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线粒体乙醛脱氢酶-2文献资料
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荧光多聚酶链反应测定线粒体乙醛脱氢酶-2 Glu504Lys多态性
目的 建立一种荧光多聚酶链反应测定线粒体乙醛脱氢酶-2 Glu504Lys多态性的方法.方法 以水解探针技术(TaqMan)为基础,设计相应的引物和荧光探针,PCR反应的Mg2+浓度和探针浓度进行优化,同时对本方法的灵敏度和精密度进行了研究,通过PCR产物直接测序对准确度进行评价.结果 优化后的Mg2+和探针浓度分别为2.5 mmol/L和1.0 μmol/L,批内循环阈值(Ct)值的变异系数为1.38%(n=20),批间Ct值的变异系数为1.48%(n=20);在25 μl反应体系中,人基因组DNA在5.0×102～5.0×106 pg浓度范围内可以得到满意的结果.本法确定150份标本的基因型与PCR产物直接测序法比较,结果完全一致.结论 本方法快速、灵敏、可靠,适合于临床实验室和大规模测定线粒体乙醛脱氢酶-2Glu504Lys多态性.
关键词： 聚合酶链反应 线粒体乙醛脱氢酶-2 多态性 单核苷酸
