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详述手术切除后局部应用丝裂霉素C联合羊膜、角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的临床分析
目的:探讨翼状胬肉的临床治疗效果.方法:将我院收治的翼状胬肉患者随机分为治疗组和对照组,分别行术后局部应用丝裂霉素C联合羊膜、角膜缘干细胞移植,和自体角膜缘干细胞移植.结果:治疗组术后复发2例(3只眼),对照组术后复发10例(14只眼).结论:恰当的手术治疗翼状胬肉,可减少术后复发率.
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手术治疗真菌性角膜炎
目的:观察角膜板层切除加羊膜移植及结膜瓣覆盖术治疗真菌性角膜炎的临床效果.方法切除病灶区角膜板层,将氟康唑注射液内浸泡半小时的保存或新鲜羊膜双层或多层覆盖角膜植床,做上方桥状或蒂状球结膜瓣覆盖羊膜及病灶区并缝合固定1月,后在表面麻醉下剪断结膜蒂,并拆线.结果32眼角膜炎症全部控制,羊膜吸收或部分吸收,角结膜愈合.6月～3年随访,视力数指～4.0者10眼,4.2 ～4.5者22眼.所有移植的结膜瓣均为半透明愈合,血管萎缩,大部分角膜表面凹陷明显变浅.结论本手术方法为一种治疗真菌性角膜炎的有效方法之一.
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胎膜早破的临床护理心得
在临产前胎膜破裂称为胎膜早破.其发生率占分娩总数的2.7％-17％.1 胎膜早破的原因(1)创伤;妊娠晚期性生活.(2)下生殖道感染.引起胎膜炎,使胎膜局部张力下降导致破裂;(3)羊膜囊内压力升高,常见于双胎妊娠、羊水过多、巨大儿;(4)营养因素,如缺乏维生素C、锌及铜,可使胎膜张力下降而破裂;
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封闭式缝合羊膜空间自血留置在眼表疾病的应用
眼表外伤和疾病导致眼表层破坏,轻者表现为眼部的刺激症状明显,重者表现为持续性难以忍受的疼痛.病理表现:角膜上皮缺损、上皮糜烂、溃疡,甚至形成角膜瘘等影响视力现象,且久治不愈.对这类严重的眼表疾病,虽然有传统治疗以手术行眼表层切除的方法,但再生的上皮却表观为结膜化,难以获得稳定的角膜表层[1、2].我们应用羊膜封闭式缝合在眼表球结膜上,羊膜与角膜的间隙注入自血形成血凝块(简称血膜)利用血膜治疗眼表疾病,获得了满意的疗效.从1996年10月至2002年4月共治疗92例(92只眼)报告如下:
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人羊膜间充质干细胞分离培养的研究进展
人羊膜间充质于细胞(hAMSCs)是羊膜基质中具有多分化潜能的干细胞.hAMSCs来源广泛,取材方便,不涉及伦理限制,对供体无任何损伤,具有低免疫原性且增殖能力强等优势,被认为是目前间充质干细胞的佳来源,备受再生医学研究者的青睐.本文就hAMSCs的采集,分离纯化,培养,分化潜能等做一综述.
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羊膜联合角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的临床研究
目的：探讨羊膜联合角膜缘干细胞移植治疗眼表疾病的临床效果。方法：收治眼表疾病患者280例，均为单眼患者，根据患者的入院顺序分为观察组和对照组，每组140例。观察组给予羊膜联合角膜缘干细胞移植术治疗，对照组给予自体角膜缘上皮移植术治疗。结果：观察组角膜上皮修复时间、复发情况以及视力提高情况均明显优于对照组(P＜0.05)。结论：羊膜联合角膜缘干细胞移植术治疗眼表疾病可以提高临床治疗的有效率，缩短患者角膜上皮的修复时间，减少复发情况的发生，有效改善患者的视力。
关键词： 羊膜 角膜缘干细胞移植治疗 眼表疾病 角膜上皮修复时间 -
小梁切除联合羊膜移植治疗原发性青光眼临床研究
目的：观察小梁切除联合新鲜羊膜移植治疗原发性青光眼疗效评价。方法：34例48眼原发性闭角型青光眼；18例26眼原发性开角型青光眼施行小梁切除联合结膜瓣下及巩膜瓣下新鲜羊膜移植术，术后随访8～21个月，平均15.7个月。结果：49例71眼术后眼压均控制在正常范围之内，眼压控制成功率95.95%；术后所有病例视力均有不同程度提高，视野损害均未见加深。结论：新鲜羊膜可有效防止滤过泡的疤痕组织形成，保持滤过通畅，并能长期有效地保留功能性滤过泡。
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人羊膜治疗角膜溃疡与复发性胬肉的观察
目的:总结人羊膜治疗角膜渍疡与复发性胬肉的效果.方法:将11例角膜溃疡与15例复发性胬肉的资料、取材、手术方法、结果等作回顾性分析.结果:11例角膜溃疡术后15-30天愈合,无并发症,只留瘢痕影响视力,但无失明者.15例复发性胬肉术后8-14天全愈,随访无复发.结论:人羊膜取材便利,手术易行,无免疫排斥反应,无不良反应,有抗感染,促上皮生长,加速愈合的作用,是基层医院应用的好方法.
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人羊膜对皮肤创伤修复作用的研究进展
羊膜作为一种良好的生物介质已被广泛应用于外科创伤修复的研究.羊膜可以作为负载干细胞的载体,可以作为细胞因子的供体,也可以作为生物敷料,通过提供培养环境、释放细胞因子发挥作用.
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人羊膜间充质干细胞的超微结构观察
目的 观察羊膜间充质干细胞的超微结构.方法 分离和培养人羊膜间充质干细胞(AMSC),进行传代培养、扩增,在显微镜下观察细胞形态.对传代培养至第3代的hAMSC进行流式检测和鉴定细胞表型,并在透射和扫描电子显微镜下进行超微结构的观察.结果 人AMSC呈梭形和多角形；高表达表面标志CD44,CD90,CD105和波形蛋白,不表达CD34和CD45.扫描电镜下可见细胞表面有大量小泡和微绒毛突起；透射电镜下见到胞核较大,呈圆形或椭圆形；胞质内线粒体、粗面内质网和高尔基体等细胞器数量丰富,有较多小泡.结论 从羊膜中分离培养的细胞具有间充质干细胞的生物学特性的超微结构.丰富的粗面内质网和高尔基体,提示,AMSC具有产生大量分泌蛋白的功能,可能是羊膜间充质干细胞旁分泌作用的基础.
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羊膜预防硬膜外粘连的初步研究
目的:观察羊膜预防椎板切除术后硬膜外粘连的作用,寻求预防硬膜外粘连的有效材料和方法.方法:制备椎板切除模型兔60只,依术前随机分组,分别在硬膜外覆盖羊膜(AM组)、几丁糖膜(CHS组)、空白对照组不做任何覆盖(CON组).于术后2、4、8、12周每组分别处死5只动物,对标本做大体解剖及组织学观察.结果:CON组暴露的硬膜发生广泛粘连,硬膜外腔几乎消失;AM组和CHS组硬膜外瘢痕稀少,硬膜表面光滑,硬膜外形成潜在腔隙,维持了硬膜外的有效空间.不同时间段三组间粘连度评分以AM组低,CHS组次之,CON组高,组间比较有显著性差异(P＜0.05).结论:羊膜能预防硬膜外瘢痕向椎管内延伸,防止硬膜外粘连,是一种能有效预防硬膜外粘连的生物相容性材料;几丁糖膜亦显示了一定的预防硬膜外粘连作用.
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非穿透性小梁切除术联合羊膜植入治疗开角型青光眼
目的:评价非穿透性小梁切除术(non-penetrating tralbecular surgery,NPTS)联合羊膜植入治疗开角型青光眼的临床疗效.方法:将23例(30只眼)具备手术适应证的开角型青光眼分为两组.Ⅰ组14例20眼,行NPTS联合羊膜植入术;Ⅱ组9例10眼,行NPTS手术联合透明质酸生物胶植入术.术后对两组患者的视力、眼压、滤过泡及并发症进行对比观察.结果:术后1个月时,Ⅰ组与Ⅱ组的视力变化比较,无显著差异(P＞0.05);术后6、12、24月时,两组眼压值无显著差异(P＞0.05).Ⅰ组术后早期有少量前房积血2只眼,轻度房水闪光5只眼;Ⅱ组术后早期1只眼有轻度房水闪光.结论:NPTS联合羊膜植入术与NPTS联合透明质酸生物胶植入术分别用于治疗开角型青光眼,其术后降眼压效果均较好(P＞0.05).但前者的成本明显低于后者,可降低患者的经济负担.
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早期人胚羊膜共聚焦激光扫描光学切片及F-肌动蛋白的研究
目的建立羊膜组织共聚焦激光扫描显微镜光学切片的方法,探讨早期人胚羊膜细胞结构、分层及细胞骨架的空间结构. 方法采用共聚焦激光扫描光学切片和荧光探针双重标记技术对妊娠7～9周早期人胚羊膜进行形态观察、细胞F-肌动蛋白表达定量分析、细胞分层及厚度计算. 结果羊膜由两层不同类型的细胞组成,内层细胞为多边形扁平细胞,外层细胞为长梭形细胞;内层细胞胞质中的F-肌动蛋白表达量较低,外层细胞胞质中的F-肌动蛋白表达量明显高于内层细胞,两者差异有统计学意义;7～9周人胚羊膜厚度为30±2μm.其中,上皮层厚度为10μm±2μm,间充质层厚度为14μm±2μm. 结论 1.早期人胚羊膜由两层细胞即内层的上皮细胞层和外层的间充质细胞层组成,胞质中F-肌动蛋白的表达量间充质细胞高于上皮细胞;2.通过共聚焦激光扫描连续光学切片可以计算出羊膜各层的厚度;3.共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合FITC-鬼笔环肽和碘化丙啶双重标记技术是观察和分析羊膜组织细胞立体结构的良好方法.
关键词： 羊膜 共聚焦激光扫描显微镜 F-肌动蛋白 光学切片 人胚 -
体外定向诱导胚胎干细胞分化为表皮样干细胞的研究
目的探索体外定向诱导小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell, ES)分化为表皮样干细胞的条件,为胚胎干细胞来源的表皮样干细胞的临床应用,及ES细胞的定向分化机制的研究奠定基础. 方法采用与人羊膜共培养法对小鼠胚胎干细胞进行定向诱导.实验分3组:1.羊膜上皮面向上,铺布全孔底;2.羊膜上皮面向上,铺布半孔底;3. 以不加羊膜组为对照.用流式细胞仪、免疫组织化学技术对分化后的细胞进行鉴定. 结果共培养3～4 d后,在第1、2实验组中的人羊膜上皮面上,小鼠ES细胞形成表皮样干细胞集落,表达高水平的表皮干细胞特异标志物整合素β1、CK19和CK15.流式细胞仪检测结果显示:整合素β1、CK19和CK15阳性细胞比率均较对照组有显著差异(P＜0.01).而在第2实验组中无羊膜覆处,细胞贴壁生长,形成表皮样细胞单层,细胞呈多边形,排列紧密,表达整合素β1,仅见少数CK19和CK15阳性细胞散布于表皮样细胞之间.流式细胞仪检测结果显示:整合素β1阳性细胞率与对照组有显著差异(P＜0.01),而CK19和CK15阳性细胞率与对照组差异不明显. 结论人羊膜可诱导小鼠胚胎干细胞向表皮样细胞定向分化,并提示生长在羊膜上皮面上的细胞克隆可能是表皮样干细胞,而贴壁生长的细胞可能是表皮样细胞.
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羊膜接触镜输送人表皮干细胞重建兔角膜上皮
目的 利用眼表生物膜固定装置(BMFD)与羊膜(AM)制成接触镜,输送人表皮干细胞至角膜缘干细胞缺损(LSCD)的兔眼表,并评价其重建角膜上皮的效果.方法 制作去角膜上皮及角膜缘干细胞的雌性LSCD兔模型,分为3组:羊膜加人表皮干细胞移植组(n=20),将男性人表皮干细胞悬液注射到BMFD-AM接触镜(简称羊膜接触镜)与眼表之间;羊膜遮盖组(n=20),戴羊膜接触镜;对照组(n=20),单纯药物治疗.裂隙灯显微镜结合角膜荧光素钠染色观察并评价角膜修复情况.随访至角膜完全上皮化后,取角膜组织行病理学检查和免疫组织化学鉴定,PCR检测人Y-STR基因鉴定细胞来源.结果 羊膜加人表皮干细胞移植组角膜上皮修复快,平均(5.60±0.46)d达到完全上皮化,另外两组角膜上皮修复迟缓.羊膜遮盖组(9.25±0.51)d、对照组(12.45±0.65)d才完成角膜上皮化(P均<0.05).组织病理学示羊膜加人表皮干细胞移植组角膜上皮细胞形态接近正常,K3/K12(+)、Mucin 5AC(-)、K4(-).并可检测到人Y-STR基因.组织病理学示另外两组角膜上皮结膜化,K4(+)、Mucin 5AC(+)、K3/K12(-).结论 羊膜接触镜联合人表皮干细胞悬液注射能够重建LSCD兔角膜上皮.
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体外诱导人羊膜间充质细胞向子宫内膜上皮细胞分化
目的体外分离培养人羊膜间充质细胞（hAMCs），初步探讨其向子宫内膜上皮细胞分化的可行性。方法原代分离培养hAMCs和人子宫内膜细胞并鉴定，采用添加50%的子宫内膜细胞培养液，并补充生长因子（TGF?β10 ng/mL，EGF 10 ng/mL，PDGF?BB 10 ng/mL）和雌激素（17?β雌二醇1×10-7 mol/L）作为诱导剂培养第3代hAMCs，倒置显微镜下观察细胞形态的改变，应用细胞免疫组化检测分化的hAMCs是否表达上皮细胞特异标记角蛋白，并抽提诱导第8天细胞的mRNA，采用荧光定量PCR方法检测分化细胞的CK19基因水平。结果分离提纯得到的hAMCs可体外长期传代培养，表达间质细胞特异性波形蛋白及胚胎干细胞的表面标记蛋白Oct?3/4，流式检测CD29表达阳性；诱导后的部分细胞形态由成纤维样向上皮样细胞变化，细胞免疫组化染色表达角蛋白，荧光定量PCR检测实验组角蛋白CK19 mRNA表达量明显增加（P<0.05）。结论建立了人羊膜间充质细胞的分离培养方法， hAMCs在ESCs分泌和外源性因素诱导下可以向子宫内膜上皮细胞方向分化。
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羊膜粘连带综合征7例报告
羊膜粘连带综合征(amniotic band syndrome,ABS)是由于纤维带缠绕或粘连胎儿躯体某一部分引起胎儿变形、畸形或肢体截断的一组胎儿畸形.由于发病率低,常被误诊为无脑儿或多发畸形儿,现报告7例.
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体内移植羊膜对家兔肌腱损伤模型肌腱愈合的影响
研究的目的在于观察羊膜体内移植对肌腱损伤修复的影响.60只跟腱损伤家兔动物模型采用同体对照动物实验方法,大体观察伤口愈合、肌腱粘连及肌腱肥大情况,并分别于术后第2、4、6周等3个时间点取跟腱,HE染色观察损伤区域炎细胞浸润和成纤维细胞数量,免疫组化染色观察胶原纤维排列塑形状况,拉伸试验测定肌腱弹性模量.另取4只家兔不做肌腱切断术作为正常对照,在第0周测定肌腱弹性模量.全部实验动物皮肤切口在术后1周内基本愈合,未发生伤口感染情况.羊膜实验组跟腱粘连动物数量和肌腱断裂区域肥大程度低于阴性对照组(P＜0.05).术后第2周,两组动物炎症反应均达到高值,但羊膜实验组炎细胞(包括中性粒细胞和单核细胞)浸润数量低于阴性对照组(P＜0.05).两组实验动物样本中成纤维细胞数量和胶原纤维积累数量无明显差异(P＞0.05),但羊膜实验组成纤维细胞和胶原纤维排列更具有序性,尤其是在术后第6周,明显好于阴性对照组.术后第2周和第4周,羊膜实验组肌腱弹性模量均优于阴性对照组(P＜0.05).羊膜具有促进肌腱早期愈合和抗炎、抗粘连作用.
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米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响
目的 观察米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白 8(AQP8)表达的影响,探讨药物调控羊膜上皮细胞AQP8表达的可行性.方法 将体外培养的人羊膜上皮WISH细胞分为不同浓度米非司酮作用48 h组和单一浓度米非司酮作用不同时间组,前者培养基中分别加入终浓度为0.1、1、5、10、15μmol/L的米非司酮,培养48 h;后者培养基中加入终浓度为10 μmol/L的米非司酮,分别培养6、12、24、36、48 h,同时2组均设加入含0.01%二甲基亚砜(DMSO)完全培养液的对照组.采用免疫荧光细胞化学方法检测10 μmol/L米非司酮作用48 h后细胞AQP8蛋白的分布;RT-PCR和蛋白质印迹技术分别检测不同浓度米非司酮作用组和米非司酮作用不同时间组各组细胞AQP8 mRNA和蛋白的表达水平.结果 免疫荧光细胞化学检测显示,米非司酮作用后WISH细胞细胞质内及细胞膜上AQP8蛋白黄绿色荧光信号较对照组均明显减弱.在不同浓度米非司酮作用组中,除O.1 μmol/L 组外,其余各组细胞的 AQP8 mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱(均P
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Forskolin对人WISH细胞水通道蛋白8表达及分布的影响
目的 探究调控人羊膜上皮细胞水通道蛋白8(AQP8)表达的信号转导通路 方法 以腺苷酸环化酶激动剂Forskolin 处理体外培养的人羊膜上皮细胞株WISH 细胞,将WISH 细胞随机分为不同浓度Forskolin 作用24 h 组和单一浓度Forskolin 作用不同时间组.前者培养基中分别加入Forskolin 0(对照组)、5、10、20、40、100、200 μmol/L,培养24 h;后者培养基中加入Forskolin 100 μmol/L 后分别培养4、8、16、24、48 h.采用蛋白质印迹技术检测各组细胞AQP8 蛋白表达水平;RT-PCR 技术检测Forskolin 处理不同时间组细胞AQP8 mRNA 表达水平;免疫荧光细胞化学方法检测Forskolin 100 μmol/L 作用24 h 组细胞AQP8 蛋白的分布.结果 对照组WISH 细胞AQP8 蛋白表达水平为0.027± 0.003,AQP8 mRNA 表达水平为0.026 ± 0.003.不同浓度Forskolin 处理组中,除了5 μmol/L 组外,其余各组AQP8 蛋白表达水平均高于对照组(P ＜ 0.05),高峰值出现在100 μmol/L 组(0.157 ± 0.006).Forskolin 处理不同时间的各组WISH 细胞,其AQP8 mRNA 和蛋白的表达水平均高于对照组(P ＜ 0.05),AQP8 mRNA 表达水平在16 h组达峰值(0.087 ± 0.007),AQP8 蛋白表达水平在24 h 组达峰值(0.158 ± 0.007).免疫荧光细胞化学染色显示,Forskolin 100 μmol/L 作用24 h 组细胞膜上的黄绿色免疫荧光信号较对照组明显增强.结论 Forskolin 可上调WISH 细胞AQP8 mRNA 及蛋白表达水平,使细胞膜上AQP8 蛋白的分布增加,提示细胞内cAMP-蛋白激酶A 信号转导途径的激活在人羊膜上皮细胞AQP8 表达的调控中发挥重要作用.
