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RNA干扰体外抑制肝癌细胞端粒逆转酶基因表达的研究
目的利用小片段干扰RNA(siRNA)在肝癌细胞内诱导RNA干扰(RNAi),抑制端粒逆转录酶(hTERT)基因表达,在体外进行RNAi对肝癌治疗的试验研究.方法构建针对hTERT基因的siRNA(siRNA-hTERT),转导入肝癌细胞7721,在瘤细胞内诱导RNAi,采用流式细胞分析、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫组化等技术检测siRNA处理前后细胞增殖及hTERT基因表达变化.结果 siRNA-hTERT对肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期中S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT基因的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,其蛋白表达由86.3%下调到46.6%.结论 RNAi在体外明显抑制了肝癌细胞中hTERT基因的表达和瘤细胞增殖.
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EPA诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及端粒酶活性调控机制研究
目的:探究二十碳五烯酸(Eicosa Pentaenoic Acid.EPA)对SMMC-7721人肝癌细胞的凋亡、端粒逆转录酶hTERT的调控作用及端粒酶表达活性的影响.方法:体外培养SMMC-7721人肝癌细胞,用不同浓度的EPA(0 μM、25 μM、50 μM、100 μM、200μM)作用于SMMC-7721肝癌细胞(24h、48h、72h)后,显微镜下观察其形态学变化;应用MTT法检测SMMC-7721肝癌细胞细胞增殖变化情况;Western-blot法检测hTERT、Bax、Bcl-2蛋白表达水平变化;Real Time-PCR检测hTERTmRNA的表达变化;ELISA法检测SMMC-7721肝癌细胞端粒酶活性的表达水平.结果:EPA可诱导肝癌细胞SMMC-7721发生细胞凋亡,具有明显的时间计量依赖关系.在此过程中Bcl-2蛋白表达的降低和Bax蛋白表达上调,同时端粒酶逆转录酶hTERT蛋白及其mRNA的表达水平和端粒酶活性均明显降低.结论:抑制端粒酶逆转录酶基因(hTERTmRNA)表达而抑制端粒酶的活性、诱导癌细胞凋亡,可能是EPA的抗癌作用机制之一.
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乳腺癌手术切缘的hTERT、Syk表达的初步研究
[目的]探讨乳腺癌及其切缘组织中hTERT、Syk表达及其与手术切缘的安全性关系.[方法]用SABC、SupervionTM二步免疫组化法分别检测40例乳腺癌标本及其周边上、下、内、外象限距癌肿1cm、2cm、3cm的切缘组织中hTERT、Syk表达.[结果]hTERT在乳腺癌组织中高表达,Syk在乳腺癌组织中低表达或不表达.免疫组化表明hTERT阳性表达在癌周3cm、2cm、1cm组织到癌组织之间呈现出逐渐增强的趋势(P＜0.001);而Syk的阳性表达从癌周远端到癌中心逐渐减弱(P＜0.001).各象限相同距离的hTERT和Syk阳性表达率无统计学意义(P＞0.05).距肿块3cm处是Syk,hTERT的分子边界.[结论]距离肿块3cm可定为乳腺癌安全切除的分子边界.
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hTERT在乳腺癌及其边缘组织中表达的临床意义
目的 探讨乳腺癌及其切缘组织中hTERT活性表达、存在的分子边界及其与手术切缘安全性的关系.方法 用SABC免疫组化法检测20例乳腺癌标本及其周边上、下、内、外象限距癌肿边缘1、2、3cm切缘组织中的hTERT活性表达.结果 20例患者癌组织和癌周不同距离(1、2、3cm)的组织内,hTERT阳性表达在癌周3、2、1cm的组织到癌组织之间呈现出逐渐增强的趋势(P＜0.001),各象限相同距离的hTERT阳性表达率差异不具统计学意义(P＞0.05).结论 (1)hTERT在乳腺癌肿瘤组织中高表达,乳腺癌在四周象限的切缘组织hTERT高表达范围均在3cm以内;(2)hTERT所表现出的趋势性差异表达提示在乳腺癌周围组织中存在着分子边界,距离肿块3cm可定为乳腺癌安全切除的分子边界.
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As2O3对人胃癌BGC-823细胞端粒酶的影响
目的 观察三氧化二砷(As2O3)对人胃癌BGC-823细胞端粒酶活性及端粒酶逆转录酶基因转录的影响.方法 用不同浓度的三氧化二砷作用于人胃癌BGC-823细胞,通过MTT法测定细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡变化;TRAP PCR ELISA方法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR半定量方法检测细胞端粒酶hTERT基因mRNA的转录水平.结果 三氧化二砷可明显抑制人胃癌BGC-823细胞的生长,诱导细胞发生凋亡,抑制作用随三氧化二砷浓度的升高及作用时间的延长而增强.细胞的端粒酶活性明显下降,细胞hTERT基因的转录表达显著抑制.BGC-823细胞端粒酶活性的下调与As2O3作用时间和浓度有关,呈现明显的时间-剂量效应关系.结论 As2O3能够抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖、促使细胞凋亡、抑制细胞的端粒酶活性.As2O3是一种良好的端粒酶抑制剂,在肿瘤的治疗中具有一定应用价值.
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hTERT mRNA在食管癌组织中的表达及意义
目的 研究凋亡调控基因hTERT mRNA在食管癌癌组织中的表达及意义.方法 采用RT-PCR检测52例食管癌组织、30例癌旁食管组织(距离肿瘤至少5 cm)和7例非食管癌黏膜组织中hTERT mRNA的表达情况.结果 hTERT mRNA在食管癌组织和癌旁食管组织中表达的阳性率明显高于非食管癌组织(P＜0.05),食管癌组织中的表达阳性率与癌旁食管组织的表达阳性率差异无统计学意义(P＞0.05);hTERT mRNA在食管癌组织中的表达与患者年龄、病理类型、分化程度、浸润程度、淋巴转移和临床分期无相关性(P＞0.05).结论 hTERT mRNA在食管癌组织中的表达可能是早期事件,检测hTERT mRNA的表达可能对食管癌的早期诊断及治疗具有指导意义.
