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DC-CIK免疫治疗联合化疗对晚期胃癌的效果及对Nrf2、ARE蛋白表达水平的影响
目的 探讨树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞(DC-CIK)免疫治疗联合化疗对晚期胃癌核因子相关因子-2(Nrf2)、抗氧化反应元件(ARE)蛋白表达水平的影响,评价其治疗效果.方法 回顾性选取晚期胃癌患者接受DC-CIK免疫治疗联合常规化疗120例作为联合组,常规化疗晚期胃癌患者60例作为对照组,选取时间2014年3月至2016年3月.统计两组治疗后的疗效和不良反应发生情况,检测治疗前后细胞免疫和体液免疫的变化,并检测血清中Nrf2、ARE蛋白的表达水平.结果 联合组骨髓抑制发生率明显低于对照组(P<0.05);联合组患者治疗后免疫细胞比率显著高于对照组患者(P<0.05);联合组治疗后IgG、IgM、IgA均明显高于治疗前及对照组(P<0.05);联合组Nrf2、ARE含量高于对照组(P<0.05).联合组患者客观有效率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 DC-CIK免疫治疗联合化疗能改善晚期胃癌患者的免疫功能,提高患者Nrf2、ARE蛋白表达水平,不良反应较少.
关键词： 胃癌 DC-CIK免疫治疗 化疗 核因子相关因子-2 抗氧化反应元件 -
叶黄素介导Nrf-2/ARE信号途径抑制人结肠癌HT29细胞增殖的作用机制
目的:研究叶黄素对于核因子相关因子2(nuclear factor erythroid-2 related factor 2,Nrf-2)和血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响,从而研究叶黄素对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法:用不同浓度的叶黄素(20、40、80、120、160 mg/L)和空白对照组(0 mg/L)处理HT29细胞24、48、72 h,用CCK8法检测叶黄素对该细胞增殖的抑制作用.流式细胞仪检测细胞周期.RT-PCR检测Nrf-2和HO-1RNA表达水平的变化.Western blot检测Nrf-2和HO-1的蛋白表达水平的变化.结果:叶黄素能够抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,160 mg/L叶黄素作用72 h后,抑制率可高达78.09％,且具有剂量依赖性和时间依赖性.流式细胞仪检测细胞周期结果显示:叶黄素作用于HT29细胞48 h后,G0/G1期细胞显著增加.表明叶黄素可阻滞HT29细胞生长于G0/G1期.RT-PCR检测和Westernblot检测的结果共同显示,经过不同浓度的叶黄素处理后,Nrf-2和HO-1 RNA的表达水平以及蛋白的表达水平与未经叶黄素处理的对照组相比明显上调,且具有剂量依赖性(P ＜0.O1).结论:叶黄素可显著抑制HT29细胞的增殖,使其细胞周期阻滞在G0/G1期.同时诱导Nrf-2和HO-1 RNA和蛋白的表达,这可能是其抑制HT29细胞增殖、发挥保护作用的重要机制.
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Nrf2在肝纤维化小鼠肝细胞中的核转移
目的:研究肝纤维化小鼠肝细胞中核因子相关因子-2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)核转移情况.方法:实验小鼠随机分为正常对照组(normal control,NC组)、模型组,每组8只.模型组腹腔注射四氯化碳(CCl4)石蜡油溶液建造肝纤维化模型,NC组给予同体积矿物油腹腔注射,共10 wk.收集肝脏标本HE染色及Masson染色观察肝脏炎症和纤维化程度;Western blot 检测细胞内Nrf2、醌氧化还原酶l(quinone oxidoreductase,Nqo1)总蛋白及Nrf2核蛋白表达情况.结果:随CC14肝损伤时间延长,组织病理学结果显示模型组明显炎症反应及纤维间隔形成;Western blot结果显示,与NC组Nrf2、Nqol总蛋白及Nrf2核蛋白表达量分别为0.490±0.088、0.430±0.057、0.370±0.022比较,模型组为0.790±0.045、0.720±0.040、0.670±0.044显著增高,差异具有统计学意义(F=2.027、0.772、1.552,P＜0.05).结论:肝纤维化小鼠肝细胞中Nrf2核转移增多并上调细胞保护性蛋白Nqo1表达.
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核因子相关因子-2与动脉粥样硬化的研究进展
动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)疾病在心血管疾病中属常见病.与大部分心血管病一样,As的发生发展与心血管系统自我保护功能丧失有关,而心血管系统的自身保护功能主要体现在其抗氧化应激的能力上.其中Keapl/Nrf 2是细胞内抵抗氧化应激和保持氧化还原平衡的重要信号通道[1],他存在一定争议.
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异烟肼作用小鼠肝细胞 Nrf2与 SOD 及 GST 表达的相关性分析
目的：研究异烟肼致肝损伤进程中核因子相关因子－2（Nrf －2）的表达与SOD及GST 表达的相关性。方法将64只昆明小鼠随机分为8组，实验组分别用INH 90mg／（kg · d）每天灌胃，分为1d、3d、5d、7d、2周、3周、4周七组；对照组给予量蒸馏水灌胃1d。取肝脏组织分析其病理学评分；全自动生化分析仪检测血清谷丙转氨酶（ALT ）、谷草转氨酶（AST ）等肝功能指标含量；qRT －PCR检测肝组织中Nrf2、GST、SOD的mRNA表达。结果随着异烟肼给药时间的延长，小鼠肝细胞损伤程度呈上升趋势，mR‐NA表达也呈上调之势；Nrf2从用药5d时开始，GSTA1 mRNA从第二周开始，而Cu－ZnSOD mRNA和MnSOD mRNA均是在3周时表达上调，上述指标的mRNA 表达呈正相关（均 P＜0．01）。结论 INH诱导肝损伤激活Nrf2－ARE通路，Nrf2表达与Cu－ZnSOD、MnSOD和GSTA1表达呈正相关。
关键词： 异烟肼 肝损伤 核因子相关因子-2 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽-S-转移酶 -
核因子相关因子2的调控与支气管哮喘
γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)是谷胱甘肽(GSH)合成的限速酶,其表达水平与活性对支气管哮喘(哮喘)有重要意义,核因子相关因子2(NF-E2 related factor 2,Nrf2)能调控γ-GCS的表达.细胞外信号通过细胞内Keap1、Bach1、PERK等多种因素调节Nrf2的活性,而导致γ-GCS的活性改变,终使得GSH含量改变,而参与哮喘发病过程.
关键词： 核因子相关因子-2 γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶 支气管哮喘 -
转录因子ATF3/ATF4调控抗氧化系统与慢性阻塞性肺疾病
氧化/抗氧化失衡是慢性阻塞性肺疾病主要发病机制之一.转录因子转录激活因子3/转录激活因子4在氧化应激条件下能与核因子相关因子-2相互作用,调节抗氧化酶的表达,进一步探讨其在氧化应激中的表达、作用及机制将为慢性阻塞性肺疾病的防治提供新的理论依据.
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Nrf2和IGF-1在胃黏膜癌变过程中的表达
目的 研究核因子相关因子-2(Nrf2)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在胃正常黏膜、增生性息肉、上皮内肿瘤(GIN)及腺癌中的表达情况,并初步探讨二者在胃癌癌变过程中的作用机制.方法 应用免疫组化方法检测Nrf2和IGF-1在胃正常黏膜、增生性息肉、各级GIN及不同分化程度腺癌中的表达情况.结果 Nrf2和IGF-1在正常胃黏膜中几乎无表达；从增生性息肉、GIN到腺癌,二者共表达逐渐增强；在增生性息肉、GIN、腺癌中的表达差异有统计学意义(均P＜0.05),并且呈正相关(r=0.337,P =0.037).结论 Nrf2和IGF-1表达增强可能与胃黏膜癌变过程有关,二者表达水平升高有可能促进肿瘤进展.
关键词： 核因子相关因子-2 胰岛素样生长因子-1 胃癌 致癌作用 氧化应激 -
核因子相关因子-2激动剂莱菔硫烷在小鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护作用
目的:探讨核因子相关因子2(Nrf2)激动剂莱菔硫烷(SFP)对小鼠脑缺血再灌注损伤(IRI)的影响.方法:将小鼠随机分为Sham组、模型组和SFP组.模型组和SFP组小鼠在短暂性大脑中动脉闭塞(MCAO)后1h腹腔立即注射PBS或SFP(5 mg/kg)溶液.MCAO后1h,在短暂全身麻醉下取出大脑中动脉的线栓,开始再灌.采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色比较各组小鼠IRI后脑梗死体积;采用神经行为学评分法评估各组小鼠IRI后的神经症状;采用免疫印迹检测模型组和SFP组小鼠IRI后大脑皮质Nrf2、血红素加氧酶-1(HOH)和核转录因子-κB (NF-cB)蛋白的变化情况.结果:SFP治疗可使小鼠再灌24 h后梗死体积和神经功能缺损明显改善.再灌注后2h后,SFP激活Nrf2;再灌注6h后,HO-1激活.再灌注2h后,SFP也降低NF-κB磷酸化水平.SFP提高小鼠MCAO后7d的生存率.结论:通过SFP激活Nrf2可减轻IRI后氧化应激和炎症反应,具有神经保护作用.
关键词： 短暂性大脑中动脉闭塞 再灌 核因子相关因子-2 莱菔硫烷 小鼠 -
肺炎支原体LAMPs经PI3K/Nrf2诱导人单核细胞表达HO-1
目的 探讨肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane protein,LAMPs)对人单核细胞表达血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的影响,并探讨可能的调控机制.方法 体外培养THP-1细胞,用不同浓度的LAMPs作用后,分别采用realtime-PCR和Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白的表达.同时采用不同浓度的放线菌素D(ActD)和放线菌酮(CHX)预处理细胞,观察其对HO-1表达的影响,以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平;提取LAMPs作用前后的核蛋白,凝胶迁移率实验检测Nrf2的核转位、Western blot检测Akt的磷酸化情况;同时采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察其对LAMPs诱导Nrf2核转位及HO-1表达的影响;后采用siRNA干扰Nrf2表达,以证实Nrf2是否参与调控HO-1表达.结果 (1)0～5 μg/mL LAMPs能以剂量依赖性方式诱导THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白;(2)5 μg/mL LAMPs能诱导THP-1细胞Akt磷酸化,并能增强其DNA结合活性;PI3K抑制剂LY294002处理后,可明显抑制LAMPs诱导的HO-1表达和Nrf2核转位;(3)干扰Nrf2表达后,可明显下调LAMPs诱导THP-1细胞表达HO-1.结论 LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1,其机制可能与PI3K/Nrf2通路有关.
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Nrf2在小鼠非酒精性脂肪性肝病发病机制中的作用
目的 研究高脂饮食诱导的实验小鼠在非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)形成不同阶段,核因子相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)表达的变化情况.方法 通过高脂饮食建立小鼠非酒精性脂肪性肝病的模型(实验组),同期设正常饮食组作为对照组.并在8、12周末分批处死,检测丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、甘油三酯(triglyceride,TG)、胆固醇(cho-lesterol,CHOI)、血糖(glucose,GLU),计算肝指数;观察肝脏组织病理学改变,并用免疫组化方法检测Nrt2的表达.结果 实验组小鼠第8周末病理变化呈单纯脂肪肝改变,第12周末进展为脂肪性肝炎.8、12周末实验组小鼠血清ALT、CHOI和肝脏组织Nrf2表达均明显高于同期对照组(P<0.01);与8周末实验组小鼠比较,12周末实验组小鼠的肝脏组织Nrf2表达明显增高(P<0.01).Nrf2表达与ALT、GLU、CHOI、肝指数成明显正相关(P<0.01).结论 随着非酒精性脂肪性肝病的发生和发展,Nrf2表达上调,提示其对该病中氧化应激所致炎症损伤的保护作用.
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核因子相关因子-2信号通路在血红素氧合酶-1抗乙醇诱导成骨细胞损伤中的作用
目的 观察血红素氧合酶-1(HO-1)抑制乙醇对成骨细胞损伤的作用,探讨核因子相关因子-2(Nrf-2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路在其保护作用中的意义.方法 提取并培养人成骨细胞,Lipofectamine 2000质粒转染HO-1,乙醇作用24h,Western bolt检测细胞中Nrf-2和HO-1蛋白的表达量,同时应用酶标仪检测成骨细胞中髓过氧化物酶(MPO)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性.结果 阳性对照组中MPO和GSH-Px酶的活性分别为(54.17±20.61)mU/mg 蛋白和(7.94±2.42)U/mg蛋白,明显低于阴性对照组和HO-1组细胞中MPO和GSH-Px酶的活性(P=0.023、0.012);HO-1组细胞中MPO和GSH-Px酶的活性分别为(286.54±13.82)mU/mg蛋白和(38.59±5.30)U/mg蛋白,均明显高于阳性对照组和阴性对照组细胞中MPO和GSH-Px酶的活性(P=0.000、0.000).Western blot 结果显示,阳性对照组细胞中Nrf-2和HO-1蛋白表达量(分别为0.27±0.08和0.81±0.05)明显低于阴性对照组(分别为0.62±0.11和1.26±0.20,P=0.016、0.003);HO-1组细胞中Nrf-2和HO-1蛋白表达量明显升高(分别为0.94±0.10和2.43±0.13,P=0.000、0.000).结论 转染HO-1抑制乙醇诱导成骨细胞损伤的保护机制与其对细胞中Nrf-2/ARE信号通路的保护有关,其能通过Nrf-2/ARE信号通路激活并增强成骨细胞的抗氧化能力,从而减轻乙醇对成骨细胞的损伤.
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Nrf2与非酒精性脂肪性肝病小鼠肝细胞凋亡的关系
目的 探讨肝细胞凋亡及核因子相关因子2(Nrf2)在高脂饮食诱导小鼠形成非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的作用.方法 完全随机法将24只小鼠分为3组,每组各8只:正常对照组(对照组)、8周高脂实验组(实验组1)和12周高脂实验组(实验组2).对照组喂饲普通饲料,实验组高脂饮食喂养8周(实验组1)或12周(实验组2).于8周末处死对照组和实验组I的小鼠,12周末处死实验组2的小鼠.HE染色法观察肝脏脂肪变性及炎症浸润程度,TUNEL法检测肝细胞凋亡,免疫组织化学法检测肝组织中Nri2的表达.结果 高脂饮食喂养8周可诱导小鼠形成NAFLD;实验组小鼠随着高脂饮食喂养时间的延长,肝细胞脂肪变性及炎症程度加重(P<0.05);实验组1小鼠的Nrf2表达和肝细胞凋亡程度均明显高于对照组(P<0.05),而实验组2较实验组1该两项指标进一步增高(P<0.05);且Nrf2的表达与肝细胞凋亡呈正相关(P<0.01).结论 在高脂饮食诱导小鼠形成NAFLD过程中,肝细胞凋亡增加,Nrf2表达增强,且随病情进展而逐渐加重,二者呈正相关关系.
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Nrf2/Bach1竞争调控抗氧化酶与支气管哮喘
氧化/抗氧化失衡是支气管哮喘的重要发病机制之一.抗氧化酶的基因表达均通过抗氧化反应元件(ARE)介导,核因子相关因子-2(Nrf2)能上调ARE介导抗氧化酶的基因表达,而转录因子BTBCNC异体同源体(Bach1)下调ARE介导抗氧化酶的基因表达,Nrt2/Baeh1在核内竞争调控抗氧化酶的基因表达.
关键词： 核因子相关因子-2 BTB-CNC异体同源体1 支气管哮喘 -
Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究
目的 分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用.方法 选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的mRNA表达情况.结果 与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P＜0.05);分别为(19.9332± 1.98180) U/L、(64.3699± 14.53874) U/L、(46.7455±6.27572) U/L、(99.0038 ±25.34329) U/L、(46.7590±8.85478) U/L和(50.3374±14.19886)U/L.感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的mRNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P＜0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P＜0.05).结论 Nrf2和Trx1mRNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用.
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用苹果辅助逆转大鼠肝纤维化的实验性研究
目的:研究苹果对实验性肝纤维化大鼠的辅助逆转作用,并探讨其对肝纤维化的影响机制.方法:雄性SD大鼠42只分为正常组、CCl4肝纤维化模型组、自然恢复组、丹芍化纤治疗组、丹芍化纤+苹果试验组.除正常组以外,其余大鼠均采用CCl4、饮酒、高脂低蛋白饮食等复合因素刺激制备大鼠肝纤维化模型共8周.确认造模成功后再将剩余模型组大鼠随机分为丹芍化纤+苹果试验组、丹芍化纤治疗组及自然恢复组,共观察8周.结果:丹芍化纤+苹果试验组与模型组、自然恢复组及丹芍化纤治疗组比较:肝脏指数、血清ALT及AST显著下降(P<0.05,P<0.01,P<0.01);RT-PCR中核因子相关因子2(NF-E2-relatedfactor 2,Nrf-2)mRNA及血红素加氧酶-1(Heme oxygenase-1,HO-1)mRNA在丹芍化纤+苹果试验组中的表达较丹芍化纤治疗组与模型组、自然恢复组升高(P<0.05),丹芍化纤+苹果试验组中肝组织TGF-β 1的表达较丹芍化纤治疗组与模型组、自然恢复组降低(P<0.05)、而MMP-2在丹芍化纤+苹果试验组中的表达较丹芍化纤治疗组与模型组、自然恢复组升高(P<0.05);GSH有所升高,MDA有所降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:苹果在实验性肝纤维化大鼠的逆转过程中起到了有效的辅助作用,辅助逆转的机制可能与其上调Nrf-2表达,从而增强HO-1表达,增强其抗氧化功能,抑制脂质过氧化作用在丹芍化纤胶囊的治疗基础上进一步抑制了TGF-β1的表达;从而促进细胞外基质的降解,这可能是苹果辅助逆转肝纤维化的机制之一.
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Nrf2与心脏衰老的相关研究进展
心血管疾病是导致全球人口致残率及致死率增加的首要病因之一.尽管目前及时的药物及手术治疗挽救了大批患者生命,但是心血管疾病的总体死亡人数仍处于持续上升趋势,其中一个重要原因就在于人口老龄化的增加.衰老不仅影响心脏收缩及舒张功能,而且增加心脏对损伤的易感性.因此,如何延缓心脏衰老成为当前研究的热点.核因子相关因子--2(Nrf2)属于碱性亮氨酸拉链家族成员,被认为是调控氧化应激为关键的转录因子.大量的研究表明,其与衰老关系密切.笔者就近年来Nrf2与心脏衰老的相关研究做一综述.
