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RNA干扰神经膜蛋白2基因表达对骨肉瘤细胞生物学特性的影响
目的 探讨抑制鼻咽癌细胞趋化因子受体-4(CXCR4)基因表达对癌细胞增殖、侵袭的影响及机制.方法 回顾性收集鼻咽癌42例临床资料及相应的癌旁组织.RT-PCR和Westernbloting分别检测鼻咽癌及相应的癌旁组织中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达;人鼻咽癌细胞系CNE-2Z分为空白组(细胞未做任何处理)、NC-siRNA组(细胞转染无义siRNA序列)和CXCR4-siRNA组(细胞中转染CXCR4的靶向siRNA序列).转染48h后Westernblo-ting检测各组细胞中CXCR4、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达;CCK8实验和Transwell小室分别检测细胞的增殖及侵袭能力.结果 鼻咽癌中CXCR4基因的mRNA及蛋白表达均显著高于癌旁组织(P<0.01);转染CXCR4-siRNA组后CXCR4的蛋白表达显著降低;NC-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、CyclinD1蛋白表达与空白组差异无统计学意义(P>0.05);CXCR4-siRNA组细胞存活率、细胞侵袭数及MMP-2、MMP-9、β-catenin、CyclinD1蛋白表达均显著低于空白组(P<0.01).结论 抑制鼻咽癌细胞CXCR4基因表达可显著降低癌细胞的增殖与侵袭能力,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关.
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人骨形态发生蛋白-7在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达
目的 探讨人骨肉瘤细胞U2-OS表达重组人骨形态发生蛋白-7(recombinant human bone morphogenetic protein-7,rhBMP-7)的可行性.方法 将hBMP-7成熟肽基因片段克隆至载体pcDNA3.1上,构建真核表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7.利用Lipofectamine 2000将重组质粒转染至U2-OS细胞中,采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中hBMP-7基因mRNA和rhBMP-7的表达.结果 真核组表达质粒pcDNA3.1-rhBMP-7经Nde Ⅰ和EcoRV双酶切及测序鉴定证明构建正确.pcDNA3.1-rhBMP-7质粒转染的U2-OS细胞中hBMP-7基因mRNA和rhBMP-7的表达水平均明显高于pcDNA3.1载体转染的细胞(P＜0.05).结论 成功构建了hBMP-7基因的重组表达质粒,并在U2-OS细胞中成功表达,为进一步研究hBMP-7的制备方法和建立新的表达系统奠定了基础.
关键词： 人骨形态发生蛋白-7 U2-OS细胞 基因重组 基因表达 -
氯化锂对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖、凋亡及Fas、Caspase-3mRNA表达的影响
目的:研究氯化锂(LiCl)对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的机制.方法:以40、80、150 mmol/L的LiCl作用于U2-OS细胞24、48和72 h后,采用 MTT法检测细胞增殖抑制率;作用48 h后,流式细胞术法检测细胞凋亡率,并分析细胞周期;RT-PCR法检测凋亡相关基因Fas、Caspase-3 mRNA的表达.结果:随LiCl作用剂量的增加,U2-OS细胞增殖抑制率增加,细胞凋亡率和Fas、Caspase-3 mRNA表达量亦增加(F=61 157.480,70.828和418.072,P<0.001);细胞周期分析显示细胞被阻滞于S期(P<0.001).结论:LiCl可能通过促进凋亡基因Fas、Caspase-3的表达,抑制U2-OS细胞增殖并诱导凋亡.
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Gab2在人骨肉瘤细胞U2-OS中的表达及意义
目的：探讨Grb2协同结合蛋白2（ Gab2）在人骨肉瘤细胞系中的表达及其与人骨肉瘤细胞侵袭转移的关系。方法：应用小RNA干扰技术，将合成的小RNA干扰质粒转染给人骨肉瘤U2-OS细胞，采用Western blotting和RT-PCR法检测转染后Gab2的蛋白和mRNA表达水平；体外细胞趋化运动实验和侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果：Gab2在人骨肉瘤U2-OS细胞系中高表达，且转染Gab2 siRNA后的细胞（ SiGab2／U2-OS）中Gab2蛋白及mRNA的表达水平低于转染scramble siRNA细胞（ Scr／U2-OS）和U2-OS；趋化运动实验发现在10μg／L表皮生长因子（ EGF）的诱导下SiGab2／U2-OS细胞的迁移能力较U2-OS和Scr／U2-OS细胞明显下降，差异有统计学意义（P＜0.01）；SiGab2／U2-OS细胞侵袭并穿透Matrigel 膜基质的细胞数量均比Scr／U2-OS细胞和U2-OS细胞少，SiGab2／U2-OS细胞的体外侵袭能力显著降低（P＜0.01）。结论：利用siRNA干扰技术降低Gab2的表达对人骨肉瘤U2-OS细胞的迁移和侵袭能力有明显的抑制作用。
关键词： Grb2协同结合蛋白2 小干扰RNA 细胞侵袭 U2-OS细胞 -
蛇接骨草提取物对U2-OS细胞增殖及细胞周期的影响
目的 研究蛇接骨草提取物对U2-OS细胞的增殖抑制作用及对U2-OS细胞周期的影响.方法 以 95％乙醇进行提取(提取物简称GPE).MTT法检测GPE对U2-OS细胞的增殖抑制作用,Annexin VFITC凋亡检测试剂盒分析GPE对U2-OS细胞的凋亡诱导作用,流式细胞术分析GPE对U2-OS细胞周期的影响.结果 GPE剂量依赖性抑制U2-OS细胞的增殖,IC50为72μg·mL-1；GPE可诱导U2-OS细胞凋亡,并将U2-OS细胞阻滞在G0/G1期.结论 蛇接骨草具有抗肿瘤活性.
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熊果酸对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖及凋亡的影响研究
目的 探讨熊果酸对入骨肉瘤细胞U2-OS增殖以及凋亡的影响,分析其作用机制.方法 取人骨肉瘤细胞株U2-OS分为4组,分别采用浓度为0、10、20、40μmol/L的熊果酸进行培养.培养0、24、48、72 h,应用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞增殖能力变化;培养48h,使用流式细胞术测定熊果酸对骨肉瘤细胞周期和凋亡的影响,应用实时荧光定量PCR和Western blot检测周期蛋白cyclin D1的表达和凋亡相关蛋白Caspase-3的表达和活化情况.结果 CCK-8检测示,培养0、24 h时各组吸光度(A)值比较,差异无统计学意义(P＞0.05);48、72h时随浓度增加A值逐渐减小,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测示,随熊果酸浓度增加,U2-OS细胞的G1期增加、S期及G2/M期减少,细胞凋亡率逐渐增加,各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).与0 μmol/L组相比,10、20、40μmol/L组cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达量下调(P＜0.05);各组间Caspase-3 mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P＞0.05);但随熊果酸浓度增加,Caspase-3前体蛋白下降,活化的Caspase-3增加,各组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 熊果酸能有效抑制U2-OS细胞增殖,诱导cyclin D1表达下调导致细胞在G0/G1期阻滞,同时使Caspase-3活化增加进而促进细胞凋亡.
