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米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白8表达的影响
目的 观察米非司酮对人羊膜上皮细胞水通道蛋白 8(AQP8)表达的影响,探讨药物调控羊膜上皮细胞AQP8表达的可行性.方法 将体外培养的人羊膜上皮WISH细胞分为不同浓度米非司酮作用48 h组和单一浓度米非司酮作用不同时间组,前者培养基中分别加入终浓度为0.1、1、5、10、15μmol/L的米非司酮,培养48 h;后者培养基中加入终浓度为10 μmol/L的米非司酮,分别培养6、12、24、36、48 h,同时2组均设加入含0.01%二甲基亚砜(DMSO)完全培养液的对照组.采用免疫荧光细胞化学方法检测10 μmol/L米非司酮作用48 h后细胞AQP8蛋白的分布;RT-PCR和蛋白质印迹技术分别检测不同浓度米非司酮作用组和米非司酮作用不同时间组各组细胞AQP8 mRNA和蛋白的表达水平.结果 免疫荧光细胞化学检测显示,米非司酮作用后WISH细胞细胞质内及细胞膜上AQP8蛋白黄绿色荧光信号较对照组均明显减弱.在不同浓度米非司酮作用组中,除O.1 μmol/L 组外,其余各组细胞的 AQP8 mRNA和蛋白表达水平分别与对照组相比均明显减弱(均P
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Forskolin对人WISH细胞水通道蛋白8表达及分布的影响
目的 探究调控人羊膜上皮细胞水通道蛋白8(AQP8)表达的信号转导通路 方法 以腺苷酸环化酶激动剂Forskolin 处理体外培养的人羊膜上皮细胞株WISH 细胞,将WISH 细胞随机分为不同浓度Forskolin 作用24 h 组和单一浓度Forskolin 作用不同时间组.前者培养基中分别加入Forskolin 0(对照组)、5、10、20、40、100、200 μmol/L,培养24 h;后者培养基中加入Forskolin 100 μmol/L 后分别培养4、8、16、24、48 h.采用蛋白质印迹技术检测各组细胞AQP8 蛋白表达水平;RT-PCR 技术检测Forskolin 处理不同时间组细胞AQP8 mRNA 表达水平;免疫荧光细胞化学方法检测Forskolin 100 μmol/L 作用24 h 组细胞AQP8 蛋白的分布.结果 对照组WISH 细胞AQP8 蛋白表达水平为0.027± 0.003,AQP8 mRNA 表达水平为0.026 ± 0.003.不同浓度Forskolin 处理组中,除了5 μmol/L 组外,其余各组AQP8 蛋白表达水平均高于对照组(P ＜ 0.05),高峰值出现在100 μmol/L 组(0.157 ± 0.006).Forskolin 处理不同时间的各组WISH 细胞,其AQP8 mRNA 和蛋白的表达水平均高于对照组(P ＜ 0.05),AQP8 mRNA 表达水平在16 h组达峰值(0.087 ± 0.007),AQP8 蛋白表达水平在24 h 组达峰值(0.158 ± 0.007).免疫荧光细胞化学染色显示,Forskolin 100 μmol/L 作用24 h 组细胞膜上的黄绿色免疫荧光信号较对照组明显增强.结论 Forskolin 可上调WISH 细胞AQP8 mRNA 及蛋白表达水平,使细胞膜上AQP8 蛋白的分布增加,提示细胞内cAMP-蛋白激酶A 信号转导途径的激活在人羊膜上皮细胞AQP8 表达的调控中发挥重要作用.
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水通道蛋白3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达变化及意义
目的 探讨水通道蛋白(AQP)3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达、分布及其在特发性羊水过多发病巾的作用.方法 2006年6月至2008年3月,选择在温州医学院附属第二医院产科住院并分娩的21例特发性羊水过多的足月产妇为研究组,同期分娩的30例羊水量正常的足月产妇为对照组.采用实时荧光定量PCR技术,检测两组产妇胎盘、胎膜中AQP3、9 mRNA的表达及分布,采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白.过氧化物酶(SP)连接法枪测两组产妇胎盘、胎膜中AQP3、9蛋白的表达及分布.结果 (1)两组产妇羊膜、绒毛膜、胎盘中均可检测到AQP3、9 mRNA的表达.AQP3、9主要表达于羊膜上皮细胞、绒毛膜滋养细胞、胎盘滋养细胞.(2)研究组羊膜上皮细胞AQP3、9 mRNA的表达分别为对照组的5.00倍和3.25倍,而研究组绒毛膜滋养细胞AQP3、9 mRNA的表达分别为对照组的2.03倍和2.08倍,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);但是研究组胎盘滋养细胞AQP3、9 mRNA的表达均明显低于对照组,差异也有统计学意义(P<0.01).(3)AQP3、9蛋白在研究组羊膜上皮细胞的表达强度为7.5±2.0、11.1±1.8,对照组为5.3 ±1.6、5.6±2.3,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);AQP3、9蛋白在研究组绒毛膜滋养细胞的表达强度为7.5±2.0、10.0±1.6,对照组为5.4±2.2、5.6±2.1,分别比较,差异也有统计学意义(P<0.05),但是AQP3、9蛋白在胎盘滋养细胞的表达强度(3.5±1.4、4.0 ±2.5)较对照组(5.6±1.3、7.1±2.9)明显下调(P<0.05).结论 AQP3、9在特发性羊水过多产妇胎盘和胎膜中的表达变化可能为羊水增加后的代偿性反应,其调节机制尚待进一步研究.
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原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中水通道蛋白8的表达
目的 探讨水通道蛋白8(AQP8)在原发性羊水过多产妇胎膜和胎盘组织中的表达.方法 收集2005年10月-2007年5月重庆医科大学附属第一医院和重庆市妇幼保健院行足月剖宫产分娩(孕37～40周)的原发性羊水过多产妇12例为羊水过多组,同期因社会因素行剖宫产分娩的正常产妇12例为对照组.采用RT-PCR技术检测两组产妇胎膜和胎盘组织中的AQP8 mRNA表达水平;采用免疫组化技术检测两组产妇胎膜和胎盘组织中的AQP8蛋白表达水平.结果 (1)羊水过多组羊膜、绒毛膜和胎盘组织中的AQP8 mRNA表达水平分别为0.78±0.13、0.58±0.10、0.86±0.15,对照组分别为0.39±0.07、0.45±0.09、0.34±0.09,羊水过多组各组织中AQPS mRNA表达水平均高于对照组,两组分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)羊水过多组羊膜、绒毛膜和胎盘组织中的AQP8蛋白表达水平分别为0.195±0.024、0.170±0.028、0.193±0.024,对照组分别为0.151±0.018、0.156±0.024、0.152±0.023,其中羊水过多组羊膜、胎盘组织中AQP8蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而羊水过多组绒毛膜组织中AQP8蛋白表达水平虽高于对照组,但两组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 原发性羊水过多产妇羊膜和胎盘组织中AQP8mRNA及蛋白的表达水平均显著高于正常产妇,提示AQP8在产妇羊水量的调节中发挥重要作用.
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羊水过多孕妇胎膜组织中水通道蛋白-1、3、8、9 mRNA的表达
目的 探讨水通道蛋白-1、3、8、9在羊水平衡分子机制中的可能作用.方法 收集足月选择性剖宫产分娩的羊水过多和正常孕妇的胎膜组织样本各5例,运用RT-PCR方法检测胎膜组织中水通道蛋白-1、3、8、9 mRNA的表达.结果 水通道蛋白-9 mRNA的表达水平在羊水过多组胎膜组织的水平(1.1403±0.0831)显著高于对照组(0.5903±0.1909)(P=0.002);水通道蛋白-1、3和8 mRNA在羊水过多组和对照组胎膜的表达差异无统计学意义(P=0.972,0.242,0.608).结论 水通道蛋白-9 mRNA在人羊水过多病例的胎膜组织表达显著升高,在维持羊水量及羊水成分的平衡中可能发挥重要作用.
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晕动病发病中水通道蛋白1的变化
目的 探讨小鼠晕动病发病过程中内耳水通道蛋白的变化.方法 多次旋转刺激后检测小鼠内耳中一系列水通道蛋白的mRNA水平；通过相关性分析观察内耳中水通道蛋白1的mRNA水平与个体晕反应指数之间的关系.通过内耳注射包含有水通道蛋白1的RNA干扰质粒的病毒,抑制内耳中水通道蛋白1的表达,观察其对小鼠晕反应指数的影响.结果 多次旋转刺激后,小鼠的晕反应指数逐渐下降；小鼠内耳中水通道蛋白1的mRNA水平明显增加；通过RNA干扰的方法局部抑制小鼠内耳中水通道蛋白1的表达,发现会增加小鼠的晕反应指数.结论 多次旋转刺激后,小鼠的晕反应指数的下降可能是缘于内耳中水通道蛋白1的表达增加.小鼠内耳中水通道蛋白1在晕动病的发生过程中起到重要作用.
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水通道蛋白在正常豚鼠中耳腔的表达及作用
目的 观察水通道蛋白(aquaporins,AQP)1、AQP4、AQP5在正常豚鼠中耳腔黏膜的表达和分布情况,探讨AQP1、AQP4、AQP5在豚鼠中耳液体转运和水平衡中的作用机制.方法 用逆转录聚合酶链反应、免疫印迹和免疫组织化学的方法观察正常豚鼠中耳腔黏膜AQP1、AQP4、AQP5的表达和分布情况.结果 AQP1、AQP4、AQP5的mRNA在正常豚鼠中耳腔黏膜内有确定表达,AQP1、AQP4蛋白在正常豚鼠中耳黏膜内有确定表达,中耳腔的扁平上皮、立方上皮、黏膜下层的毛细血管内皮和此层的纤维母细胞的胞浆中均有AQP1分布.结论 AQP1、AQP4、AQP5共同参与中耳腔的液体平衡过程,保持中耳腔正常情况下的无液体积聚状态.
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小鼠内耳水通道蛋白的定位及其意义
目的检测水通道蛋白(water channel protein; aquaporin, Aqp)亚型在小鼠内耳不同部位的分布和各亚型所在的部位。方法使用成年小鼠30只，经活体灌注，切取双侧颞骨，按石蜡包埋技术处理和切片。使用免疫组织化学方法标记确认小鼠内耳组织中水通道蛋白亚型1、3、4、5、7、9分布情况。结果 Aqp-1为1∶200和Aqp-3、7、9为1∶100的一抗浓度可以看到它们在内耳不同部位稳定、清晰的染色反应，但Aqp-4和5 使用1∶50甚至1∶30也未观察到染色。Aqp-1 在圆窗膜、螺旋韧带、内淋巴囊和内淋巴管、椭圆囊和球囊以及内耳血管壁等处被标记；Aqp-3 在螺旋韧带、前庭唇、内、外螺旋沟、基底膜和基底膜嵴、内淋巴囊和内淋巴管、膜半规管和椭圆囊、球囊斑等处显示荧光染色。Aqp-7在血管纹、基底膜、前庭膜、椭圆囊和球囊及其囊斑有反应染色，而Aqp-9在螺旋缘、前庭唇、内、外螺旋沟、前庭膜、膜半规管和球囊及其囊斑有较强染色。结论水通道蛋白亚型1、3、7、9广泛分布于小鼠内耳不同组织中，其分布部位和反应强弱存在差异，主要存在与内淋巴密切相关的组织结构中。
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兔实验性脊髓空洞前状态水通道蛋白4表达的变化
目的:探讨水通道蛋白4(aquaporin-4,AQP4)在实验性脊髓空洞前状态的表达变化.方法:56只新西兰白兔被随机分为高岭土(Kaolin)组(40只)、生理盐水组(8只)和假手术组(8只).经枕大池注入Kaolin建立新西兰白兔脊髓空洞症模型,注入后1,3,7,14,21 d用干湿重法测定脊髓含水量、用免疫组织化学、Western blot和RT-PCR技术检测脊髓空洞前状态脊髓含水量、AQP4及其mRNA表达变化.结果:Kaolin组动物于术后第3天脊髓含水量即有明显增加(68.35%±0.70%),第7天达到高峰(72.92%±0.86%),第21天稍有缓解(70.03%±0.77%),但仍高于对照组;AQP-4于术后第3天开始减弱[积分光密度(integral optical density,IOD)320.5±44.2],第7～14天达到低水平(IOD 258.7±26.5),到21天时回升(IOD 321.5±46.1),但仍低于对照组;而AQP4mRNA表达变化趋势与其蛋白含量变化相一致.线性回归分析发现, AQP4及其mRNA表达变化与脊髓含水量之间存在负相关(r=-0.769,P＜0.01;r=-0.955,P＜0.01).结论:脊髓空洞前状态中出现了AQP4及其mRNA表达减少,可能参与了缺血、缺氧性脊髓水肿的形成.
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水通道蛋白与多囊卵巢综合征发病机制的研究进展
水通道蛋白(aquaporins,AQPs)是一组跨膜蛋白,有13种AQPs(AQP0～AQP12)在哺乳动物生殖系统中表达,分为水通道亚族、水-甘油通道亚族和超级水通道亚族.AQPs能够通过细胞膜运输水,而水-甘油通道亚族除对水的通透性外,对甘油和尿素等中性小分子也有通透性.多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者中,至少存在3种AQPs表达异常,主要包括AQP7、AQP8和AQP9表达障碍.PCOS患者中AQPs表达水平的改变及其功能障碍,可能影响卵泡形成和卵泡闭锁,并且与脂肪代谢有密切的联系.AQP1～4,AQP8和AQP9与PCOS卵泡生长关系密切,而AQP7及AQP9的下调在PCOS脂肪代谢紊乱的发病机制中起着重要作用.通过了解AQPs的功能和表达与PCOS症状之间的关系,探索潜在的、新的以AQPs为导向的PCOS治疗方法.
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水通道蛋白及其与子宫内膜癌的关系
水通道蛋白(AQPs)是一组小分子跨膜蛋白家族,对水分子有高度通透性,表达谱广泛,且参与细胞的水代谢.子宫内膜癌是妇科发病率高的恶性肿瘤之一,常见的病理类型是子宫内膜腺癌,其发病与长期雌激素的刺激相关,但子宫内膜腺癌发生发展的分子机制尚未完全阐明.AQPs可通过促进细胞生长、血管新生、细胞迁移几个方面影响肿瘤的生长和发展,AQPs在子宫内膜癌中表达上调,参与子宫内膜癌血管新生,并与子宫内膜癌分期分级等临床病理特征存在相关性.
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视神经脊髓炎的临床及磁共振成像研究
目的 探讨视神经脊髓炎临床与MRI表现特点.方法 回顾分析20例经临床或实验室检查明确诊断的视神经脊髓炎患者临床资料,总结其发病特点.结果 视神经脊髓炎多以急性脊髓炎(13例)或视神经炎(7例)为首发症状,复发病程(18例)多见.临床主要表现为急性视力减退、视野呈向心性缩小或复视(7例),以及病灶平面以下运动、感觉和自主神经功能紊乱(13例).部分患者眼底呈急性视神经炎、视乳头水肿(3例),球后视神经炎(5例)或视神经萎缩(4例)变化;视觉诱发电位呈现潜伏期延长、波幅下降和波形分化不良(7例).脑脊液和血清免疫球蛋白lgG阳性检出率分别为44.44%(8/18)和50.00%(6/12),寡克隆区带阳性率为27.78%(5/18).8例患者头部MRI检查显示存在颅内病灶,分布于下丘脑、脑桥、中脑、第四脑室周围.结论 实验室检查有助于视神经脊髓炎的诊断与鉴别诊断,第三、第四脑室周围和脑桥等病灶分布具有特征性,与脑内水通道蛋白4高表达区域相一致.
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原发性干燥综合征合并视神经脊髓炎谱系疾病临床分析及文献复习
目的 探讨原发性干燥综合征合并视神经脊髓炎谱系疾病的临床表现、实验室检查和MRI特点,以及治疗和预后.方法 回顾分析4例诊断明确的原发性干燥综合征合并视神经脊髓炎谱系疾病患者的临床资料,分析其发病特点.结果 临床症状与体征主要表现为原发性干燥综合征合并复发性纵向延伸性脊髓炎或球后视神经炎,实验室检查血清抗干燥综合征抗原A抗体(4例)、抗干燥综合征抗原B抗体(3例)、视神经脊髓炎特异性抗水通道蛋白4(AQP4)抗体(3例)阳性.头部MRI病灶主要分布于双侧基底节和大脑脚皮质脊髓柬走行区、双侧额叶、右侧皮质脊髓束区、双侧侧脑室旁和脑干；脊髓MRI病灶以累及颈胸髓为主,≥3个椎体节段(3例)或累及延髓(2例).急性期以大剂量糖皮质激素冲击和序贯口服泼尼松,并辅助免疫抑制药治疗为主.结论 原发性干燥综合征和视神经脊髓炎均为自身免疫性疾病,二者关系密切.对于视神经脊髓炎和(或)视神经脊髓炎谱系疾病患者建议行血清自身抗体和抗AQP4抗体检测,抗AQP4抗体阳性者复发率高,预后不良.建议辅助应用免疫抑制药,以减少复发.
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水通道蛋白4抗体阳性多发性硬化临床特点分析
目的 分析水通道蛋白4(AQP4)抗体阳性多发性硬化的临床特征.方法 共18例多发性硬化患者,均符合M cDonald诊断标准(2010年版),分为AQP4抗体阳性组(5例)和AQP4抗体阴性组(1 3例),并门诊随访.结果 5例AQP4抗体阳性多发性硬化患者,男性2例、女性3例,中位发病年龄43岁,中位病程4个月;脊髓病变和视神经受累常见;MRI显示脑组织广泛多发性长T1、长T2异常信号伴颈胸髓长T1、长T2异常信号(3/5例)或单纯颈胸髓多发性长T1、长T2异常信号(2/5例);脑脊液IgG指数(4/4例)、24 h IgG鞘内合成率(3/4例)升高,寡克隆区带阳性(3/4例);血清抗核抗体阳性(2/5例)或合并干燥综合征(1/5例).结论 AQP4抗体阳性多发性硬化有其特异性,发病机制可能与经典多发性硬化不同,在临床诊断与治疗时需加以重视并区别处理.
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七氟醚对失血性休克猪肠黏膜水通道蛋白8表达的影响
目的 评价七氟醚对失血性休克猪肠黏膜水通道蛋白8(AQP8)表达的影响.方法 健康成年巴马小型猪24头,雌雄不拘,体重22～ 25 kg,采用随机数字表法分为假手术组(S组)、失血性休克组(HS组)和七氟醚组(PS组),每组8头.S组麻醉后经股动脉和颈内静脉置管;HS组麻醉置管后制备大鼠失血性休克模型;PS组于制备失血性休克模型成功后吸入2％七氟醚30 min.于麻醉前(T0)、失血性休克后0.5、1、1.5、2、3和4h(T1-6)时取颈内静脉血样,采用ELISA法检测血清D-乳酸、肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)的浓度;失血性休克4h后放血处死动物取肠组织制作病理切片,观察病理学结果;称湿重和干重,计算肠水含量,采用ELISA法检测肠黏膜AQP8的表达.结果 与S组比较,HS组和PS组血清D-乳酸、I-FABP浓度、肠黏膜AQP8表达水平及肠水含量升高(P＜0.05);与HS组比较,PS组上述指标降低(P＜0.05).PS组肠组织病理学损伤较HS组明显减轻.结论 七氟醚可通过抑制AQP8表达降低肠黏膜水肿,从而减轻失血性休克猪肠黏膜损伤.
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水通道蛋白在肝纤维化及肝硬化进程中的作用
肝硬化是各种慢性肝脏疾病的终病理结果,多种细胞、细胞因子和微小RNA参与肝纤维化、肝硬化的发生和进展.肝纤维化与病理性血管生成相互依存、促进,肝纤维化动脉毛细血管增殖的病理生理机制尚不清楚,水通道蛋白不仅转运水而且促使新生血管形成.简述了水通道蛋白在肝胆系统表达及其生理生化特征,总结了水通道蛋白在肝纤维化、肝硬化进程中的作用,以期为水通道蛋白成为肝纤维化、肝硬化治疗靶点提供新的思路和指导.
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水通道蛋白在消化系统肿瘤中的表达及其意义
水通道蛋白广泛存在于生物体内的各组织部位,影响机体水代谢过程,并参与恶性肿瘤的生长、浸润和转移.随着分子生物学技术的进步,水通道蛋白相关基础研究已较为深入和成熟.本文对水通道蛋白在消化系统肿瘤中的表达及其意义进行概述,以期利用相关研究成果,为阐释消化系统肿瘤的发病机制以及寻找新的治疗途径提供可能的思路.
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水通道蛋白与结直肠疾病
水通道蛋白(AQPs)是一组对水有高度选择性的膜通道蛋白家族,在许多上皮和内皮细胞广泛表达.目前已发现13种哺乳动物AQPs家族成员(AQPO～12),且组织学分布明确.近研究发现AQPs与许多生理过程以及人类疾病关系密切,本文就AQPs表达异常与常见结直肠疾病包括炎症性肠病、结直肠肿瘤、便秘的关系作一综述.
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水通道蛋白调控腹泻型肠易激综合征的研究进展
分布于肠黏膜中的水通道蛋白（AQPs）作为介导水液跨膜转运的重要因子，在肠道细胞内外环境稳态的维持和肠神经功能调控中具有重要作用。腹泻型肠易激综合征（IBS-D）是临床上较为常见的功能性胃肠病之一。近年来有关 AQPs 在 IBS-D 中作用的研究并不少见，但其究竟如何在 IBS-D 中发挥保护或损伤作用仍不甚明确。本文就 AQPs 调控 IBS-D 的相关研究进展作一综述。
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水通道蛋白4基因敲除对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的影响
目的:评价水通道蛋白4(AQP4)在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用.方法:采用博莱霉素3 mg/kg气管内注射诱导AQP4基因敲除(AQP4-/-)小鼠发生肺纤维化,以野生型小鼠为对照,造模后第3、7、14、28天处死动物,检测肺系数、血清转化生长因子-β1 (TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平和肺组织羟脯氨酸含量,作肺组织病理切片行HE染色和Masson染色观察肺部炎症及纤维化程度.结果:造模第14天,野生型小鼠肺系数增高为野生型对照小鼠的1.9倍(12.69±6.05与6.80±0.82,q=4.204,P＜0.05);AQP4-/-小鼠肺系数增高为AQP4-/-对照小鼠的2.3倍(14.05±5.82与6.05±0.58,q=5.172,P＜0.01),但与野生型小鼠比较,AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中肺系数增高无明显影响(P＞0.05).小鼠肺组织羟脯氨酸含量随造模时间逐步增加,造模第28天,野生型小鼠肺组织羟脯氨酸含量增加为对照的1.55倍[(0.85±0.22) μg/mg与(0.55±0.14) μg/mg,q=4.313,P＜0.05];AQP4-/-小鼠肺组织羟脯氨酸含量增加为对照的1.4倍[(0.84±0.13) μg/mg与(0.60±0.14)μg/mg,q=4.595,P＜0.05],但与野生型小鼠比较,AQP4基因敲除对小鼠肺纤维化过程中肺组织羟脯氨酸含量增加无明显影响(P＞0.05).造模后,小鼠血清TGF-β1、TNF-α水平有增加趋势,但这两个指标在野生型和AQP4-/-小鼠间差别无统计学意义(均P＞0.05).肺组织病理学检查结果表明AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺部炎症和纤维化无明显影响.结论:AQP4基因敲除对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化未产生明显影响.
