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羧肽酶A1全酶及其肽段的分泌表达及活性测定
抗体导向酶一前体药物疗法(antibody-directed enzyme prodrug therapy,ADEPT)自1987年由Bagshawe等提出以来,其研究受到广泛关注[1-2].
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槲皮素-7,4′-二硫酸酯钠对重组人CK2全酶的抑制作用及动力学分析
目的观察槲皮素-7,4′-二硫酸酯钠(sodium quercetin-7,4′-disulphate,SQDS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制.方法通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性.结果重组人CK2是一种Ca2+,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.SQDS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用,IC50为4.4 μmol·L-1,抑制作用大于已知CK2抑制剂DRB和A3.CK2的动力学研究表明:SQDS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用.结论 SQDS是有效的CK2抑制剂,对于开发更有效的CK2抑制剂及将SQDS用于临床提供了一定的实验依据.
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酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英)
目的为了观察Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理.方法利用基因工程克隆,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2 α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的[32P]放射活度来检测.结果重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为20.8 μmol·L-1,抑制强度介于已知CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)之间.AG114对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP呈混合竞争性抑制作用, 与酪蛋白呈非竞争性抑制作用.结论 AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的观察3,6-二羟黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,寻找CK2的抑制剂.方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度3,6-二羟黄酮对CK2活性的影响,并通过酶的动力学分析其抑制作用机制.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的[32P]放射活度来检测.结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致.3,6-二羟黄酮对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为13.93 μmol·L-1;进一步分析,它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为10.67μmol·L-1;与酪蛋白呈以非竞争性为主的混合性抑制CK2的活性,抑制常数Ki值为17.34 μmol·L-1.结论3,6-二羟黄酮是一种重组人蛋白激酶CK2的抑制剂.重组人CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的观察槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的[32P]放射活度来检测.结果重组人蛋白激酶CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.槲皮素对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为522 nmol/L,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3.槲皮素对重组人蛋白激酶CK2的动力学研究表明:它与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用.结论槲皮素是CK2有效抑制剂,该抑制作用可能是槲皮素抗肿瘤作用又一分子机制,为今后筛选更有效的CK2抑制剂提供了一种较为简便的筛选方法.
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1,4-二羟蒽醌是一种有效的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂
目的观察1,4-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的作用.方法在体外等物质的量混合CK2a与α'亚基构成重组CK2全酶.以重组人CK2全酶为分子靶点,通过测定转移到CK2底物ATP的32P放射活度,来检测不同浓度5-氯苯并三唑对CK2活性的影响,并进行动力学分析.结果 1,4-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有抑制作用,且该作用随浓度的增加而增强,其IC50为63.15 μmol/L;它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki为40.49 μmol/L;与酪蛋白呈非竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki为44.72 μmol/L.结论 1,4-二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的有效抑制剂.
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T-STAR在胃癌组织中的表达及临床意义
端粒酶与胃癌的发生、发展有十分密切的联系,目前研究认为端粒酶逆转录酶(hTERT)是人类端粒酶活性的主要调控亚单位,其mRNA表达水平随着端粒酶活性增加而增加,hTERT一旦表达,就和其他亚单位一起组装成具有高活性的端粒酶全酶[1-6].
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氨氯吡咪对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制动力学
目的了解氨氯吡咪对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法 利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下通过测定转移到CK2底物上的［γ32P］GTP的［32P］放射活度来测定CK2的活性.结果 氨氯吡咪对重组人CK2全酶具有抑制作用,IC50为257.57 μmol·L-1.氨氯吡咪对重组人CK2全酶的动力学研究表明：它与GTP呈竞争性抑制作用,抑制常数Ki值为 236.30 μmol·L-1;与酪蛋白呈非竞争性抑制作用,抑制常数Ki值为 163.63 μmol·L-1.结论氨氯吡咪除了能抑制cAMP或ATP依赖的酶以外,还可以抑制以GTP为磷酸供体的蛋白激酶.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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槲皮素-7-硫酸酯钠盐对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响
目的观察槲皮素-7-硫酸酯钠盐(SQMS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制. 方法通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的[32P]放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性. 结果 SQMS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用,IC50为1.37 μmol*L-1.CK2的动力学研究表明:SQMS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用.结论 SQMS是CK2的抑制剂,SQMS的抑制作用与ATP呈竞争性、与酪蛋白呈非竞争性.
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AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用
目的观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制.方法利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的 [ 32P]放射活度来检测.结果重组人CK2是一种Ca2+、c AMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1112对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC50为6.0 μmol·L-1,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3.AG1112 对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP和酪蛋白分别呈混合性和非竞争性抑制作用.结论由于AG1112对重组人CK2显示出很强的抑制作用,因此重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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ADMA所致血管内皮功能障碍与心血管疾病
不对称二甲精氨酸(ADMA)为一氧化氮全酶(NOS)的内源性竞争性抑制剂,在动脉粥样硬化及具有动脉粥样硬化危险因素的患者的血浆中浓度明显升高,血浆ADMA水平与血管内皮功能障碍程度及动脉粥样硬化有关.
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七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系
目的:观察7种黄酮类化合物时重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析.方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2 α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值.结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63 umol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB.结构效应关系分析表明,C6,C3'和C4'上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个.OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2'和C5'上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用.结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置.
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黄芩甙对重组人蛋白激酶 CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
背景与目的:蛋白激酶 CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝 /苏氨酸蛋白激酶.在许多实体瘤、白血病细胞中 CK2的活性均增高.其α及α′基因是原癌基因. CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视.为了寻找肿瘤细胞内 CK2的特异性抑制剂,本研究观察黄芩甙体外对重组人蛋白激酶 CK2的抑制效果,并进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型.方法:利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人 CK2的α′及β亚基并在体外等摩尔混合构成 CK2全酶,测定不同条件下 CK2的活性. CK2活性通过测定转移到 CK2底物上的 [γ-32P]ATP的 32P的放射性活度来检测.结果:黄芩甙能显著抑制重组人蛋白激酶 CK2的活性( IC50=2.54μ mol/L).酶动力学分析表明,黄芩甙与 ATP呈非竞争性抑制 CK2的活性( Ki=7.73μ mol/L) ,与酪蛋白则呈混合性抑制 CK2的活( Ki=3.07μ mol/L).结论:黄芩甙是一种较强的体外蛋白激酶 CK2的抑制剂.
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AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用
背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度进化保守性的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的多种癌症是上调的.CK2可作为一种癌基因起作用,它的靶向抑制可用于肿瘤的治疗.为了寻找特异性CK2抑制剂,本文观察Tyrphostin中的AG1109对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用,以探讨其酶动力学机制.方法:利用基因工程克隆、表达和纯化而获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP或[γ-32P]GTP的[32P]放射活度来检测.结果:重组人CK2是一种Ca2+、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致.AG1109对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,其IC50为9.7μmol/L,抑制作用稍大于已知的CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3).AG1109对重组人CK2的动力学研究表明,它与GTP呈以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用.结论:AG1109是一种很强的重组人CK2抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便地筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点.
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大豆黄酮对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的:体外观察大豆黄酮对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及酶动力学分析以确定其抑制作用类型.方法:利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶,并测定大豆黄酮对酶的抑制作用及采用IC50结果的回归方程分析其动力学.结果:大豆黄酮能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50 =2.38 μmol/L),抑制作用明显强于已知的CK2抑制剂5,6-二氯-1-β-D-呋喃核糖苯并咪唑(DRB) 和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3).酶动力学分析表明,大豆黄酮与ATP(Ki=3.02μmol/L)及酪蛋白(Ki = 2.22μmol/L)均呈混合型抑制CK2的活性.结论:大豆黄酮是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂.
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1,8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析
目的观察1,8-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制,以寻找CK2的抑制剂.方法以重组人CK2全酶为分子靶点,检测不同浓度1,8-二羟蒽醌对CK2活性的影响.CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的[32P]放射活度来检测.结果重组人CK2与天然CK2的性质完全一致.1,8-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,半数抑制浓度(IC50)为23.90 μmol·L-1; 与ATP呈竞争性抑制CK2的活性, 抑制常数Ki值为16.08 μmol·L-1.结论 1,8-二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的抑制剂.
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C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响
目的 观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响.方法 将利用基因工程技术获得的重组人CK2α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值.结果 染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是27.95 μmol/L和2.38 μmol/L,作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺 (A3).结构效应分析表明:C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用.结论 染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂.
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三丁基锡对蛋白磷酸酶2A的抑制机制
目的：研究三丁基锡（TBT）对人羊膜FL细胞蛋白磷酸酶2A（PP2A）活力的抑制机制。方法 FL细胞经不同浓度TBT染毒1 h后，检测PP2A活力及PP2A组成亚基A、C、B55α和B56δ以及C亚基蛋白磷酸化和甲基化水平。结果与对照组比较，3、4、6μmol/L染毒FL细胞内PP2A活力均下降，差异有统计学意义（P<0.01）；6μmol/L TBT染毒组FL细胞内PP2A组成亚基A蛋白的表达下降，4、6μmol/L TBT染毒组B55α蛋白的表达及C蛋白甲基化水平均降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 TBT对FL细胞PP2A活力的抑制作用可能与其抑制B55α和A蛋白亚基表达，降低C亚基Leu309位点的甲基化水平有关。
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藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用
目的:观察体外藤黄菌素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型. 方法:利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基,并在体外等摩尔混合构成CK2全酶. 通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测藤黄菌素对酶的抑制作用及采用Line-weaver-Burk作图法分析其动力学. 结果:藤黄菌素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=0.86 μmol/L). 酶动力学分析表明,藤黄菌素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19 μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11 μmol/L). 结论:藤黄菌素是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂.
