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硫氧还蛋白-1对代谢型谷氨酸受体1a毒性的抑制作用
目的 研究在HEK293细胞中过表达代谢型谷氨酸受体1a(Metabotropic gluatarnate receptor 1,mGluRla),引起激动剂非依赖型细胞死亡的分子机制和硫氧还蛋白-1(Trxl)在此过程中的作用.方法 采用噻唑蓝法、DCF法、免疫印迹法以及氧化还原蛋白印迹法分别检测了Trxl对细胞活力,细胞内活性氧(ROS)含量,AKT等信号通路的影响.以及Trxl本身氧化还原状态的改变.结果 HEK293细胞中过表达mGluRla,发现ROS生成量增多,磷酸化AKT减少,PARP剪切量增多,Bcl-2表达量减少以及细胞活力降低.共转染Trxl后,可逆转上述现象.同时发现Trx1、mGluRla之间不存在相互作用.结论 在HEK293细胞中,Trxl通过清除过表达mGluRla产生的ROS,调节相关的信号通路,从而调控过表达mGluRla导致的细胞毒性造成的细胞死亡.本文揭示了Trxl,mGluRla与ROS之间的一种新调节关系,以及这种关系在调控细胞生长和死亡过程中的重要意义.
关键词： 硫氧还蛋白-1 代谢型谷氨酸受体1a 活性氧 氧化应激 凋亡 -
褪黑素对大鼠急性坏死性胰腺炎的干预作用及机制
目的: 观察褪黑素前干预对急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠的胰腺和肺组织的保护作用与硫氧还蛋白-1(Trx-1)表达的关系.方法: 72只♂SD大鼠随机分成ANP模型组(A组)、褪黑素前干预组(M组)、对照组(C组). A组的大鼠腹腔注射6%左旋精氨酸(25 mL/kg体质量), 每次间隔1 h, 共3次, 诱发ANP, 且在诱发ANP前、后0.5 h腹腔注射生理盐水(20mL/kg体质量)各1次;M组的大鼠诱发ANP的方法同A组, 但在诱发ANP前0.5 h腹腔注射0.25%褪黑素(20 mL/kg体质量)1次, 替代生理盐水;C组的大鼠腹腔注射相当于A组各次注射用量的等容积生理盐水. 每组术后6 h、12 h及24 h时点分批处置大鼠. 抽血测定Trx-1、白介素-6(IL-6)、谷胱甘肽(GSH)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)的含量;取胰腺和肺组织做病理学检查.结果: 大鼠胰腺组织的病理变化和病理学评分证实左旋精氨酸导致A组的ANP. 与A组比较, M组胰腺和肺组织的病理损伤显著减轻. 与C组比较, A组的大鼠血清的Tr x-1的量在6 h、12 h时点显著降低, 24 h时点显著升高, 呈现出先降低后升高的趋势;与A组比较,M组的大鼠血清的Trx-1的量在6 h、12 h时点显著增高, 他们表达的峰值前移. 与C组比较,A组的大鼠血清的IL-6、MDA水平显著增高,血清的T-SOD活力、GSH的含量显著降低;与A组比较, M组的大鼠血清的IL-6、MDA水平显著降低, 血清的T-SOD活力、GSH的含量显著增高.结论: ANP可诱导Trx-1的表达;而褪黑素前干预可进一步促进Trx-1的表达, 提高T-SOD活力和GSH水平, 降低IL-6、MDA水平, 故能显著减轻大鼠胰腺和肺组织的病理损伤, 发挥其对胰腺和肺组织的保护作用.
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硫氧还蛋白-1在急性坏死性胰腺炎大鼠肺组织中的表达及褪黑素干预的影响
目的:探讨内源性硫氧还蛋白-1(Trx-1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠模型肺组织中的表达:观察褪黑素对ANP胰和肺脏的保护作用和对肺组织Trx-1表达的影响.方法:将72只SD大鼠随机分成对照组(C组,n=24)、急性胰腺炎组(A组,n=24)、褪黑素前干预组(M组,n=24).A组用6%的左旋精氨酸(L-Arginine,L-Arg)腹腔内注射,每次25 mL/kg体质量,共3次,注射间隔1 h,诱导ANP模型,在首次注射L-Arg前30 min腹腔注射生理盐水20mL/kg体质量1次;C组同法注射相当于A组各次注射用量的等容积生理盐水:M组在诱导胰腺炎前30 min腹腔内注射0.25%褪黑素(20mL/kg体质量)干预.在注射完L-Arg后的6、12、24 h三个时点分批处死大鼠.应用免疫组织化学技术检测各组ANP肺组织Trx-1的表达.并观察各组对应各时点胰腺、肺组织病理学和肺免疫组织化学的改变;抽取动脉血测定Trx-1和淀粉酶.结果:A组大鼠胰腺和肺组织病理损伤在6、12、24 h时点比C组明显加重(均P＜0.01);M组胰腺和肺组织病理损伤在6、12、24 h时点较A组明显减轻(P＜0.01或0.05).A组、M组肺组织表达Trx.1量在6、12、24 h时点较C组显著升高(均P<0.01).在24 h,A组血清淀粉酶较C组显著升高(4 598 U/L±2 274 U/L vs2 033U/L±863 U/L,P＜0.01);M组较A组低(3 990U/L±1 146 U/L vs 4 598 U/L±2 274 U/L,P＜0.05).A组大鼠血清Trx-1含量在6、12 h时点显著降低,24 h时点显著升高,呈前低后高趋势;与A组比较,M组血清Trx-1在6、12 h时点显著升高,24 h时点显著降低,量的峰值前移.结论:Trx-1在ANP肺损伤组织中的过度表达与急性胰腺炎相关性肺损伤关系密切.褪黑素影响Trx-1表达,并可能在一定程度上减轻ANP的胰、肺组织损伤.
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硫氧还蛋白-1 在急性坏死性胰腺炎大鼠中的表达及褪黑素对其的影响
目的 观察硫氧还蛋白-1(TRX-1)在急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠胰腺组织的表达和褪黑素干预对其的影响.方法 72只雄性SD大鼠随机分成ANP组、褪黑素组和对照组,每组24只.以腹腔注射6%L-Arginine 25 mL/kg体重3次、每次间隔1 h的方法制备ANP模型.褪黑素组在制模前30min腹腔注射0.25%褪黑素20 ml/kg体重;ANP组和对照组大鼠腹腔注射等容积生理盐水.术后6、12、24 h分批处死大鼠.抽血测定血清淀粉酶含量;取胰腺组织行病理学检查,并评分;检测胰腺组织丙二醛(MDA)、髓过氧化酶(MPO)含量;免疫组化检测胰腺组织TRX-1蛋白表达;RT-PCR检测胰腺组织TRX-1 mRNA的表达.结果 ANP组12 h点血清淀粉酶、胰腺组织MDA和MPO以及TRX-1 mRNA和蛋白表达水平分别为(3 012±1 425)u/L、(4.13±1.85)nmol/mg prot、(7.45±1.26)nmol/mg prot、0.68±0.18、66.8±8.1;褪黑素组分别为(1 835±499)U/L、(3.03±2.12)nmol/mg prot、(5.32±1.06)nmml//mgprot、0.50±0.09、80.29±8.14,两组比较均有显著差异(P<0.05).褪黑素组胰腺TRX-1 mRNA和蛋白表达峰值从ANP组的制模后12 h提前到制模后6 h.结论 ANP大鼠胰腺组织TRX-1 mRNA和蛋白表达增高;褪黑素干预能促进胰腺组织早期表达TRX-1 mRNA和蛋白,减轻胰腺组织的损伤.
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慢性间歇低氧致去卵巢小鼠动脉损伤及其与硫氧还蛋白-1的关系
目的 研究雌激素在慢性间歇低氧致血管损伤中的保护作用及其与硫氧还蛋白-1( Trx-1)的关系.方法 36只成熟雌性C57/BL6J小鼠随机分为去卵巢间歇低氧(OVI)组、假手术间歇低氧(SOI)组以及对照组；前两组给予间歇低氧,而对照组间歇给予空气.28 d后,观察小鼠子宫的大小与形态并称重；主动脉弓石蜡切片进行HE染色,光学显微镜观察血管形态并测量血管壁内中膜厚度(IMT)；石蜡切片行免疫组化检测Trx-1蛋白表达水平；实时荧光定量PCR检测Trx-1的mRNA相对表达量.结果 HE可见对照组主动脉弓内皮光滑,平滑肌细胞排列较整齐,未见明显异常改变；SOI组可见内皮欠连续,局灶内皮细胞聚集,主动脉弓平滑肌纤维细胞排列紊乱、肥大以及平滑肌纤维样变；OVI组除可见SOI组小鼠的上述改变加重外,另可见血管局灶内膜明显增生以及外膜增厚等改变.对照组、SOI组及OVI组的IMT分别为(38.34±1.01) μm、(50.65±2.09)μm及(64.80+4.31)μm,三组间两两比较差异具有统计学意义(P＜0.01).SOI组(8.59±0.83)及OVI组(5.14±1.01)小鼠胸主动脉Trx-1mRNA相对表达量显著高于对照组(0.18±0.13),差异具有显著统计学意义(P＜0.001)；对照组、SOI组及OVI组小鼠主动脉弓Trx-1蛋白表达的累积光密度分别为(0.84±0.10)×103、(6.60±0.45)×103及(2.76±0.28)×103,三组间两两比较差异均具有显著统计学意义(P＜0.001).结论 CIH可导致主动脉弓血管壁形态改变,去卵巢可加重CIH所致主动脉弓的损害,而Trx-1蛋白表达的降低可能参与了此过程.
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N-乙酰半胱氨酸对高糖致大鼠腹膜间皮细胞NOX2与Trx-1表达的影响
目的:观察N-乙酰半胱氨酸(NAC)对高糖致大鼠腹膜间皮细胞(HPMC)烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX-2)及硫氧还蛋白-1(Trx-1)表达的影响,探讨其对高糖所致腹膜间皮细胞氧化应激损伤的保护作用.方法:将30只健康雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组(n=10):每日一次25ml生理盐水腹腔注射,在接受28d腹腔注射后,改为每日一次5ml生理盐水灌胃,连续灌胃8周.模型组(n=10,HGC):每日一次25ml 4.25％腹腔透析液腹腔注射,连续注射28d,并于入组后第8、10、12、22、24、26d给予0.6mg/kg剂量的LPS进行腹腔注射,以建立腹膜纤维化模型.于28d后同样改为每日一次5ml生理盐水灌胃,连续灌胃8周.治疗组(n=10,NAC):在成功建立腹膜纤维化模型后,给予100mg/kg剂量的NAC悬液每日一次灌胃,连续灌胃8周.实验周期12周.后取腹膜组织以免疫组化学检测壁层腹膜间皮细胞NOX-2及Trx-1的表达.结果:对照组NOX-2及Trx-1少量阳性表达,而HGC与NAC组NOX-2及Trx-1阳性表达与对照组相比明显上调,但HGC组显著高于NAC组,三组间比较,差异存在统计学意义(P＜0.05).结论:N-乙酰半胱氨酸可拮抗高糖致大鼠引起的腹膜间皮细胞NOX-2及Trx-1表达,减轻氧化应激损伤,从而延缓腹膜纤维化的发生.
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干扰硫氧还蛋白-1对H2O2诱导PC12细胞超氧化损伤的保护作用
目的 探讨硫氧还蛋白-1(sulfiredoxin-1,Sixn-1)对H2O2诱导的PC12细胞超氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 在Lipofectamine 2000的介导下,分别将pLVT574、pLVT575和pLVT576干扰质粒转染PC12细胞,同时设空白对照组(正常培养细胞)及阴性对照组(转染pLVT4质粒),普通显微镜和倒置荧光显微镜下观察转染效率,并采用RT-PCR和Western blot法分别检测转染细胞中Srxn-1基因mRNA转录和蛋白表达的水平.采用不同终浓度(50、100、150、200、250、300 μmol/L)的H2O2诱导PC12细胞,建立超氧化细胞损伤模型,MTT法检测Srxn-1对细胞存活率的影响,并采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)试剂盒检测细胞SOD活性及MDA含量.结果 镜下观察可见,转染后细胞死亡数较多,胞体缩小;有绿色荧光,转染效率达50％.si-Srxn-1-575组细胞中Sixn-1基因mRNA转录及蛋白表达水平较空白对照组明显下降(P＜0.05).终浓度为200 μmol/L的H2O2处理12 h后,PC12细胞的存活率为66％; H2O2+si-Srxn-1-575组的细胞存活率(49.3％)明显低于空白对照组(65.2％)(P＜0.05).H2O2+ si-Srxn-1-575组细胞中SOD活性[(10.319±1.362)U/mg pro]明显低于H2O2+空白对照组[(15.7±1.138) U/mg pro],MDA含量[(5.507±0.297)nmol/mg pro]明显高于H2O2+空白对照组[(3.41±0.281) nmol/mg pro](P均＜0.05).结论 Srxn-1对H2O2损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与其发挥内源性抗氧化作用有关.
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日本血吸虫硫氧还蛋白-1的克隆、表达和功能分析
目的 克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况. 方法 从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的基因序列,应用PCR技术对目的片段进行体外扩增,并克隆人原核表达载体pET28a,重组质粒转化E.coli BL21 (DE3)细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性.纯化的重组SjTrx-1蛋白免疫新西兰白兔,以制备的免疫兔血清作为抗体,应用免疫荧光定位技术检测SjTrx-1在日本血吸虫成虫体内的分布情况.制备日本血吸虫各虫期的总RNA样品,利用RT-PCR方法扩增目的片段,分析SjTrx-1基因在各发育阶段的转录本丰度. 结果 构建了重组表达载体SjTrx-1/pET28a,在E coli中实现了重组SjTrx-1蛋白的可溶表达,其相对分子质量(Mr)约为38000,与预测的融合蛋白大小相符.经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjTrx-1,并测定了其体外的酶催化活性.虫期转录特异性分析显示,该基因在各个虫期均存在转录,其中胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高,毛蚴和尾蚴中含量相对较低.荧光定位结果显示,SjTrx-1蛋白在虫体内分布广泛,且无组织特异性. 结论 SjTrx-1在日本血吸虫虫体内分布广泛,在胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高.
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莱菔硫烷对急性一氧化碳中毒大鼠脑组织神经细胞线粒体损伤的治疗作用
目的 探讨急性一氧化碳(CO)中毒后脑组织神经细胞线粒体超微结构和功能的损伤机制,明确不同剂量莱菔硫烷(sulforaphane,SFP)对急性CO中毒大鼠海马神经元的保护作用.方法 150只成年健康SD大鼠按数字表法随机分为正常对照组(30只)、CO中毒组(30只)和SFP治疗组90只.用高压氧舱吸入法建立急性CO中毒动物模型,用透射电镜观察大鼠脑组织神经细胞线粒体超微结构,JC-1荧光探针检测线粒体膜电位(MFI)变化,用免疫组化和定量RT-PCR法检测干预前后大鼠脑组织核转录因子红细胞相关因子-2 (Nrf-2)、硫氧还蛋白-1(Trx-1)及其mRNA的表达水平.结果 CO中毒可引起大鼠脑组织神经细胞线粒体超微结构受损,SFP能明显减轻CO中毒后神经细胞线粒体损伤程度.CO中毒后大鼠脑组织MFI值明显下降,SFP给药后3～7 d,神经细胞的MFI值虽有下降,但其水平明显高于同时间点CO中毒组(P＜0.05).与正常对照组相比,CO中毒大鼠脑组织中Nrf-2和Trx-1蛋白及其mRNA的表达水平略有增加,差异有统计学意义(P ＜0.05);SFP治疗后其表达水平明显增加,与同一时间点CO组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 CO中毒早期应用中等或高剂量的SFP能明显改善神经细胞线粒体结构和功能,增强细胞抗氧化应激能力,对急性CO中毒引起的脑损伤有积极的保护作用.
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β-葡聚糖抑制大鼠硅肺纤维化损伤的机制研究
目的 探讨β-葡聚糖通过对氧化应激的调节,抑制大鼠硅肺纤维化的作用及其机制.方法 采用动式染尘法制作大鼠硅肺模型,实验分组为:对照组、模型组、β-葡聚糖前处理组、β-葡聚糖后处理组.HE染色观察肺组织病理形态,检测各组大鼠肺组织及血清的丙二醛(MDA)表达、过氧化氢酶(CAT)以及还原型谷胱甘肽(GSH)表达;采用Western blot法检测肺组织内Ⅰ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、硫氧还蛋白-1(TRX-1)的表达.结果 与对照组相比,模型组有典型的矽结节形成,α-SMA阳性染色明显,而β-葡聚糖前、后处理组均能够显著抑制大鼠肺纤维化程度.与对照组相比,模型组肺组织、血清中MDA含量明显上调,而血清中CAT及肺组织中GSH含量增高,同时伴有Ⅰ型胶原、α-SMA蛋白水平的上调和TRX-1蛋白水平的下调(P＜0.05);而予以β-葡聚糖前处理和后处理,均能够显著抑制二氧化硅引起的上述病变,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 β-葡聚糖可能通过上调TRX-1表达,拮抗氧化应激损伤,从而抑制硅肺纤维化的发生与发展.
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急性坏死性胰腺炎大鼠硫氧还蛋白-1表达及清胰Ⅱ号颗粒剂对肾脏损伤保护作用的实验研究
目的：检测内源性硫氧还蛋白‐1（thioredoxin‐1，Trx‐1）在急性坏死性胰腺炎（acute necrotizing pancreatitis ，ANP）大鼠模型血液、胰腺和肾组织的表达；并观察中药清胰Ⅱ号颗粒剂对ANP胰腺和肾脏的保护作用以及对肾脏组织Trx‐1表达的影响。方法将96只SD大鼠随机分为正常组（A组，n＝24）、假手术组（B组，n＝24）、ANP组（C组，n＝24）及治疗组（D组， n＝24）。在制模后1小时治疗组给予250 g／l清胰Ⅱ号颗粒剂灌胃（10 ml／kg），6 h 1次，共3次，正常组、假手术组、ANP组三组给予等量生理盐水灌胃。于制模后6 h、12 h、24 h测定各组血清中T rx‐1的水平；制模后24小时处死大鼠，应用免疫组织化方法对胰腺以及肾脏中Trx‐1的表达情况进行测定。结果24小时内正常组、假手术组血清中 Trx‐1的表达较稳定，ANP组呈现一个持续升高的趋势，而治疗组T rx‐1的表达则呈现一个先上升后下降的趋势，12 h治疗组T rx‐1的表达较其它三组明显升高（P＜0.05），24 h ANP组血清中Trx‐1的表达较假手术组明显升高（P＜0.05），而24 h治疗组血清中Trx‐1的表达又较ANP组降低（P＜0.05），但仍高于正常组和假手术组（P＜0.05）；病理结果显示ANP组胰腺及肾脏组织损伤明显，Trx‐1的表达呈阳性，较正常组、假手术组、治疗组比较有统计学意义（P＜0.05）。结论 Trx‐1在ANP模型大鼠肾损伤中可能具有重要作用，中药清胰Ⅱ号颗粒可提前促进胰腺、肾脏组织Trx‐1的表达，减轻ANP时胰腺和肾脏损害，对其有保护作用。
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硫氧还蛋白-1在急性坏死性胰腺炎并急性胃黏膜损伤中的作用
目的 探讨硫氧还蛋白-1(TRX-1)在实验性急性坏死性胰腺炎(ANP)并急性胃黏膜损伤发病机制中的作用以及抗氧化剂褪黑素对其的影响.方法 72只大鼠随机分为对照组(C组,n=24)、ANP组(A组,n=24)和褪黑素干预组(M组,n=24).A组分3次腹腔内注射6%L-精氨酸(L-Arg)1.5 g/kg建立ANP模型;C组同法注射等量生理盐水;M组于首次注射L-Arg前0.5 h腹腔内注射I%褪黑素50 μg/kg.各实验组大鼠于末次腹腔内注射后6 h、12 h和24 h分批处死.光镜下观察胰腺和胃组织并进行病理学评分,采用免疫组化检测TRX-1在胃黏膜的表达,并检测胃黏膜中MDA、MPO的含量.结果 A组各时点胃黏膜TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显高于C组(P均<0.05);M组各时点胃黏膜中TRX-1的染色积分及MDA、MPO的含量明显低于A组(P均<0.05).胰腺和胃组织病理改变较A组明显减轻(P均<0.05).结论 内源性的TRX-1可能足胃黏膜组织抵御氧化应激损伤的重要因子之一,TRX-1的表达量可能与组织氧化应激损伤的严重程度有关.外源性的褪黑素在ANP时可能通过其抗氧化作用,减轻胃黏膜氧化应激损伤的程度.对胃黏膜有一定的保护作用.
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高体积分数氧对人肺腺癌细胞硫氧还蛋白-1及硫氧还蛋白还原酶-1表达的影响
目的 研究高体积分数氧(高氧)对人肺腺癌A549细胞硫氧还蛋白-1(Trx1)及硫氧还蛋白还原酶-1(TrxR1)表达的影响,探讨Trx1及TrxR1在高氧肺损伤中的作用.方法 体外传代培养A549细胞,待其生长至融合状态时随机分为高氧组和空气组.高氧组置于一饱和湿度密封箱中,通以950 mL·L-1氧气(O2)[含50 mL·L-1二氧化碳(CO2)]15 min;空气组置于同一室空气中15 min;2组同时置于37℃含50 mL·L-1 CO2细胞培养箱中,分别于6 h、12 h、24 h提取其A549细胞总RNA和总蛋白.采取半定量反转录(RT)-PCR测定其Trx1 mRNA、TrxR1 mRNA的表达;采用Western blot检测其A54.9细胞Trx1蛋白的表达.结果 1.与空气组比较,A549细胞高氧暴露6 h、12 h时Trx1 mRNA表达显著增强(P=0.012,0.002),24 h时减弱,与空气组比较差异无统计学意义(P=0.795);与空气组比较,高氧暴露6 h TrxR1 mRNA无明显变化(P=0.878);12 h,24 h时TrxR1 mBNA表达明显增强(P=0.003,0.001).2.与空气组比较,高氧暴露6h Trx1蛋白有所增加但差异无统计学意义(P=0.575);12 h、24 h时Trx1蛋白表达均显著增强(P=0.003,0.026).结论 高氧暴露可上调A549细胞中Trx1及TrxR1的表达,提示内源性的Trx1及TrxR1在高氧肺损伤机制中提供了保护作用.
关键词： 高体积分数氧 A549细胞 肺损伤 硫氧还蛋白-1 硫氧还蛋白还原酶-1 -
硫氧还蛋白-1与衰老的研究进展
过去的几十年里，虽然对衰老的氧化应激理论进行了广泛的研究，但是目前仍然存在着许多争议，特别在哺乳动物中。近关于硫氧还蛋白-1(Trx1)在氧化应激和衰老中的研究提示：1)氧化应激及后续信号通路的改变可能在不同年龄阶段有着不同的病理生理作用；2)与氧化损伤的累积相比，氧化应激和氧化还原状态导致氧化还原敏感信号通路的改变可能在衰老的病理生理中扮演着更重要的角色。因此，本文对硫氧化蛋白-1与衰老的关系进行简述。
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姜黄素对纳米二氧化硅致A549细胞氧化损伤影响
目的 研究姜黄素对纳米二氧化硅(SiO2)刺激A549细胞所致氧化应激的影响,探讨相关作用机制.方法 取A549细胞随机分6组.纳米SiO2组细胞予终质量浓度为20 mg/L的纳米SiO2溶液刺激;姜黄素低、中、高剂量组细胞分别予含终浓度为5、10、20 μmol/L姜黄素和终质量浓度为20 mg/L纳米SiO2溶液处理,溶剂对照组细胞予体积分数为0.10％的二甲基亚砜处理,空白对照组细胞不予上述任何处理.6组细胞经12 h孵育后,以分光光度计检测细胞内丙二醛(MDA)水平和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力,分别以实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫印迹法检测细胞核因子E2相关因子2(NRF2)、硫氧还蛋白(TRX)1、硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)的mRNA和蛋白相对表达水平.结果 与空白对照组和溶剂对照组比较,纳米SiO2组A549细胞内MDA水平升高(P＜0.05),T-SOD活力下降(P＜0.05),NRF2、TRX1的mRNA和蛋白相对表达水平均上调(P＜0.05),TXNIP的mRNA和蛋白相对表达水平均下调(P＜0.05).予姜黄素干预后,随姜黄素浓度的增加,A549细胞内MDA水平下降,T-SOD活力升高,NRF2 mRNA相对表达水平和TRX1的mRNA、蛋白相对表达水平均上调,TXNIP的mRNA和蛋白相对表达水平均下调,均呈剂量-依赖性关系(P＜0.01).结论 姜黄素对纳米SiO2所致A549细胞氧化应激具有保护作用;其可能通过调控NRF2/抗氧化反应元件通路,激活TRX系统,发挥抗氧化作用,保护细胞免受过度的氧化损伤.
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Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究
目的 分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用.方法 选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的mRNA表达情况.结果 与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P＜0.05);分别为(19.9332± 1.98180) U/L、(64.3699± 14.53874) U/L、(46.7455±6.27572) U/L、(99.0038 ±25.34329) U/L、(46.7590±8.85478) U/L和(50.3374±14.19886)U/L.感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的mRNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P＜0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P＜0.05).结论 Nrf2和Trx1mRNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用.
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可诱导心肌特异性表达TRX蛋白转基因小鼠模型的建立
目的：建立心肌特异性、高效表达鼠源硫氧还蛋白-1(Thioredoxin 1，Trx-1)的转基因小鼠模型。方法将TRE-Tight-Trx-1与能够控制TRE-Tight下游基因在心肌特异性表达的α-MHC-rtTA-hGH转基因载体分别显微注射入C57BL/6小鼠受精卵细胞中得到的分别含有一段转基因载体的转基因小鼠，再将这两种转基因小鼠进行交配，获得同时含有TRE-Tight-Trx-1和α-MHC-rtTA-hGH这两段基因的双阳性子代转基因小鼠。使用强力霉素(Dox)持续诱导6周龄双阳性小鼠6周，再用Western blot方法检测转基因小鼠心肌细胞中Trx-1表达量。结果与野生型C57BL/6小鼠比较，经过强力霉素诱导的双阳转基因小鼠心肌细胞中Trx-1有高表达量(P<0.05)。结论我们得到了可诱导、高效表达Trx-1的转基因小鼠系，为心肌肥大疾病的研究和治疗提供新的研究思路。
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硫氧还蛋白-1:一个新的疾病氧化应激损伤标志物
新近研究提出,氧化应激损伤是糖尿病及其并发症,以及心血管疾病的重要发病机制之一,干预氧化应激可能成为心血管疾病治疗的新靶点.硫氧还蛋白-1(Trx-1)作为维持细胞内蛋白质还原状态的主要的二硫键还原酶,在对抗细胞的氧化应激,维持细胞正常生理活性中起着重要的作用.同时有学者提出,血清中Trx-1的水平可以作为判断机体氧化应激损伤及疾病程度的一个生物标志物.本文对Trx-1的结构、功能、调控及与疾病的相关性做一综述.
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乳腺癌组织中COX-2、TRX-1表达及其预后意义
目的:应用免疫组化法,检测COX-2、TRX-1在乳腺癌组织中表达,探讨COX-2、TRX-1表达与乳腺癌临床病理特征及预后因素的关系.方法:122例乳腺癌组织石蜡标本制作成乳腺癌组织芯片.免疫组化sP法检测COX-2、TRX-1表达.所有患者均接受规范性手术、术后辅助化疗及放疗,激素受体阳性病人接受5年的内分泌治疗.从手术日期到复发转移或随访截止日期(2008年7月)确定为患者无病生存期.共有45例复发转移病例.结果:122例乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达,分别为58.2%、54.1%,且二者表达呈正相关(r=0.286,P=0.001);COX-2表达与临床分期(r=0.193,P=0.033)、肿块大小(r=0.192,P=0.034)及淋巴结转移(r=0.186,P=0.040)呈正相关,TRX-1表达与临床分期(r=0.206,P=0.023)、肿块大小(r=0.236,P=0.009)呈正相关,与淋巴结转移(r=0.175,P=0.054)不相关.COX-2或TRX-1表达与无病生存期呈负相关(P=0.027,P=0.046);COX-2和TRX-1共表达与无病生存期呈负相关(P=0.017).结论:乳腺癌组织中COX-2、TRX-1均呈高表达,两者与乳腺癌患者预后密切相关;COX-2、TRX-1表达呈正相关,推测乳腺癌组织中TRX-1可能参与COX-2调节.
