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031 Keap1-Nrf2/ARE 通路在分子毒理学中的研究进展
转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)和它的胞质接头蛋白Keap1是细胞抗氧化反应的中枢调节者,Nrf2通过与抗氧化反应元件(ARE)相互作用,诱导编码抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的表达,在细胞的防御保护中发挥重要作用.Keap1-Nrf2/ARE 通路在抗肿瘤、抗应激、调节GSH合成、抗凋亡、抗炎症反应、神经保护等方面发挥着广泛的细胞保护功能.本文综述了Keap1-Nrf2/ARE 通路的新研究,重点介绍其在分子毒理学中的研究进展.
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MK-801对甲基汞致大鼠脑皮质Nrf2及HO-1、γ-GCS、GPx-1表达的影响
目的 观察甲基汞对大鼠脑皮质Nrf2、HO-1 、γ-GCS 、GPx-1 mRNA和蛋白表达的影响,探讨MK-801对其是否具有拮抗作用.方法 Wistar大鼠随机分成4组,对照组:皮下及腹腔注射生理盐水；低、高剂量甲基汞染毒组:皮下注射生理盐水,2h后分别腹腔注射4和12μmol/kg的氯化甲基汞,MK-801预处理组:皮下注射0.3μmoL/kg的MK-801,2h后腹腔注射12 μmol/kg的氯化甲基汞；注射容量为5 ml/kg,干预隔日1次,染毒每日1次,连续干预与染毒4周.后一次染毒24 h后,处死大鼠取大脑皮质,测定大脑皮质汞含量及Nrf2、HO-1、γγ-GCS、GPx-1 mRNA及蛋白表达水平.结果 随着染汞剂量的增加,脑内汞含量明显升高；脑皮质内Nrf2 、HO-1、γ-GCS的mRNA及蛋白表达均明显升高,GPx-1的mRNA及蛋白表达明显降低.MK-801预处理组较高剂量甲基汞染毒组Nrf2、HO-1的mRNA及蛋白表达明显降低,GPx-1的mRNA及蛋白表达明显升高,对γ-GCS的mRNA及蛋白表达未见明显改变.结论 甲基汞可导致大鼠脑皮质Nrf2、HO-1、γ-GCS的mRNA及蛋白表达上调和GPx-1的mRNA及蛋白表达下调,MK-801对甲基汞致大鼠脑皮质Nrf2、HO-1、γ-GCS、GPx-1表达的变化有一定的拮抗作用.
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Nrf2在脓毒症急性肝损伤（ALI）中的作用机制研究
目的：探讨与分析Nrf2（核因子相关因子）在ALI（脓毒症急性肝损伤）中的作用机制，旨在为脓毒症的防治提供指导依据。方法将2010年9月-2013年9月于我院接受治疗的40例脓毒症急性肝损伤患者作为研究对象，以数字随机法将其分为对照组与观察组各20例，于术后不同时间点采集患者血清样本，分离血清，同时采集患者病理组织，测定其Nrf2表达水平。结果①观察组患者血清内ALT水平升高幅度较低，改善情况相对来说比较明显，观察组患者在治疗2 d后血清内ALT水平降低至（162.44±6.52）IU/L，明显低于对照组的（262.43±6.96）IU/L，P<0.05；②观察组患者不同时间段内病理组织中Nrf2表达水平相较对照组而言，2 d后为（0.31±0.02）uL，升高幅度较为显著，P＜0.05。结论 Nrf2在脓毒症急性肝损伤中有其关键的抗氧化应激作用，可将其作为脓毒症防治的重要判定指标。
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α-生育酚对亚硝胺诱导人食管上皮细胞癌变早期NFκB和Nrf2信号通路的调节作用
目的 研究α-生育酚(α-tocopherol,α-T)对亚硝胺诱导人食管上皮细胞癌变早期NFκB和Nrf2信号通路的调节作用.方法 采用N-甲基苄基亚硝胺(N-nitrosomethylbenzylamine,NMBzA)染毒人正常食管上皮细胞(HET-1A)模拟食管癌变启动,染毒浓度为50、100 μmol/L,染毒时间为24 h.α-T干预组细胞在染毒前3h加入25、50、100 μmol/L的α-T进行预处理,然后与100 μmol/L NMBzA共同孵育24 h;人食管鳞癌细胞(EC109)细胞采用相同浓度的α-T进行处理并与HET-1A进行对比;以体积分数为0.1％二甲基亚砜(DMSO)处理组细胞作为对照组.采用细胞免疫荧光试验分析NFκB p65和Nrf2在细胞内的分布和活化状态,采用RT-PCR或Western blot法检测细胞周期素D1 (cyclinD1)、核蛋白KI67(KI67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、环氧化酶2(COX2)、5脂氧合酶(5LOX)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶(NQO1)、谷胺酸半胱氨酸连接酶(GCLC)等相关靶基因表达水平,采用流式细胞术检测细胞内活性氧水平.结果 HET-1A细胞经100 μmol/L NMBzA染毒后,CyclinD1、KI67、PCNA基因表达水平分别为2.99±0.15、2.35±0.38、2.46±0.25,均高于对照组(1.00±0.08)(F值分别为97.23、65.28、34.62,P值均＜0.001);与对照组(0)相比,NFκB p65 (71.0％,98/138)和Nrf2(36.3％,49/135)在细胞核内的分布比例增加(x2值分别为194.71、133.72,P值均＜0.001).与对照组(1.00±0.05)相比,HET-1A靶基因COX2 (3.22±0.17)、5LOX (2.87±0.12)和HO-1 (1.87±0.22)、NQO1 (2.14±0.08)、GCLC(2.63±0.41)蛋白表达水平均升高(F值分别为72.35、43.87、69.23、71.34、85.79,P值分别为0.013、0.015、0.010、0.011、0.002).50 μmol/Lα-T干预处理后,与100 μmol/L NMBzA组(71.0％,98/138)相比,NFκB p65在核内分布(7.7％,8/104)减少(x2=148.10,P＜0.001),其靶基因COX2 (0.74±0.19)、5LOX (0.42±0.13)蛋白表达水平降低(F值分别为56.31、73.25,P值分别为0.003、0.001);而Nrf2信号通路相关指标未出现改变(P值均＞0.05);α-T对EC109细胞中NFκB和Nrf2信号通路均无影响(P值均＞0.05).结论 在NMBzA诱发食管癌早期,α-T能够通过阻断NFκB信号通路的激活从而抑制癌变启动,可能是α-T对食管癌潜在预防作用的主要机制;食管癌发病过程中,细胞可能因Nrf2信号通路的激活而获得了适应氧化应激的能力.
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PM2.5对人脐静脉内皮细胞的氧化损伤作用及对核因子NF-E2相关因子2信号通路的影响
目的 探讨PM25对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的细胞毒性特征、氧化损伤特点以及对核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)通路的影响.方法 分别以0.000(对照组)、0.004、0.039、0.391、1.950、3.910、7.810、15.600、31.250、62.500、125.000、250.000 μg/cm2的浓度的PM25混悬液作用于HUVEC细胞,染毒24 h后采用CCK-8法检测细胞存活率.以0.00(对照组)、1.95、3.91、7.81、15.63、31.25 μg/cm2的剂量分别处理HUVEC细胞1、3h,应用H2-DCFDA荧光探针法检测HUVEC细胞内活性氧(ROS)的生成;以相同染毒剂量分别处理HUVEC细胞24 h,应用比色法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活力性,以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量,并采用Western Blot检测细胞核因子NF-E2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶(NQO1)的蛋白表达水平.结果 随PM2.5染毒剂量的升高,HUVEC细胞存活率逐渐降低,与剂量为0.000组(存活率100％)相比,染毒剂量为250.000 μg/cm2时细胞存活率为(38.18±6.68)％(t=5.23,P＜0.001).PM25作用1、3h后,HUVEC细胞内ROS大量蓄积,0.00、1.95、3.91、7.81、15.63、31.25μg/cm2的PM25作用24 h后,SOD活性[各剂量组分别为(26.25±1.76)、(24.99± 1.81)、(24.25±0.49)、(22.07± 1.13)、(21.03±0.43)、(19.37±0.84)U/mg蛋白质,F=13.95,P＜0.001]、GPx活性[各剂量组分别为(25.63± 1.33)、(24.40±2.20)、(22.85±2.46)、(20.98± 1.95)、(20.17± 1.86)、(18.69± 3.11) mU/mg蛋白质,F=4.26,P=0.019]均呈剂量依赖性降低;但MDA含量[各剂量组分别为(1.11±0.07)、(1.12±0.07)、(1.17±0.05)、(1.49±0.01)、(1.95±0.08)、(2.37±0.08) nmol/mg蛋白质,F=186.37,P＜0.001]呈剂量依赖性升高.与Nrf2、NQO1的对照组(1.00±0.27、1.00±0.33)相比,15.63 μg/cm2染毒组Nrf2、NQO1蛋白表达水平(2.38±0.44、1.78±0.20)升高(P值均＜0.05).结论 PM2.5可引起HUVEC细胞氧化损伤,且损伤作用随染毒剂量增加而加重;PM2.5能够引起细胞内Nrf2、NQO1的蛋白表达增加,其机制可能与PM2.5引起细胞ROS产生增加有关.
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栝楼桂枝汤醇提物对氧化应激PC12细胞内NrF2和HO-1mRNA表达的影响
目的 观察栝楼桂枝汤乙醇提取物(EEGLGZD)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)缺氧损伤时细胞内核因子相关因子2(NrF2)和血红素氧合酶1(HO-1)mRNA表达的影响,探讨中药治疗脑卒中后痉挛的作用机制.方法 将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组、模型组、EEGLGZD低剂量组(0.5 mg·mL-1)和EEGLGZD高剂量组(1 mg·mL-1).采用H2O2诱导PC12细胞建立缺氧损伤模型,倒置显微镜观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度EEGLGZD干预后对细胞增殖的影响;RT-PCR测定药物作用后H2O2损伤PC12细胞NrF2和HO-1 mRNA的表达.结果 MTT检测显示,与模型组比较,EEGLGZD高剂量组和低剂量组的PC12细胞增殖率明显增加(P＜0.01);与EEGLGZD低剂量组比较,高剂量组细胞密度明显增加(P＜0.01).RT-PCR检测显示,与模型组比较,EEGLGZD高剂量和低剂量组的PC12细胞内NrF2和HO-1 mRNA的表达明显增加.结论 栝楼桂枝汤醇提物对H2O2诱导的PC12细胞损伤具有一定的保护作用,其机制可能与上调NrF2和HO-1 mRNA的表达有关.
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甘草查尔酮A对H2O2所致心肌细胞损伤的保护作用研究
目的 探讨甘草查尔酮A(LCA)对双氧水(H2 O2)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制.方法将原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为空白组、模型组(H2 O2)、LCA低剂量组(10μmol/L)、LCA中剂量组(20μmol/L)、LCA高剂量组(40μmol/L).经LCA给药4 h后,与100μM的H2 O2共孵育24 h后检测细胞存活率,乳酸脱氢酶(LDH),脂质过氧化物丙二醛(MDA),活性氧自由基(ROS),Na+-K+-ATP酶,Ca2+-ATP酶活性,同时检测过氧化物酶体增殖子活化受体γ(PPARγ),核因子E2相关因子2(Nrf2),和血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA的表达情况.结果LCA对H2O2所致心肌细胞损伤模型有保护作用,可抑制脂质过氧化MDA,ROS的生成,抑制Na+-K+-ATP酶活性,升高Ca2+-ATP酶活性,上调PPARγ,Nrf2和HO-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01).结论甘草查尔酮A对H2 O2所致心肌细胞损伤有显著保护作用,且其作用机制可能与激活PPARγ/Nrf2/HO-1通路,缓解线粒体氧化应激有关.
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红景天苷通过激活PI3K/AKT/NRF2通路减轻MCAO大鼠的神经细胞凋亡
目的:研究红景天苷(Sal)通过激活PI3K/AKT/NRF2通路减轻大脑中动脉栓塞(MCAO)大鼠的神经细胞凋亡的作用及其机制.方法:健康成年雄性SD大鼠120只,采用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,术后立即腹腔注射红景天苷(50mg/kg),分别连续给药ld、2d和7d,采用Longa评分法对大鼠神经功能损伤评分,Western blot法检测大鼠缺血侧脑组织Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白及NRF2核蛋白的表达.同时,采用侧脑室注射PI3K抑制剂(LY294002) 30min后造模,红景天苷给药ld,检测AKT、p-AKT、Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白NRF2核蛋白的表达.结果:与MCAO组比较,红景天苷分别给药1、2、7d后,MCAO+Sal组能够下调Bax,上调Bel-xl蛋白的表达(P＜0.05),促进NRF2的核转录水平,提高HO-1蛋白的表达(P＜0.01,p＜0.05);经侧脑室注射LY294002后再腹腔注射,红景天苷对AKT、p-AKT、Bcl-xl、Bax、HO-1蛋白及NRF2核蛋白的表达没有显著作用.结论:红景天苷能够改善MCAO大鼠的神经功能损伤,抑制神经细胞凋亡,主要是通过激活PI3K/AKT信号通路,促进AKT的磷酸化,激活NRF2的核转录,促进HO-1的蛋白表达,进而抑制神经细胞凋亡,改善神经功能.
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双氢青蒿素通过激活Nrf2促进肝星状细胞坏死性凋亡的研究
目的:体外研究双氢青蒿素(DHA)对人肝星状细胞(HSCs)坏死性凋亡的影响及机制.方法:HSCs分为对照组以及DHA处理组.应用噻唑蓝(MTT)、细胞计数试剂盒-8(CCK-8)以及亚甲基蓝染色检测HSCs的细胞活力.酶联免疫吸附实验检测HSCs培养基中HMGB1含量.Real-time PCR检测细胞内HMGB1 mRNA水平.细胞Titer-Glo试剂盒检测HSC内ATP含量.LDH试剂盒检测培养基中LDH含量.Real-time PCR和western blot分别检测受体相互作用蛋白1(RIP1)、RIP3和核因子E2相关因子2(Nrf2)的mRNA和蛋白水平.Western blot实验检测MLKL的磷酸化水平免疫荧光实验观察HSC内Nrf2蛋白表达及亚细胞分布.结果:DHA剂量依赖性地降低HSCs的活力.DHA剂量依赖性地促进HSCs释放HMGB1和LDH,升高HSCs内HMGB1的mRNA水平,降低细胞内ATP水平.DHA剂量依赖性地促进RIP1、RIP3的mRNA和蛋白表达,并促进MLKL的磷酸化.DHA以剂量依赖性的方式促进HSCs内Nrf2的mRNA和蛋白表达,并促进Nrf2从细胞质中向细胞核中转移.Nrf2 siRNA转染HSCs后可削弱DHA的上述作用,但Nrf2过表达质粒转染HSCs后可以模拟DHA的作用并与其产生协同效应.结论:结果表明DHA可诱导HSCs的坏死性凋亡这一作用可能与激活HSCs内Nrf2信号分子相关.本研究为DHA抗肝纤维化研究提供了新思路,同时为将DHA开发为坏死性凋亡相关的抗肝纤维化潜在药物提供了坚实的实验基础.
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山楂叶总黄酮对非酒精性脂肪性肝炎大鼠组织COX-2/Nrf2表达的影响
观察山楂叶总黄酮(THFL)对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)大鼠肝脏COX-2/Nrf2表达的影响,探讨其抗NASH的作用机制.32只SD大鼠随机分成正常组、模型组、THFL高剂量组及THFL低剂量组,每组8只,以高脂饮食12周建立NASH大鼠模型,同时以250,125 mg·kg-1·d-1的TFHL进行干预,常规HE染色观察大鼠肝组织脂肪变和炎症程度,比色法测定T-AOC水平,免疫组织化学法检测肝组织8-OHdG水平及COX-2,Nrf2,HO-1蛋白表达,Real time-PCR法检测肝组织中COX-2,Nrf2,HO-1 mRNA表达.模型组大鼠肝组织脂肪变和炎症程度气球样变及NAFLD活动度积分(NAS)较正常组明显增强,总抗氧化能力(T-AOC)下降,DNA损害标志物8-OHdG水平增加,COX-2,Nrf2,HO-1 mRNA和蛋白表达较正常组显著增强;应用高、低剂量的TFHL干预后,肝组织炎症程度和NAS较模型组显著降低,8-OHdG水平、COX-2 mRNA和蛋白表达较模型组减少,Nrf2和HO-1 mRNA和蛋白的表达则较模型组显著增高.COX-2/Nrf2通路参与高脂饮食诱导的NASH的发生发展,TFHL能通过进一步促进Nrf2/HO-1表达,从而负调节COX-2,抑制COX-2的过表达,减轻氧化反应导致的细胞损伤和肝组织炎症,防止NASH的进展.
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丹参素对非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及相关核转录因子的影响
目的:探讨丹参素(DSS)抗肿瘤作用的分子机制,重点在于是否与其抗氧化作用及改变非小细胞肺癌A549细胞内氧化还原状态及影响相关核转录因子和信号通路有关.方法:通过体外DPPH自由基清除、高铁还原、亚铁螯合实验和DCFH-DA荧光探针标记ROS,检测DSS的抗氧化活性及对A549细胞内ROS水平的影响;采用MTT法测定DSS对A549细胞增殖能力的时效与量效关系;采用Western blot技术检测DSS对A549细胞内缺氧诱导因子HIF-1α及氧化还原调节转录因子Nrf2蛋白表达的影响,以及上游Akt,ERK1/2 MAPK信号磷酸化水平的影响.结果:DSS能够剂量依赖性降低A549细胞内ROS水平,与其较强的自由基清除和抗氧化活性有关;DSS能以时间和剂量依赖性的方式抑制A549细胞生长,进一步机制研究发现,DSS能降低Nrf2表达,与抑制Akt以及ERK1/2的磷酸化水平有关,但对HIF-1α的表达没有影响.结论:DSS具有治疗非小细胞肺癌的作用,机制在于通过清除ROS进而抑制Akt,ERK1/2的磷酸化而下调Nrf2的表达并终抑制A549细胞的生长.
关键词： 丹参素 非小细胞肺癌A549细胞株 ROS Nrf2 HIF-1α -
Nrf2通过调控EZH2的表达促进DMSO诱导的MEL细胞红系分化
目的 探讨Nrf2/EZH2通路参与DMSO诱导MEL细胞红系分化的作用及相关分子机制.方法 以MEL细胞为靶细胞,DMSO为刺激源,联苯胺染色法检测细胞红系分化情况;免疫印迹检测EZH2和Nrf2蛋白表达水平.结果 DMSO可显著诱导MEL细胞红系分化,同时EZH2和Nrf2表达水平也明显升高.通过使用Nrf2诱导剂TBHQ及Nrf2 shRNA,证明Nrf2调控MEL细胞中EZH2的表达.敲低Nrf2和EZH2的表达能够抑制DMSO诱导的MEL细胞红系分化.结论 Nrf2可通过调控EZH2的蛋白水平从而发挥促进MEL细胞红系分化的作用.
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双岐杆菌减轻盐酸环丙沙星所致的小鼠血清睾酮下降
目的 探讨双岐杆菌减轻盐酸环丙沙星所致小鼠血清睾酮下降.方法 成年雄性昆明小鼠24只,随机分为灌胃0.9% Nacl溶液6 d(Sal6)组、灌胃抗生素6 d(A6)组、灌胃抗生素6 d后灌胃0.9% Nacl溶液6 d(A6+Sal6)组和灌胃抗生素6 d后灌胃双岐杆菌6 d(A6+P6)组,每组6只.放免法检测血清睾酮含量;Western blot检测核转录相关因子2(Nrf2)、血红素氧化酶(HO-1)和4羟基壬烯醛 (4-HNE)蛋白的表达;real-time PCR检测类固醇激素合成急性调控蛋白(StAR)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)和Nrf2 mRNA的表达;免疫组织化学检测4-HNE蛋白的表达.结果 A6组血清睾酮水平明显低于Sal6组(P<0.001),A6+P6明显高于A6(P<0.001)和A6+Sal6组(P<0.01);睾酮合成酶也表现为同样的变化趋势,A6组StAR mRNA明显低于Sal6组(P<0.001),A6+P6组明显高于A6组(P<0.01)和A6+Sal6组(P<0.01);P450scc mRNA明显低于Sal6组(P<0.001),A6+P6组明显高于A6组(P<0.001)和A6+Sal6组(P<0.05);A6组Nrf2表达明显低于Sal6组(P<0.01),A6+P6组明显高于A6组(P<0.01)和A6+Sal6组(P<0.05);A6组4-HNE的表达明显高于Sal6组(P<0.001),A6+P6组明显低于A6组(P<0.01)和A6+Sal6 组(P<0.05).结论 双岐杆菌可能是通过调节Nrf2通路,上调抗氧化酶蛋白水平并下调氧化损伤产物,进而减轻盐酸环丙沙星所致小鼠血清睾酮水平下调作用的.
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利用RNAi技术抑制结肠癌NRF2基因表达
目的 构建RNA干扰真核表达载体pSUPER-NRF2,并在结肠癌细胞中进行表达,验证NRF2基因表达是否受到抑制.方法 设计特异性针对NRF2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,分别构建重组载体并转染人结肠癌Caco-2细胞.同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光来监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48 h后G418筛选稳定表达的细胞.利用RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞NRF2 基因的表达.结果 成功构建RNAi真核表达载体.转染pEGFP-N1后48 h达转染效率高峰.瞬时及稳定转染pSUPER-NRF2-A2、B2重组质粒NRF2 mRNA的表达无差异;转染48 h后,pSUPER-NRF2-A1、B1可显著抑制NRF2 mRNA的表达;pSUPER-NRF2-B1稳定转染后,NRF2 mRNA的表达也显著降低.瞬时和稳定筛选后NRF2蛋白表达亦显著降低.结论 成功构建了NRF2的RNAi表达载体,可有效抑制靶基因表达,共转染带有筛选标记的pEGFP-N1质粒,筛选可获得低表达NRF2的稳定克隆,为进一步研究NRF2在结肠癌发生、发展中的作用提供了重要的实验材料.
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Wnt3a减轻黑素细胞iMC65氧化应激损伤
目的 探讨Wnt3a对氧化应激损伤的iMC65黑素细胞的保护作用及机制.方法 将黑素细胞分成对照组, Wnt3a组,H2O2处理组,Wnt3a干预组,750μmol/L的H2O2作用模拟黑素细胞的氧化应激损伤.MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞产生活性氧(ROS),荧光素酶报告基因检测Nrf2/ARE通路的激活, Western blot检测Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达.结果 与对照组相比,H2O2处理组的细胞活性明显下降(P<0.01),凋亡比率明显上升(P<0.01),ROS的产生明显增加(P<0.01).而Wnt3a干预组能显著缓解H2O2处理组细胞活性的降低(P<0.05)、降低凋亡比率(P<0.05),减少ROS的产生(P<0.05).Wnt3a也能上调Nrf2和HO-1蛋白水平的表达.结论 Wnt3a可以保护氧化应激状态下的黑素细胞,其机制可能与激活Nrf2/ARE有关.
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丙二醛通过抑制Nrf2／ARE促进肾小球系膜细胞凋亡
目的：探索丙二醛（ MDA）对糖尿病肾病的影响机制。方法用终浓度为0、1、5、10和50μmol／L的MDA处理肾小球系膜细胞（ GMC），MTT法检测细胞活性，AnnexinV-FITC法检测细胞凋亡， RT-PCR和Western blot法检测Nrf2，HO-1和γGCL表达。结果 MDA剂量依赖的抑制肾小球系膜细胞的活性。 MDA浓度为5μmol／L可诱导细胞内大量活性氧（ ROS）产生（ P＜0.05），抗氧化剂tBHQ可缓解MDA诱导的细胞活性的下降。 MDA抑制了抗氧化反应原件（ ARE） HO-1和γGCL的表达，以及Nrf2的表达水平（ P＜0.05）。结论 MDA可通过抑制Nrf2／ARE来调控ROS生成，抑制肾小球系膜细胞的活性。
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Nrf2/ARE/HO-1通路是治疗帕金森病的作用新靶点
调节Nrf2/ARE/HO-1通路在氧化应激相关性疾病中具有神经保护作用.通过药理学途径调节Nrf2/ARE/HO-1通路,可以抑制帕金森病神经毒剂诱导的神经毒性损伤.因此,筛选调节此通路的化合物有可能成为治疗帕金森病潜在的新靶点.
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Nrf2在急性亚砷酸钠暴露的小鼠胰岛β细胞中的表达
目的 检测急性亚砷酸钠作用小鼠胰岛β细胞的Nrf2及其调控的Ⅱ相解毒酶的表达情况.方法 4μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)作用于MIN6细胞2、6、12、18、24h；利用Western blotting检测亚砷酸钠暴露不同时间点细胞核、细胞质和细胞总的Nrf2蛋白表达；应用Real-time PCR检测不同时间点Nrf2及其调控的Ⅱ相解毒酶NAD(P)H:醌氧化还原酶1(Nqo1)和血红素氧化酶1(Hmox-1)mRNA表达.结果 亚砷酸钠暴露2h,Nrf2蛋白表达增多并达到高峰,之后随时间的延长Nrf2蛋白表达逐渐降低.Nrf2核蛋白表达的时间效应性与细胞总的Nrf2表达完全一致.但不同时间点的亚砷酸钠暴露对Nrf2的mRNA表达未出现显著影响.Nqo1和Hmox-1表达亦存在时间效应性,即亚砷酸钠暴露后2h,Nqo1和Hmox-1 mRNA表达开始增高,6h达到高峰,随后逐渐下降.结论 急性亚砷酸钠暴露后,能够诱导小鼠胰岛β细胞内Nrf2的蛋白表达,并促进其转位进入细胞核,调节其下游Ⅱ相解毒酶Nqo1和Hmox-1的转录活性.
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Nrf1结构及功能研究进展
NF-E2相关因子1(Nrf1)属于CNC碱性亮氨酸拉链(basic-leucine-zipper,bZIP)调节蛋白家族.研究表明Nrf1与Nrf2有相似的下游靶基因,在抗氧化应激反应中发挥重要作用.新近发现,Nrf1在细胞组织分化发育、炎症及肝脏成瘤等方面发挥重要功能.本文将近几十年来发表的以细胞或基因敲除鼠为工具的Nrf1研究内容进行综述.
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Nrf2基因过表达对百草枯诱导的骨髓间充质干细胞损伤的影响
目的 观察核因子E2相关因子2转录因子(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)基因过表达对百草枯(paraquat,PQ)诱导的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)损伤的影响.方法 BMSCs随机(随机数字法)分为6组:正常BMSCs组、BMSCs-mCherry(红色荧光蛋白)组、BMSCs-Nrf2组、BMSCs+ PQ组、BMSCs-mCherry+ PQ组、BMSCs-Nrf2+PQ组.正常BMSCs组、BMSCs-mCherry组、BMSCs-Nrf2组:正常培养基培养;BMSCs+ PQ组、BMSCs-mCherry+ PQ组、BMSCs-Nrf2+ PQ组:终浓度1.0 mmol/L的PQ培养.24h之后收集细胞及上清液,蛋白免疫印迹法(western blot)检测胞核内Nrf2蛋白量,CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,化学比色法检测上清液脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量及过氧化氢酶(CAT)的活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清液白细胞介素-6(IL-6)、IL-10及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量.数据通过SPSS 20.0进行统计学分析,组间比较采用单因素方差分析.结果 BMSCs-mCherry+ PQ组与BMSCs+ PQ组比较,各测定数据差异无统计学意义(P＞0.05).与BMSCs组比较,BMSCs+ PQ组细胞核Nrf2蛋白表达量明显上升(P=0.008);与BMSCs+ PQ组比较,BMSCs-Nrf2+ PQ组Nrf2蛋白表达量升高(P =0.031).与BMSCs组比较,BMSCs+ PQ组细胞存活率明显下降,细胞凋亡率明显升高(P=0.000);与BMSCs+ PQ组比较,BMSCs-Nrf2+ PQ组细胞存活率明显升高[(53.27±2.40)％ vs.(75.20±2.92)％,P=0.000],凋亡数量显著降低[(26.43±2.21)％ vs.(16.30±1.73)％,P=0.000].与BMSCs组比较,BMSCs+ PQ组MDA、IL-6、TNF-α水平明显上升,CAT、IL-10水平明显降低(P =0.000);与BMSCs+ PQ组比较,BMSCs-Nrf2+ PQ组MDA含量明显降低[(43.88±0.89) nmol/L vs.(37.29±1.88) nmol/L,P=0.000],上清液CAT活力明显升高[(22.82±0.63) U/mL vs.(38.45±1.24) U/mL,P=0.000],IL-6蛋白含量显著降低[(75.57±11.63) pg/mL vs.(52.00 ±5.87) pg/mL,P=0.001],IL-10的蛋白含量明显升高[(6.96±0.93) pg/mLvs.(15.59±1.73) pg/mL,P=0.000],TNF-α的蛋白含量显著降低[(164.51±9.29) pg/mLvs.(124.62±2.95) pg/mL,P=0.000].结论 Nrf2基因可明显提高BMSCs细胞核Nrf2蛋白的基础表达量,上调Nrf2-ARE通路的表达活性,抵抗PQ对BMSCs的损伤作用.
