time PCR检测成脂后关键基因PPARγ、C/EBPα、FABP4(ap2)mRNA的表达水平.诱导后的脂肪细胞分别与GFP+-THP-1细胞共培养,加入1μg/ml的阿糖胞苷,48 h后采用流式细胞仪检测GFP+-THP-1细胞的凋亡.收集诱导后脂肪细胞的上清,与肿瘤细胞基础培养液(RPMI 1640)以1∶1混合后培养肿瘤细胞,应用CCK8检测脂肪细胞对白血病细胞增殖,加入1 μg/ml的阿糖胞苷,48 h后应用细胞计数仪检测其化疗保护作用.结果:二甲双胍处理组OD值及成脂基因C/EBPα、FABP4表达较对照组低,而PPARγmRNA表达无明显改变;二甲双胍处理后的脂肪细胞共培养组白血病细胞凋亡率高于对照组.脂肪细胞促进白血病细胞增殖并对其有化疗保护作用,这些作用被二甲双胍降低.结论:二甲双胍能抑制3T3-L1前脂肪细胞的成脂分化,并调节脂肪细胞对白血病细胞凋亡、增殖及化疗的保护作用.
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长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病细胞增殖的机制研究
目的:探讨长柱重楼皂苷抑制急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、K562、KG-1、HT-93增殖的作用原理.方法:HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞与长柱重楼皂苷共同培养24、48和72 h,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞株的凋亡率,Western blot检测凋亡蛋白PARP,Caspase3,Mcl-1,BCL-2,BAX,P53,P27的表达变化,GAPDH为内参对照.结果:与对照组相比,长柱重楼皂苷可以抑制HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞的增殖,且呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性(r=0.9436;r=0.8623;r=0.9922;r=0.8918).不同浓度的长柱重楼皂苷(4和8μg/ml)分别作用于HL-60、K562、KG-1、HT-93细胞24 h后,与表达对照组比较,凋亡细胞的比例均明显增加.随着药物浓度的增加,PARP与Caspase3的剪切带也逐渐增加(r =0.9945;r=0.965),同时BCL-2家族的促凋亡蛋白BAX表达逐渐增加(r=0.9916),而抗凋亡蛋白MCL-1与BCL-2表达逐渐减少(r=0.9959;r=0.9927).抑癌基因p53蛋白及其下游p27蛋白的表达也随着药物浓度的增加而逐渐升高(r =0.9959;r=0.9778).结论:长柱重楼皂苷通过活化内源性凋亡通路有效抑制白血病细胞增殖,这为临床上治疗AML白血病提供潜在新药物选择.
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Hsp90选择性抑制剂17-AAG诱导白血病细胞株凋亡的基因谱研究
目的:探讨热休克蛋白90(Hsp90)抑制剂17-AAG对急性白血病细胞株HL-60和NB4细胞的凋亡诱导作用及其可能机制.方法:应用CCK-8比色法观察17-AAG对HL-60和NB4细胞的生长抑制作用;用Annexin V/PI标记流式细胞术分析细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP的表达水平及其活化状态,采用实时定量PCR法检测17-AAG处理后NB4细胞的凋亡相关基因的mRNA变化.结果:17-AAG呈剂量依赖性抑制白血病细胞的生长.Annexin V测定、细胞周期分析和Caspase-3、PARP1的活化均表明17-AAG诱导白血病细胞的凋亡.实时荧光定量PCR分析发现,17-AAG处理后实验组和对照组相比有56个基因显著上调,23个基因显著下调.结论:17-AAG可诱导白血病细胞的凋亡,抑制细胞增殖.17-AAG处理白血病细胞后凋亡相关基因发生明显变化,激活凋亡信号通路可诱导细胞发生凋亡.
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大黄素衍生物的合成及其抑制白血病细胞增殖作用的研究
本研究探讨新合成的大黄素衍生物对白血病细胞增殖的抑制作用,希望从中筛选出具有抗白血病活性的药物,以备后续进行更深入的研究.通过对大黄素一系列的结构修饰合成10种大黄素衍生物,采用MTT比色法检测大黄素衍生物对多种白血病细胞株的增殖抑制作用.结果表明:大黄素衍生物E10-E19作用于K562细胞48 h的半数抑制浓度(IC50)为0.84-12.01 μmol/L,其中大黄素衍生物E19的抑制增殖作用强,E16、17对K562细胞没有抑制增殖作用.从中筛选出的E19作用于U937、NB4、Molt-4和CA-46细胞,其48 h IC5o分别为0.85、0.9、0.76、0.8 μmol/L.E19作用于LQ2细胞48 h的IC50为3.6 μmol/L.E19作用于3例正常人外周血单个核细胞48 h的IC50为4.01-4.78μmol/L.结论:大黄素衍生物E19对白血病细胞增殖有显著的抑制作用,且具有一定特异性,对其抗白血病机的制值得进一步的研究.
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低温保存对白血病源性树突状细胞的影响
本研究观察低温保存对白血病源性树突状细胞(L-DCs)的生物学特性和功能的影响.取急性、慢性髓系白血病骨髓细胞,将其一部分细胞立即检测,一部分细胞立即培养,一部分细胞加入细胞保护剂低温保存一定时间复温后培养.细胞培养时,在细胞培养体系内加入组合细胞因子并培养12天,然后分别检测3组细胞的细胞形态、细胞免疫表型、混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞(CTL)效应,并对结果进行相互比较分析.结果表明:在细胞形态学方面,急性、慢性髓系白血病患者骨髓细胞在不染色或在瑞氏染色下仅见白血病细胞,而未观察到"树突状"细胞,但经组合的细胞因子培养后,均出现了"树突状"形态的细胞,低温保存前、后二者比较,无明显差异;在细胞表面免疫标志表达方面,经组合细胞因子培养的细胞与未培养的细胞相比,细胞表面表达的CD80、CD54、HLA-DR、CD1a、CD83、CD86明显上调,而CD14表达则明显下调,低温保存前、后的细胞在上述几种细胞表面免疫表达指标方面相比较无明显差异;低温保存后的白血病细胞经培养后,不仅有明显的混合淋巴细胞反应,而且在与T细胞作用后T细胞表面抗原CD8和CD25免疫标记细胞明显增多,明显地表现了CTL杀伤自体白血病细胞的效应.结论:髓系白血病细胞在组合细胞因子培养条件下,可诱生为L-DC;L-DC的诱生在生物学特性方面不受低温保存的影响.
