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溴氰菊酯染毒大鼠的脑组织中GCS亚单位和Nrf2表达的时间进程
目的研究溴氰菊酯(DM)对大鼠大脑皮层和海马组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)轻亚单位(GCSl)和重亚单位(GCSh)mRNA表达,以及GCSh和转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)基因蛋白表达时间进程的影响.方法DM染毒组(DM 12.50mg/kg bw)和溶剂对照组大鼠染毒1次,分别于大鼠染毒后不同时间点处死大鼠,分离皮层和海马.用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定mRNA表达的相对量.联合用免疫组织化学方法和图像分析系统检测海马和大脑皮层中GCS重亚单位蛋白(GCS-HS)和Nrf2蛋白的水平.结果(1)DM染毒后第5h和第48h大鼠大脑皮层中GCSh mRNA相对水平分别降低至对照组的83.9%、86.0%(P＜0.05),第5h、24h和48h Nrf2 mRNA分别增高至0h对照组的146.4%、145.2%和147.9%(P＜0.05).(2)DM染毒后第5h和24h海马中GCSh mRNA相对水平分别增高至0h对照组的118.4%、118.4%(P＜0.05),第5h海马中GCSl mRNA比0h对照组、24h和48h组均高,增高至对照组的121.4%(P＜0.05).DM染毒后各时间点海马Nrf2 mRNA水平未见明显的变化(P＞0.05).(3)DM染毒后海马不同分区(CA1、CA2、CA3和齿状回)和大脑皮层中的GCS催化亚单位(GCS-HS)和转录因子Nrf2蛋白水平均未见明显改变.结论本实验条件下DM染毒后,大鼠海马GCSh和GCSl mRNA基因表达出现上调,而脑皮层GCSh基因表达出现下调,Nrf2 mRNA水平表达出现上调,但海马和皮层组织中的GCS-HS和Nrf2蛋白水平未见显著变化.
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电针对脑缺血大鼠大脑皮层γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶蛋白及基因表达的影响
目的:观察电针“百会”“大椎”穴对局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GCS)蛋白及其mRNA表达的影响,进一步探讨电针提高脑缺血再灌注大鼠抗氧应激能力的分子生物学机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组(模型组)、缺血再灌注十电针组(电针组),每组10只.用改良Longa线栓法制备脑缺血再灌注模型,电针组取“百会”大椎”穴,电针刺激30 min.运用免疫组织化学法和RT-PCR技术分别检测大鼠大脑皮层γ-GCS蛋白及其mRNA的表达.结果:模型组与假手术组相比,大脑皮层锥体细胞层的γ-GCS蛋白阳性细胞数表达差异无统计学意义(P＞0.05)；而电针组与模型组相比,可见到大量的γ-GCS蛋白阳性细胞表达(P＜0.01),且平均吸光度显著升高(P＜0.01).电针组的GCS重亚单位(GCSh) mRNA和GCS轻亚单位(GCSI) mRNA表达量亦明显高于模型组(P＜0.05).结论:电针“百会”“大椎”穴可明显增加局灶性脑缺血再灌注大鼠大脑皮层γ-GCS蛋白及其mRNA表达,提示电针可促进机体谷胱甘肽系统清除受损神经元的氧自由基紊乱,保护大脑神经细胞.
关键词： 脑缺血再灌注损伤 电针 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 蛋白表达 mRNA表达 -
补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响
目的：观察补阳还五汤精简方对局灶性脑缺血大鼠脑谷胱甘肽抗氧化系统的影响,探讨其作用机制。方法将120只SD大鼠采用随机数字表法分成假手术组、模型组、补阳还五汤组、补阳还五汤精简方组。除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉线栓法建立局灶性脑缺血模型,造模2 h后,各给药组给予相应药物灌胃,假手术组、模型组给予等量生理盐水灌胃。各组分别于脑缺血后1、3、7 d检测脑组织还原型谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。同时,采用实时荧光定量PCR、Western blot检测大鼠脑缺血后γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)mRNA 和蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型组脑组织 GSH 含量及GSH-Px活性明显降低(P＜0.05,P＜0.01),γ-GCS mRNA及蛋白表达升高,其中第1日明显(P＜0.05)；与模型组比较,各给药组多能不同程度升高GSH含量及GSH-Px活性,同时上调γ-GCS mRNA及蛋白表达,其中第3日差异有统计学意义(P＜0.05)。结论补阳还五汤精简方通过调控脑缺血后谷胱甘肽抗氧化系统中GSH、GSH-Px及γ-GCS的表达,发挥抗氧化作用。
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γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶基因调控的初步研究
目的 研究抗氧化基因--大鼠γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的功能区及其调控表达.方法 克隆1.76 kb大鼠γ-GCS基因的重链亚单位--GCLC基因的上游调控序列,并构建含荧光素酶基因的报道载体GCLC-Luc (GCLC/pGL-3).利用嵌顿缺失方法构建GCLC基因的缺失体,并将其表达载体转染大鼠肺泡上皮细胞,在细胞中分析该基因的调控区域.通过该方法初步发现GCLC基因的上游调控序列的-745～-705 bp属负性调控区域.利用EMSA和supershift证实大鼠肺泡上皮细胞GCLC基因负调控区域的E-box元件能与转录因子USF1/USF2特异性的结合.将USF的真核表达载体和逆转录病毒表达载体分别导入肺泡上皮细胞,观察GCLC基因的转录活性和GCLC蛋白的表达情况.结果 GCLC基因的-403～-111 bp和-705～-613 bp区段属正调控区域;-745～-705 bp属负调控区域.EMS和supershift证实上游刺激因子(USF)能与该负调控区域的E-box元件结合抑制GCLC基因的转录和表达.结论 发现GCLC基因其中2个正调控区域(-403～-111 bp与-705～-613 bp)和1个负调控区域(-745～-705 bp), 其中负调控区域-745～-705 bp上的 E-box元件通过与USF结合介导GCLC基因的负性表达调控.
关键词： 慢性阻塞性肺病 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 氧化应激 E-box元件 大鼠 -
大鼠GCLC基因两个相邻E-box元件功能分析
目的 研究GCLC基因上游两个相邻E-box元件的作用及探讨E-box元件组合的基因转录抑制机制.方法 利用PCR定点缺失法构建单缺失E-box元件(-804～-799)以及双缺失E-box元件(-804～-799、-729～-724)含GCLC上游启动子序列的报告基因载体.将所构建的载体在脂质体介导下瞬时转染大鼠支气管上皮细胞(RTE)、大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149),通过比较转染后细胞的荧光素酶活性分析E-box元件对GCLC基因转录活性的影响.结果 成功构建出定点缺失E-box元件的GCLC-Luc.在大鼠支气管上皮细胞和大鼠肺泡上皮细胞(CCL-149),转染GCLC-delhE-box-Luc组与GCLC-DdelE-box-Luc组荧光素酶值较转染GCLC-Luc组均明显升高(P均＜0.01),均与转染GCLC-delE-box-Luc组荧光素酶值水平大致相同.E-box元件(-804～-799,CACATG )在GCLC基因的基础状态下的转录表达中起抑制作用.结论 两个E-box元件可能以转录因子及元件复合物形式抑制GCLC基因的转录调控.
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不同潮气量机械通气对大鼠肺组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶和转化生长因子β1的影响
目的 观察不同潮气量机械通气大鼠肺组织γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)和转化牛长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)mRNA及其蛋白表达水平,探讨氧化/抗氧化失衡在呼吸机相关性肺损伤(ventilator associated lung injury,Vau)中的作用.方法 24只雄性Wistar大鼠随机(随机数字法)分为对照组、小潮气量组和大潮气量组(各组8只),测定其肺组织和血浆中MDA含量,并分别采用原位分子杂交技术和免疫组织化学染色法检测肺组织γ-GCS,TGF-β_1,mRNA及其蛋白表达水平,并进行相关性分析.组间差异比较采用方差分析法,各组均数间两两比较采用SNK-q检验,以P＜0.05表示差异有统计学意义,相关性分析采用Pearson直线相关分析法.结果 与对照组和小潮气量组比较,大潮气量组大鼠肺组织和血浆MDA含量、肺组织TGF-β_1mRNA及其蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),而γ-GCS mRNA及其蛋白表达水平则明显低于对照组和小潮气量组(P＜0.01);小潮气量组与对照组各项指标比较,差异无统计学意义(P＞0.05).相关分析结果表明大潮气量组大鼠肺气道卜皮细胞γ-GCS和TGF-β_1 mRNA及其蛋白表达均呈负相关(r值分别为-0.96,-0.85,P＜0.01).结论 大潮气量机械通气町诱导肺组织TGF-β_1 mRNA及其蛋白高表达,使γ-GCS表达降低,谷胱甘肽合成减少,导致局部肺组织氧化/抗氧化系统失衡,是VALI发生的重要因素之一.
关键词： 机械通气 肺损伤 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 转化生长因子-β_1 -
吸烟对人气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响
目的 通过观察吸烟对人气道上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨γ-GCS在吸烟所致慢性气道炎症及氧化/抗氧化失衡中的作用.方法 选取行支气管镜检查的患者40例,分为4组:吸烟慢支组、吸烟非慢支组、不吸烟慢支组、不吸烟非慢支组,每组各10例.通过支气管镜刷检获取支气管上皮细胞,采用免疫细胞化学法半定量检测支气管上皮细胞中γ-GCSh蛋白的表达水平.结果 ①吸烟慢支组气道上皮细胞γ-GCSh的表达水平(0.216±0.120)低于不吸烟慢支组(0.426±0.111)、不吸烟非慢支组(0.589±0.220)及吸烟非慢支组(0.386±0.175),差异均有统计学意义(P均＜0.05);②吸烟非慢支组气道上皮细胞γ-GCSh的表达水平(0.386±0.175)低于不吸烟非慢支组(0.589±0.220),差异有统计学意义(P＜0.05);③不吸烟慢支组气道上皮细胞γ-GCSh的表达水平(0.426±0.111)低于不吸烟非慢支组(0.589±0.220),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 γ-GCSh在不吸烟非慢支者表达强,而在吸烟慢支者的气道内表达降低.提示γ-GCS在香烟所致气道炎症、氧化应激及氧化/抗氧化失衡中发挥一定的作用.
关键词： 吸烟 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 慢性支气管炎 -
红霉素在早产鼠高氧肺损伤中对白细胞介素6、8及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响
目的 探讨红霉素在早产鼠高氧肺损伤中对白细胞介素6 (IL-6),IL-8及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的干预作用.方法 96只早产新生SD大鼠生后1d分为四组:Ⅰ组空气暴露+生理盐水、Ⅱ组空气暴露+红霉素、Ⅲ组高氧暴露+生理盐水、Ⅳ组高氧暴露+红霉素,每组各24只.四组分别于高氧或空气暴露后1、7、14d处死取肺组织做病理学检查.采取双抗体夹心酶联免疫吸附试验分析肺组织匀浆细胞因子IL-6、IL-8和γ-GCS的水平,并采取半定量逆转录聚合酶链反应测定γ-GCS mRNA的表达.结果 Ⅰ、Ⅱ组肺组织无明显病理改变,Ⅲ组肺泡炎性改变及水肿较Ⅳ组更为明显.Ⅳ组γ-GCS水平在7、14 d较Ⅲ组降低,但是γ-GCS mRNA表达较γ-GCS mRNA均明显增强(P均＜0.05).Ⅲ组1、7、14 d IL-6及IL-8水平较Ⅰ组均显著增强(P均＜0.05).Ⅳ组IL-6水平在1、7、14d与Ⅲ组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05),而IL-8水平仅在7、14d较Ⅲ组明显下降(P均＜0.05).结论 氧化爆发诱导的炎症介质IL-6及IL-8参与高氧肺损伤发病过程,红霉素可抑制其释放,影响γ-GCS活性从而提高谷胱甘肽抗氧化能力.
关键词： 红霉素 高氧症 肺损伤 白细胞介素类 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 -
不同潮气量机械通气对大鼠肺组织激活蛋白-1、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶的影响
目的 通过观察不同潮气量机械通气对大鼠肺组织激活蛋白- 1 (AP-1) 和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响,探讨氧化-抗氧化系统失衡在呼吸机所致肺损伤(VILI)发生中的作用.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、小潮气量(L-VT)组和大潮气量(H-VT)组,每组8只.光镜下观察各组大鼠肺组织病理损伤程度;采用硫代巴比妥酸比色法测定大鼠血浆及肺组织中丙二醛(MDA)含量,原位分子杂交技术和免疫组织化学染色法检测肺组织AP-1和γ-GCS mRNA及其蛋白表达水平.结果 H-VT组大鼠肺组织和血浆中MDA含量明显高于对照组和L-VT组(均P＜0.01),肺组织病理损伤程度较对照组和L-VT组明显加重;L-VT组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).H-VT组肺组织γ-GCSm RNA及其蛋白表达水平明显低于对照组和L-VT组(均P＜0.01),而AP-1 mRNA及其蛋白表达水平明显高于对照组和L-VT组(均P＜0.01),L-VT组与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 大潮气量机械通气通过上调肺组织AP-1 mRNA及其蛋白表达,抑制γ-GCS活性,导致肺组织局部谷胱甘肽合成减少和氧化-抗氧化系统失衡,可能是VILI发生的重要因素之一.
关键词： 机械通气 激活蛋白-1 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 -
EGCG对氧化应激诱导的大鼠NRK细胞Nrf2和γ-GCS基因表达的影响
目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对过氧化氢(H2O2)诱导的肾小管上皮细胞(NRK)抗氧化反应的机制.方法 将培养细胞分正常对照组、H2O2模型组、EGCG治疗组.MTT法检测细胞活力,实时定量PCR法检测NRK细胞核因子-E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor2,Nrt2)mRNA和γ-谷氮酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcystein synthase,γ-GCS)mRNA表达,免疫组化法检测NRK细胞中Nrf2、γ-GCS蛋白的表达,Western blot法测定NRK细胞Nrf2、γ-GCS蛋白表达量.结果 正常对照组NRK细胞的活性为97.61±6.33,模型组NRK细胞的活性明显降低(56.38±5.57)(P<0.01).当EGCG浓度分别为5、10、20 me,/L时,细胞活性为77.42±5.31、83.27±5.94、90.24±5.72,明显高于模型组(P<0.05,P<0.01).EGCG可以上调NRK细胞Nrf2和γ-GCS mRNA和蛋白的表达,且具有剂量依赖性.结论 氧化应激能导致大鼠NRK活力下降,凋亡增加,EGCG通过促进Nrf2、γ-GCS表达的增加,提高NRK细胞的抗氧化能力,促进氧化应激后损伤的修复.
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丁胱亚磺酰亚胺排空组织谷胱甘肽对大鼠心肌谷胱甘肽系统的影响
目的:观察采用谷氨酰半胱氨酸合成酶抑制剂--丁胱亚磺酰亚胺(BSO)排空大鼠心肌谷胱甘肽(GSH)是否影响大鼠心肌组织GSH的稳态,以及是否对GSH代谢相关酶活性及mRNA表达产生影响.方法:采用长时间力竭运动、注射BSO排空GSH两种实验模型,比较对照组与注射BSO组SD大鼠心肌在静息状态和长时间力竭运动后GSH状态及其代谢变化.结果:注射BSO 8天后,大鼠心脏GSH含量分别为对照组?%,且GSH的下降伴随着氧化型谷胱甘肽(GSSG)的下降,GSH/GSSG的比值无显著变化.GSH排空导致GSH代谢酶活性发生适应性变化,注射BSO后心肌中谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性与对照组相比显著下降(P < 0.001).注射BSO组与对照组相比,心肌谷氨酰转肽酶(GGT)活性显著增加(P < 0.05).注射BSO力竭组与注射BSO组相比,心肌GGT活性显著增加(P < 0.001),心肌注射BSO抑制γ-谷氨酰半胱酸合成酶(GCS)活性,注射BSO力竭组大鼠心肌GCS mRNA表达量高于注射BSO组,表明极度排空谷胱甘肽后,GCS mRNA表达量的增加可能是机体产生的应激反应.
关键词： 力竭运动 丁胱亚磺酰亚胺 谷胱甘肽 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 γ-谷氨酰转肽酶 -
香烟烟雾暴露对大鼠支气管肺泡灌洗液及外周血4-HNE和γ-GCS表达的影响
目的 研究香烟烟雾暴露对大鼠支气管肺泡灌洗液( BALF)及外周血4-羟基壬稀醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-Glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)表达的影响,探讨4-HNE及γ-GCS在COPD氧化/抗氧化失衡发病机制中的作用.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为不吸烟组、吸烟6周组和吸烟12周组；采用双抗体夹心酶联免疫吸附( ABC-ELISA)法分别检测各组大鼠BALF及外周血4-HNE和γ-GCS的含量.结果 (1)与不吸烟组(15.917±1.584；12.305±1.822)比较,吸烟6周组(21.376±2.80；18.333±2.585)和吸烟12周组(28.634±2.999；22.754±3.882)大鼠BALF和外周血中4-HNE含量明显增加,差异均有统计学意义(P均＜0.01)；吸烟12周组与吸烟6周组比较有所增加,差异也有统计学意义(P＜0.01).(2)与不吸烟组(13.525±2.311；11.847±1.171)比较,吸烟6周组(15.802±1.647；16.221±1.577)大鼠BALF和外周血中γ-GCS的表达明显增加,差异均有统计学意义(P ＜0.05；P＜0.01)；与不吸烟组比较,吸烟12周组( 11.527±1.606；9.015±1.569)的表达明显减少,差异也有统计学意义(P ＜0.05；P＜0.01).(3)吸烟6周组BALF及外周血4-HNE和γ-GCS的表达呈正相关(r=0.764,r =0.674),吸烟12周组BALF中4-HNE和γ-GCS表达呈负相关(r=-0.777),差异均有统计学意义(P均＜0.05),而外周血中二者表达无显著相关性.结论 香烟烟雾暴露可使大鼠体液4-HNE及γ-GCS的表达水平增高,随着吸烟时间延长,γ-GCS逐渐降低,提示二者在COPD氧化/抗氧化失衡中发挥一定的作用.
关键词： 香烟烟雾 氧化/抗氧化失衡 4-羟基壬稀醛 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 -
急性砷暴露对小鼠机体谷胱甘肽水平其调控酶蛋白表达的影响
目的 探讨急性砷暴露小鼠机体谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平变化及其调控酶γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-glutamylcysteine synthetase,γ-GCS)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)和谷胱甘肽转移酶(glutathione transferase,GST)的蛋白表达.方法 将170只健康封闭群8周龄清洁级昆明雌性小鼠按体重随机分为5组,分别为对照(蒸馏水)组(10只)和2.5、5、10、20 mg/kg亚砷酸钠染毒组(各40只).采用一次性灌胃方式进行染毒,染毒容量为10ml/kg.染毒后6、12、24、48 h(对照组染毒12h),采用二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法测定全血中GSH含量；采用Beutler改良法测定肝脏中GSH含量；采用Western Blot法检测肝脏中γ-GCSm、γ-GCSc、GR和GST的蛋白表达.结果 随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,小鼠全血GSH含量整体呈上升趋势.随着亚砷酸钠染毒剂量的升高和染毒时间的延长,小鼠肝组织中GSH含量整体呈先上升后下降的趋势；并均在染毒12h时达到高.亚砷酸钠染毒还能够显著诱导机体GSH相关调控酶(γ-GCSm、γ-GCSc、GR和GST)的蛋白表达；且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高和染毒时间的延长,其蛋白表达均逐渐增加.结论 急性砷暴露能够有效地持续性诱导肝脏GSH相关调控酶γ-GCS、GR和GST的蛋白表达.
关键词： 亚砷酸钠 谷胱甘肽 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 谷胱甘肽还原酶 谷胱甘肽转移酶 -
支气管哮喘豚鼠肺组织中Nrf2对γ-GCS的作用
目的:研究支气管哮喘豚鼠肺内Nrf2对γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的作用.方法:成年雄性豚鼠20只,随机分成2组(n=10):①对照组(C组);②哮喘组(A组),以腹腔内注射联合雾化吸入卵蛋白复制哮喘模型.测肺组织中活性氧(ROS)、还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和总谷胱甘肽的含量;测细支气管炎症细胞浸润及支气管重塑指标;原位杂交测肺组织中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶重链(γ-GCSh)mRNA表达;免疫组化测γ-GCS和Nrf2蛋白质在肺组织中的表达;RT-PCR测Nrf2 mRNA在肺组织中的表达;双酶法测γ-GCS的活性.结果:①A组细支气管嗜酸性粒细胞(E)数和淋巴细胞(L)数,较C组明显增多(P＜0.01),并出现细支气管重塑.②A组肺组织中ROS、GSSG和总谷胱甘肽较C组明显增高(P＜0.01),与C组比较,GSH/GSSG明显下降(P＜0.01),而GSH差异无统计学意义.③免疫组化显示Nrf2和γ-GCS A组较C组明显增高(P＜0.01);原位杂交显示γ-GCS-h mRNA表达A组较C组亦明显增高(P＜0.01).④RT-PCR显示在肺组织中Nrf2 mRNA转录C组和A组无明显差异.⑤γ-GCS活性A组为(28±8)U,与C组(9±2)U比较,差异有统计学意义(P＜0.01).⑥直线相关性分析显示:在肺组织中Nrf2与ROS、GSSG、γ-GCS-h mRNA、γ-GCS蛋白质及γ-GCS活性呈高度正相关;GSH/GSSG与Nrf2蛋白质、γ-GCS-hmRNA、γ-GCS蛋白质及γ-GCS活性呈高度负相关.结论:在支气管哮喘豚鼠肺中存在氧化应激,氧化应激可能通过上调Nrf2而上调γ-GCS表达.
关键词： 支气管哮喘 氧化应激 Nrf2 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 -
醒脑静注射液对急性脑梗死患者神经功能缺损的影响及其机制
目的 观察醒脑静注射液对急性脑梗死(ACI)患者外周血单个核细胞(PBMC)中γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)及美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的影响,探讨其神经功能的保护作用机制.方法 选择2015年1月至11月在湖北省荆门市第一人民医院神经内科住院的70例确诊为ACI患者,按随机数字表法分为对照组和观察组,每组35例.两组均进行一般常规治疗,观察组在常规治疗基础上静脉滴注(静滴)醒脑静注射液30 mL(加入0.9％生理盐水注射液250 mL中),每日1次,连用14d.同时选取本院35例健康志愿者作为健康对照组.治疗前和治疗后7d、14d监测对照组和观察组患者NIHSS评分的变化;比较3组受试者外周血单个核细胞(PBMC)中γ-GCS、GSH-Px和CAT水平;采用Pearson相关分析法分析抗氧化应激因子水平与NIHSS评分的相关性.结果 两组治疗后NIHSS评分均较治疗前降低,γ-GCS、GSH-Px、CAT均较治疗前明显升高,且以观察组治疗后14 d的变化较对照组更显著[NIHSS评分(分):6.18±0.36比11.27±1.26,γ-GCS (ng/L):91.72±30.29比67.51±23.96,GSH-Px(mg/L):202.25±55.80比185.25±49.93,CAT(kU/L):230.25±81.29比200.38±72.78;均P＜0.05];治疗前及治疗后14 d NIHSS评分与γ-GCS、GSH-Px和CAT呈显著负相关(治疗前r值分别为-0.696、-0.549、-0.427,P值分别为0.000、0.001、0.015;治疗后r值分别为-0.435、-0.452、-0.406,P值分别为0.011、0.009、0.037).结论 醒脑静注射液可明显改善ACI患者的神经功能缺损,可能与上调γ-GCS、GSH-Px和CAT水平密切相关.
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人参皂苷对波动性高血糖大鼠肾脏Nrf2/ARE信号通路的影响
[目的]探讨人参皂苷对波动性高血糖大鼠肾脏氧化应激及转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)/应答元件(ARE)信号通路的影响.[方法]实验以32只雄性SD大鼠为研究对象,分为正常对照组(NC组,n=8只)和波动性高糖模型组(n=24只),高脂饲料喂养模型组2周后,链脲佐菌素(STZ)35 mg/kg腹腔注射诱导建立糖尿病大鼠模型,错时注射葡萄糖和胰岛素,建立血糖波动组模型,2周后,将波动性高糖模型组随机分为3组,分别为波动性高血糖组(FHG组,n=8),人参皂苷低剂量组(LG组,n=8),人参皂苷高剂量组(HG组,n=8).予人参皂苷低高剂量[14、56mg/(kg·d)]干预相对应的模型组8周后,切取肾脏组织,用蛋白免疫切迹方法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测血红素加氧酶-1(HO-1)、Nrf2、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)蛋白及mRNA表达.[结果]与NC组相比,FHG组Nrf2的蛋白及mRNA的表达明显增加(P＜0.05),而HO-1 、γ-GCS的表达明显降低(P＜0.05);但人参皂苷治疗后,LG组及HG组HO-1、γ-GCS、和Nrf2蛋白及mRNA表达明显增高(P＜0.05).[结论]人参皂苷能够进一步促进波动性高糖状态下Nrf2下游HO-1、γ-GCS蛋白及mRNA表达,增加抗氧化蛋白的含量,提高机体的抗氧化应激能力,对波动性高糖所致的肾脏损伤有一定的保护作用.
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核因子相关因子2的调控与支气管哮喘
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是谷胱甘肽(GSH)合成的限速酶,其表达水平与活性对支气管哮喘(哮喘)有重要意义,核因子相关因子2(NF-E2 related factor 2,Nrf2)能调控γ-GCS的表达.细胞外信号通过细胞内Keap1、Bach1、PERK等多种因素调节Nrf2的活性,而导致γ-GCS的活性改变,终使得GSH含量改变,而参与哮喘发病过程.
关键词： 核因子相关因子-2 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 支气管哮喘 -
Nrf2调控γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达与慢性阻塞性肺疾病
Nrf2(NF-E2 related factor)在参与细胞抗氧化应激和外源性有毒物质诱导的主要防御机制中发挥重要的作用,是外源性有毒物质和氧化应激的感受器.细胞质Keap1蛋白是Nrf2的负调节因子.Nrf2能调控Ⅱ相解毒酶基因如γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)的表达.氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病的主要发病机制.谷胱甘肽(GSH)是肺内主要的抗氧化剂,而γ-GCS是GSH的限速酶,因此通过Nrf2途径调控细胞内γ-GCS的表达具有重要作用.
关键词： γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 谷胱甘肽 慢性阻塞性肺疾病 -
γ-GCS和慢性阻塞性肺疾病
氧化/抗氧化失衡是COPD主要发病机制之一,谷胱甘肽(GSH)是细胞内重要的抗氧化剂,对维持肺上皮细胞完整和抗氧化损伤起关键作用.γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS )是GSH合成的限速酶,调节细胞内GSH水平.γ-GCS活性及基因表达对COPD均有重要意义.
关键词： γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 慢性阻塞性肺疾病 -
香烟烟雾提取物对肺泡Ⅱ型上皮细胞热休克蛋白27及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的调控作用
目的 探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对肺泡Ⅱ型上皮细胞热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma glutamyl cysteine syntase,γ-GCS)表达的影响.方法 体外培养肺泡Ⅱ细胞(A549),加入5％浓度的CSE作用于细胞0、6、12、24、48h以及不同浓度的CSE(0％,2.5％,5％,10％)作用细胞24 h,运用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测γ-GCS mRNA含量的变化;不同浓度的CSE(0％,2.5％,5％,10％)作用细胞12、24 h以及5％的CSE作用细胞0、6、12、24、48 h,采用免疫蛋白印迹(western bloting,WB)检测γ-GCS、HSP27及其磷酸化HSP27(p-HSP27)在蛋白表达水平的变化.结果 ①5％CSE的作用下,随着干预时间的延长,γ-GCS mRNA含量呈明显增加趋势(P＜0.05);②不同浓度的CSE作用细胞24 h,随着浓度的增加,γ-GCS mRNA含量呈明显增加趋势(P＜0.05);③不同浓度的CSE(0％,2.5％,5％,10％)作用细胞12、24 h以及5％的CSE作用细胞0、6、12、24、48 h,HSP27及p-HSP27的蛋白水平有明显上调趋势(P＜0.05),γ-GCS蛋白含量也呈浓度和时间依赖上升.结论 CSE能够引起肺泡上皮细胞应激反应,通过上调HSP27磷酸化及表达γ-GCS对肺泡上皮细胞具有保护作用机制.CSE可通过上调HSP27的磷酸化及γ-GCS的表达启动肺泡上皮细胞的应激反应,以保护细胞.
