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利用BALB/c3T3细胞毒性预测急性经口毒性初试剂量的验证研究
目的 依据经济合作与发展组织(OECD)2010年7月正式发布的导则No.129来验证“利用BALB/c 3T3成纤维细胞预测急性经口毒性试验初始剂量”在国内实验室的可行性和适用性,并为建立细胞毒性试验预测急性经口毒性试验初始剂量试验的操作规程提供方法学上的依据.方法 将BALB/c 3T3细胞接种于96孔板中,培养ld后染毒.染毒2d后,用中性红染色3h后解吸,于540 nm下用酶标仪测定吸光度(A)值.将原始数据进行处理和拟合分析,得到IC50(抑制细胞活性50％的化学品浓度)后,代入预测模型计算,得到急性经口毒性的LD50推测值.试验所用受试物共8种,分别为二甲基亚砜,乙醇,氯化钠、葡萄糖以及4种本实验室用于大鼠急性经口毒性评价试验的样品.结果 根据国内现行的毒性分级标准可知,利用细胞毒性试验得出的受试物的LD50值与文献所报道的或本实验进行的急性经口试验得到LD50值的毒性分级基本一致.结论 利用BALB/c 3T3细胞毒性试验可以较为准确的判断急性经口毒性试验的初始剂量.
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苦碟子注射液的体外细胞毒性研究
目的：探讨苦碟子注射液(KDZ)的安全剂量及体外细胞毒性评价的可行性。方法：采用 MTT 法检测沈阳、通化两个厂家共12批次的KDZ对小鼠成纤维细胞(L929)的细胞毒性级别，并比较各两厂家之间的半数抑制浓度(IC50)差异是否存在统计学意义。结果：12批 KDZ 的给药浓度与 OD 值成显著的负相关，相关系数分别为-0.986和-0.924；12批KDZ原液对L929的细胞毒性级别均为4级，稀释64倍时毒性级别均为1级；两个厂家KDZ的IC50比较差异并无统计学意义(P＞0.05)。结论：当KDZ稀释64倍时对L929细胞基本无毒，采用细胞评价方法对KDZ进行安全性评估是可行的。
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基于Cocktail探针法的玉屏风散复方配伍研究
目的:以Cocktail探针约物法评价玉屏风散对肝微粒体CYP450主要亚型活性的影响,探讨复方配伍规律.方法:按拆方设计,设计7个组方,采用大鼠肝微粒体孵育体系,测定其对CYP主要亚型的半数抑制浓度(IC50).结果:玉屏风散及拆方对肝药酶CYPs的IC50均大于生药1.0g·L-1,对CYP1 A2,CYP2C19,CYP3A4 而言,玉屏风散及拆方配伍后的IC50较方中主要影响因子的IC50有增大的趋势(对酶活性的影响减小)；对CYPs而言,配伍后的实测IC50较线性预测值有减小的趋势.结论:从药物对代谢酶活性影响的角度而言,玉屏风散配伍应用具有一定优势和合理性.
关键词： 玉屏风散 CYP450 中药配伍 IC50 Cocktail探针药物法 -
3',4',5,7-四（二乙基磷酰基）-木犀草素对碱性脂肪酶活性影响机制的研究
目的探讨黄酮类化合物3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶活性的影响。
方法采用3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素作为抑制剂，以改进后的铜皂法测定脂肪酶活性，测定3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素的浓度与脂肪酶活性的关系，得出该化合物对脂肪酶活性影响，并测定其 IC50值。
结果该化合物对碱性脂肪酶活性的抑制作用为非竞争性抑制，其 IC50为3.17×10-7 mol/L。米氏常数 Km=100 mmol/L，抑制常数 Ki=2.7×10-7 mol/L。
结论3',4',5,7-四(二乙基磷酰基)-木犀草素对碱性脂肪酶的抑制机制是其与酶的活性部位以外的基团作用而导致酶活性降低，呈非竞争性抑制。 -
糖皮质激素受体α对预测多发性硬化患者激素反应性的价值
目的 探讨糖皮质激素受体α(glucocorticoid receptorα,GRα)对预测多发性硬化(multiple sclerosis,MS)患者激素反应性的价值.方法 使用ELISA法检测19例MS患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中平均GRα浓度;于治疗前、治疗后28 d对患者行扩展残疾状况评分量表(expanded disability status scale,EDSS)评分;测定7例患者的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration of a substance,IC50)并与19名健康对照进行比较.结果 治疗有效组MS患者平均GRα浓度显著高于治疗无效组[(131.94±76.28)ng/106细胞vs(56.98±25.28)ng/106细胞,P＜0.05].MS患者治疗前平均GRα浓度与IC50间呈负相关(r=-0.826,P＜0.05).结论 GRα对MS患者的激素反应性存在一定预测价值,可能成为预测MS患者激素反应性的新指标.
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三羟基异黄酮抑制肿瘤细胞增殖作用研究
目的 探讨三羟基异黄酮体外对人白血病细胞K562、中国仓鼠卵巢细胞CHO、黑色素瘤B16细胞生长增殖的影响.方法 用MTT法检测三羟基异黄酮对K562、CHO、B16细胞生长增殖的影响.结果 三羟异黄酮对K562、CHO、B16细胞增殖有不同程度的抑制作用,并呈明显的剂量一效应关系.其中三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的抑制作用大于对人白血病细胞株K562和中国仓鼠卵巢细胞CHO作用.结论 三羟异黄酮具有抑制肿瘤细胞生长的作用.
关键词： K562、CHO、B16细胞 IC50 三羟异黄酮 -
β-内酰胺酶抑制剂——他佐巴坦与舒巴坦酶动力学的比较研究
目的:比较他佐巴坦与舒巴坦的抑酶强弱.方法:测定Ki值及IC50.结果:他佐巴坦的Ki值大于舒巴坦的Ki值;他佐巴坦的IC50小于舒巴坦的IC50.结论:他佐巴坦的抑酶作用强于舒巴坦.
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槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的观察槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的[32P]放射活度来检测.结果重组人蛋白激酶CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.槲皮素对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为522 nmol/L,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3.槲皮素对重组人蛋白激酶CK2的动力学研究表明:它与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用.结论槲皮素是CK2有效抑制剂,该抑制作用可能是槲皮素抗肿瘤作用又一分子机制,为今后筛选更有效的CK2抑制剂提供了一种较为简便的筛选方法.
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核桃青皮提取物对Hela细胞增殖及caspase-3蛋白表达的影响
目的 观察不同浓度核桃青皮提取物对Hela细胞增殖的抑制作用,探讨提取物对Hela细胞生长的影响.方法 光镜下观察Hela细胞形态的改变,MTT法测定细胞生长抑制率,免疫组化观察caspase-3蛋白的表达.结果 随提取物浓度的增加,细胞形态的改变明显,细胞变圆,折光率增加,细胞逐渐减少,对细胞生长的抑制作用增强,caspase-3蛋白的表达增加.结论 提取物可抑制Hela细胞的生长,上调Hela细胞caspase-3蛋白的表达.
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MTT法测定双黄连粉针中有效成分对大鼠腹腔肥大细胞的 IC50
目的：采用MTT法测定双黄连粉针中三种组成药材提取物及三种主要有效成分对大鼠腹腔肥大细胞IC50。方法：将空白大鼠腹腔肥大细胞无菌条件下分离纯化后，高、中、低三个浓度与腹腔肥大细胞及一定量的MTT共同孵育后，测定490 nm处OD值。结果：双黄连中三种药材提取物及主要有效成分对大鼠肥大细胞的IC50分别为：0．18mg／mL、12．0μg／mL、0．06mg／mL；0．5mg／mL、8.0μg／mL、0.04mg／mL。结论：通过对上述各组药物对大鼠腹腔肥大细胞的IC50的测定，为考察双黄连粉针中各物质对肥大细胞的脱颗粒作用奠定实验基础。
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镍离子体外细胞毒性研究
该文的目的在于深入研究镍离子的细胞毒性,为含镍医疗器械生物学评价提供基础数据.该文选取小鼠结缔组织细胞(L929)、小鼠胚胎心肌细胞(H9c2(2-1))、人胚肾细胞(293[HEK-293])、人成骨细胞(hFOB1.19)、人肝永生化细胞(THLE-3)、人T淋巴瘤细胞(H9)、人外周血B淋巴细胞(IM-9)等七种细胞,按医疗器械细胞毒性试验推荐的MTT法检测,对不同镍离子浓度下细胞毒性进行研究.得出每种细胞在不同镍子浓度下的细胞增殖率,并对细胞毒性进行分级,同时计算每种细胞的IC50值.结果表明不同细胞对镍离子的敏感度不同,H9细胞对镍离子敏感,而L929细胞对镍离子的毒性耐受.当镍离子浓度不大于1.25 mg/L时,所有细胞的细胞毒性均不大于1级,可认为此浓度以下为所选七种细胞的细胞毒性安全区.若以L929细胞作为医疗器械细胞毒性评判依据,镍离子浓度在5 mg/L以下时无细胞毒性.本研究结果为初步判断含镍医疗器械中镍离子溶出是否引起细胞毒性及全身毒性提供了实验依据.
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基于IC50的医疗器械细胞毒性试验方法的研究
针对ISO 10993-5:2009中规定的MTT法的振动条件和观察终点进行研究,并对lC50在MTT法结果评价中的应用情况进行探讨.研究表明,将IC50用于MTT法试验结果的定量分级评价是可行的.
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头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌抗菌作用研究
目的 研究头花蓼对多重耐药金黄色葡萄球菌的抗菌活性.方法 采用纸片扩散法测定抑菌圈直径,微量肉汤稀释法测定各实验菌株的低抑菌质量浓度(MIC)和半数抑制质量浓度(IC50值),液体转染法测定低杀菌质量浓度(MBC).结果 头花蓼提取物对各多重耐药金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用,60％乙醇提取物对各耐药菌的抑菌圈明显大于水提物,并大于没食子酸.60％乙醇提取物与水提物对各耐药菌株的MIC值范围为0.78～3.12 mg/mL和IC50值范围为0.46～ 1.81 mg/mL,均小于没食子酸的MIC值和IC50值.60％乙醇提取物MBC值范围为1.56～ 6.25 mg/mL,小于水提物和没食子酸.结论 头花蓼乙醇提取物体外抗多重耐药金黄色葡萄球菌作用优于没食子酸,提示头花蓼除了没食子酸外还存在其他抗菌成分.
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香椿叶总黄酮的酶法提取及其清除DPPH自由基能力的研究
目的:确定酶法提取香椿叶中总黄酮的工艺条件.方法:在单因素试验的基础上,用正交试验法对香椿叶总黄酮的酶法提取工艺进行优选,选用L16(45)进行正交试验,以总黄酮的得率为主、提取物以黄酮计的清除DPPH自由基的IC50值为次参考指标,考察酶用量、酶解温度、酶解时间、酶解pH值、提取温度对香椿叶总黄酮提取量和提取物以总黄酮计的清除DPPH自由基的IC50值的影响.结果:优化的工艺条件为:25 g原料、175 mg纤维素酶和200 mL pH值为4.0的HAc-NaAe缓冲液混匀,在50℃下在150 r/min的摇床中酶解2 h后,加入400 mL 95%的乙醇在70℃浸提1 h,过滤.滤渣再加入400 mL体积分数65%乙醇浸提1 h,共提取5次.此条件下黄酮提取量为:24.708 6 mg/g香椿叶,提取物以总黄酮计的清除DPPH的IC50为28.090 7.结论:该工艺是酶法提取香椿叶总黄酮的佳工艺.
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补骨脂生品及炮制品体外抑菌活性研究
目的 以中药补骨脂为研究对象,研究补骨脂生品及炮制品对金黄色葡萄球菌(SA)、耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(M RSA)和β-内酰胺酶阳性的金黄色葡萄球菌(ESBLs-SA)的体外抑菌活性.方法 以小檗碱为阳性对照,利用K-B法和液体培养法进行体外抑菌活性研究.结果 石油醚部位是补骨脂生品主要的抑菌活性部位,补骨脂生品及炮制品对SA的抑制活性＞MRSA＞ ESBLs-SA,酒炙补骨脂(甲醇总提取物)和酒炙补骨脂(石油醚部位)在质量浓度为50 mg/mL对3种菌的抑菌圈均为12 mm,活性较好；液体培养法中,酒炙补骨脂石油醚部位(IC50 =0.10 mg/mL)活性好.结论 不同炮制方法对补骨脂抑菌作用有明显的影响,尤其是酒炙补骨脂抑菌活性增强的较显著.
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染料木黄酮脂质体的制备及其对肿瘤细胞体外增殖的抑制作用
目的 研究染料木黄酮脂质体的制备方法及其对肿瘤细胞体外增殖的影响.方法 采用超声薄膜法制备染料木黄酮脂质体;活细胞计数法和MTT法观察染料木黄酮脂质体对肿瘤细胞的增殖抑制作用.结果 染料木黄酮脂质体的平均粒径为136.7 nm,剂量依赖性抑制A549和HepG2细胞的增殖,IC50分别为10.46、12.34 μmol/L.结论 染料木黄酮脂质体对A549和HepG2肿瘤细胞有明显的增殖抑制作用,且作用强于游离染料木黄酮.
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2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果的比较
目的 比较2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果的影响.方法 参照化学品体外3T3中性红摄取光毒性试验指导原则(OECD 432),采用模拟阳光光源和紫外光源对6种参考物质进行试验.结果 6种参考物质在2种光源照射后其光刺激因子和平均光效应均接近OECD 432中的参考值,各个物质在无光和有光下的IC50值也相近.结论 2种光源对体外3T3细胞光毒性试验结果基本无影响.
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Tyrphostin AG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响
目的:观察Tyrphostin AG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法:利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的[32P]放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG34对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为1.0μmol*L-1,抑制作用远大于CK2已知抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3).AG34对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用, 与酪蛋白呈非竞争性抑制作用.结论:AG34不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂. 重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
关键词： 重组蛋白激酶CK2 Tyrphostins AG34 IC50 酶动力学 -
CMPK1蛋白与阿霉素引起的多药耐药的相关性研究
目的 对阿霉素可能的作用靶点进行分析,筛选阿霉素耐药相关蛋白.方法 质粒转染HEK239细胞以构建蛋白高表达模型;IC50检测细胞的药敏性;RT-PCR检测细胞内基因的表达;Western blot检测CMPK1蛋白的表达;CMPK1 siRNA构建CMPK1蛋白低表达模型.结果 IC50检测结果表明高表达CMPK1蛋白的细胞对阿霉素的敏感性增加程度大(IC50HEK293-CMPK1/IC50HEK293-Control=0.15,P<0.01),且阿霉素耐药细胞(MCF7/ADM)中CMPK1蛋白的表达低于乳腺癌亲本细胞MCF7(P<0.05).MCF7细胞中,CMPK1蛋白表达水平经CMPK1 siRNA下调之后,对阿霉素的药敏性随之降低 (IC50MCF7-siCMPK1/IC50MCF7-Control=3.6,P<0.01),且对紫杉醇、吉西他滨的药敏性也随之降低.结论 CMPK1与细胞的多药耐药相关,且CMPK1蛋白的表达与药敏性呈正相关,提示了CMPK1作为多药耐药治疗靶点的可能性.
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CJ016对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制活性研究
目的 研究CJ016对人肺癌模型的治疗效果及其作用机制.方法 建立人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤模型,考察CJ016体内抑制肿瘤生长效果;同时将肿瘤进行免疫组化检测,考察其对肿瘤内CD31和细胞凋亡的影响.结果 CJ016对A549细胞增殖有明显抑制作用,其IC50值为34.22 nmol·L-1;动物实验表明其具有较好的肿瘤抑制效果,抑瘤率、T/C%值分别为70.08%和27.75%(20 mg·kg-1);同时,CJ016能降低肿瘤细胞内CD31的表达,促进肿瘤细胞凋亡.结论 CJ016能明显抑制A549细胞荷瘤小鼠肿瘤生长,其可能的作用机制是减少血管生成和诱导肿瘤细胞凋亡.
