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CRE和AP-1元件参与人hsp90β基因的表达
为了进一步阐明人热休克蛋白90b(hsp90b)基因的表达调控机制,本文对hsp90b基因调控序列中的CRE和 AP-1元件进行了研究.构建了含有这两个元件的系列删切报告基因质粒,通过转染 Jurkat细胞,检测并分析报告基因的活性.结果表明,CRE和 AP-1元件均不同程度地参与了hsp90b基因的组成性、PHA激活和热诱导表达.
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肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1表达及转录调控的影响
探讨肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1活性和mRNA表达的影响,以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因5'上游序列的调控元件在该基因转录调控中的作用.体外培养人脐静脉内皮细胞,加入不同浓度肿瘤坏死因子α作用不同时间.采用发色底物法测定纤溶酶原激活物抑制剂1活性,Northern印迹分析法测定纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA水平.基因重组技术构建四个含人纤溶酶原激活物抑制剂1基因不同长度5'上游序列的荧光素酶报告基因质粒,瞬时转染进入内皮细胞,并测定荧光素酶的表达情况. 运用聚合酶链反应和序列分析法对构建质粒上的三个AP-1元件分别进行定点突变.结果发现,不同浓度肿瘤坏死因子α作用人脐静脉内皮细胞后,纤溶酶原激活物抑制剂1活性和mRNA表达量均明显增高;当转染质粒含有纤溶酶原激活物抑制剂1基因上游序列-1509/+90和-823/+90时,肿瘤坏死因子α使转染细胞的荧光素酶表达量比对照组明显增高;当转染质粒含有-553/+90和-47/+90时,肿瘤坏死因子α的诱导作用不明显.在纤溶酶原激活物抑制剂1 5'上游序列的三个AP-1元件突变后,肿瘤坏死因子α的诱导作用明显降低.结果提示,肿瘤坏死因子α增强血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1活性与mRNA表达;纤溶酶原激活物抑制剂1活性提高与其mRNA表达增加呈正相关;纤溶酶原激活物抑制剂1 5'上游序列中三个AP-1元件在肿瘤坏死因子α对纤溶酶原激活物抑制剂1诱导中具有重要调控作用.
