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肺炎支原体脂质相关膜蛋白刺激 THP-1细胞表达血红素氧合酶-1
目的：研究肺炎支原体（ Mycoplasma pneumonia， Mp）脂质相关膜蛋白（ lipid-associated membrane proteins ， LAMPs）对人单核细胞系THP-1表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase 1，HO-1）的影响。方法体外培养THP-1细胞，根据实验目的加入不同浓度LAMPs作用不同时间，并设阳性和阴性对照。收集各处理组细胞，LDH漏出实验检测LAMPs对THP-1细胞的毒性，实时荧光反转录PCR检测 HO-1 mRNA 表达， Western blot 检测 HO-1蛋白表达，比色法检测 HO-1酶活性。结果LAMPs浓度为10μg／ml时，LDH漏出率明显增高。 LAMPs刺激THP-1细胞9 h后HO-1 mRNA表达水平高；HO-1蛋白表达水平与LAMPs刺激呈剂量依赖性和时间依赖性，其中5．0μg／ml LAMPs刺激表达的HO-1蛋白水平高；LAMPs刺激12 h 后的HO-1蛋白浓度高。 LAMPs刺激THP-1细胞后，随着HO-1表达水平的增高，其酶活性亦显著增强。结论 Mp LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1，并可上调其酶活性。
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脂质相关膜蛋白体外诱导hBD-2基因表达的研究
目的 探讨解脲支原体(UU)的LAMPs对β-防御素表达分泌量与作用时间的研究.方法 应用LAMPs体外诱导绒毛膜及胎盘组织hBD-2基因表达,RT-PCR检测hBD-2 mRMA表达.结果 不同浓度的LAMPs均能明显诱导绒毛膜及胎盘组织产生hBD-2,相同浓度的LAMPS刺激绒毛膜及胎盘组织12 h,24 h绒毛膜及胎盘组织的HBD-2 mRNA表达量不同.结论 绒毛膜及胎盘组织H3D-2 mRNA表达与LAMPs呈明显的剂量依赖性;24 h内绒毛膜及胎盘组织的HBD-2 mRNA表达呈现出时间依赖性.
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肺炎支原体LAMPs经PI3K/Nrf2诱导人单核细胞表达HO-1
目的 探讨肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane protein,LAMPs)对人单核细胞表达血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的影响,并探讨可能的调控机制.方法 体外培养THP-1细胞,用不同浓度的LAMPs作用后,分别采用realtime-PCR和Western blot检测HO-1 mRNA和蛋白的表达.同时采用不同浓度的放线菌素D(ActD)和放线菌酮(CHX)预处理细胞,观察其对HO-1表达的影响,以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平;提取LAMPs作用前后的核蛋白,凝胶迁移率实验检测Nrf2的核转位、Western blot检测Akt的磷酸化情况;同时采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察其对LAMPs诱导Nrf2核转位及HO-1表达的影响;后采用siRNA干扰Nrf2表达,以证实Nrf2是否参与调控HO-1表达.结果 (1)0～5 μg/mL LAMPs能以剂量依赖性方式诱导THP-1表达HO-1 mRNA和蛋白;(2)5 μg/mL LAMPs能诱导THP-1细胞Akt磷酸化,并能增强其DNA结合活性;PI3K抑制剂LY294002处理后,可明显抑制LAMPs诱导的HO-1表达和Nrf2核转位;(3)干扰Nrf2表达后,可明显下调LAMPs诱导THP-1细胞表达HO-1.结论 LAMPs可诱导THP-1细胞表达HO-1,其机制可能与PI3K/Nrf2通路有关.
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支原体脂质相关膜蛋白的研究进展
支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁、呈高度多形性、能通过滤菌器、可在无细胞的培养基中生长繁殖的小原核细胞型微生物.支原体具有基因组小,G+C含量低,呈高度多形性,生物合成及代谢能力有限等特征.
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CD14对生殖支原体LAMPs激活NF-κB的影响
目的：探讨CD14在生殖支原体（Mg）脂质相关膜蛋白（LAMPs）激活NF-κB中作用。方法 THP-1细胞分别加入人血清和CD14抗体孵育，提取对数期Mg的LAMPs刺激，ELISA法检测其NF-κBp65水平；采用共转染技术和sCD14预孵育LAMPs ，刺激 Hela细胞，双荧光素酶报告基因分析CD14在LAMPs激活NF-κB中的作用。结果人血清上调LAMPs诱导THP-1细胞激活 NF-κBp65；CD14中和抗体抑制 LAMPs 诱导 THP-1细胞激活 NF-κBp65；mCD14和 sCD14上调LAMPs诱导 Hela细胞激活NF-κB。结论 CD14上调生殖支原体LAMPs激活NF-κB。
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肺炎支原体脂质相关膜蛋白在动脉粥样硬化发生发展中的作用机制
目的 研究肺炎支原体脂质相关膜蛋白对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响,初步探讨肺炎支原体引起动脉粥样硬化的机制.方法 用ELISA检测肺炎支原体脂质相关膜蛋白诱导体外培养的巨噬细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6的含量;用流式细胞术检测脂质相关膜蛋白诱导巨噬细胞的凋亡率;Western blot方法检测经脂质相关膜蛋白作用的巨噬细胞NF-κB的激活和NF-κB抑制剂吡咯啉烷二甲基硫脲对巨噬细胞分泌细胞因子和诱导巨噬细胞凋亡的影响.结果 脂质相关膜蛋白能促进巨噬细胞分泌高水平的TNF-α、IL-1β 和IL-6和发生凋亡;并能使NF-κB从细胞浆中转位到细胞核内;吡咯啉烷二甲基硫脲能显著抑制巨噬细胞NF-κB 的激活,且能抑制脂质相关膜蛋白诱导的巨噬细胞分泌细胞因子和发生凋亡.结论 肺炎支原体脂质相关膜蛋白可通过激活NF-κB诱导巨噬细胞分泌前炎症细胞因子和促进凋亡,可能在动脉粥样硬化的发病中起重要作用.
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生殖支原体脂质相关膜蛋白通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶
目的：探讨生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶-1(HO-1)的分子机制。方法用0.5~5μg/mL生殖支原体LAMPs处理体外培养的胎盘滋养层细胞4~12 h,采用实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子-2(Nrf2)的核转位；比色法观察HO-1的酶活性；2ˊ,7ˊ-二氯二氢荧光黄二乙酸酯( H2 DCFDA)检测活性氧产生。分别采用酪氨酸激酶c-Src抑制剂PP1、活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸( NAC)和Nrf2 siRNA干预,观察HO-1的表达情况。结果生殖支原体LAMPs能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达,上调其酶活性。同时,LAMPs也能诱导其产生活性氧,并促使Nrf2核转位。 PP1和NAC预处理后,可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量。采用Nrf2 siRNA转染后,HO-1的表达显著减少。结论生殖支原体LAMPs通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导滋养层细胞表达HO-1。
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人血清对生殖支原体LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α的影响
目的探讨人血清对生殖支原体( Mg)脂质相关膜蛋白( LAMPs)诱导TNF-α表达的影响。方法提取对数期Mg的LAMPs,分别加入脂蛋白脂肪酶,蛋白酶K及人血清预处理后,刺激THP-1细胞,ELISA法测定其TNF-α水平。结果 Mg LAMPs为一混合蛋白,其活性成分为脂质成分,能激活THP-1细胞表达大量TNF-α,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。人血清能上调LAMPs诱导的TNF-α水平,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。结论人血清上调Mg LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α。
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解脲脲原体LAMPs激活核因子κB诱导人单核细胞表达诱导型一氧化氮合酶和前炎症因子
目的 分析解脲脲原体(Uu)的脂质相关膜蛋白(LAMPs)对人单核细胞(THP-1)表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和前炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的影响. 方法 用Uu的LAMPs刺激人单核细胞后,Western blot法检测核因子κB(NF-κB)的激活和iNOS基因的表达,格氏试剂测定NO,ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-6的含量. 结果 Uu LAMPs通过激活NF-κB诱导人单核细胞表达iNOS,且能以时间和剂量依赖方式刺激人单核细胞产生NO,诱导表达前炎症因子(IL-1β、TNF-α和IL-6);NF-κB抑制剂PDTC可抑制NF-κB的激活、iNOS的表达及NO的产生. 结论 Uu LAMPs通过激活NF-κB途径诱导人单核细胞表达iNOS和前炎症因子,可能是产生某些疾病的一个重要的因素.
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肺炎支原体脂质相关膜蛋白促进树突状细胞成熟
肺炎支原体(Mycoplasma pneumoniae,Mp)是社区获得性肺炎主要的病原体[1].在儿童和青少年中,10％ ～ 30％的社区获得性肺炎是由Mp感染所致[2-3].Mp缺乏细胞壁,其所引起的一系列炎症反应很大程度上是其细胞膜上的脂蛋白,又称脂质相关膜蛋白(lipid-associated membrane proteins,LAMP)所致[1,4-5].研究已证实LAMP是Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)的配体(包括TLR2/1和TLR2/6).LAMP与单核巨噬细胞表面的TLR结合后,可通过髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)和肿瘤坏死因子受体相关因子6,激活核因子κB和激活蛋白1,诱导单核巨噬细胞合成分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1 beta,IL-1β)和IL-6等炎症细胞因子及产生活性氧和一氧化氮等[6-7],促进炎症反应.树突状细胞(dendritic cell,DC)表面可表达TLR[8],LAMP与DC表面的TLR结合后,对DC的功能有何影响?目前尚无相关的文献报道.本实验观察了Mp对DC吞噬功能及膜分子表达的影响.
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生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1从而负调控细胞因子分泌
目的 观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶1(HO-1),从而影响细胞因子的产生.方法 体外培养胎盘滋养层细胞,用0.5～5μg/mL LAMP作用4～12h.实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子2(Nrf2)的核转位;2',7'-二氯二氢荧光黄二乙酸酯(H2DCFDA)检测活性氧(ROS)产生;采用N-乙酰半胱氨酸(NAC)或Nrf2 siRNA处理滋养层细胞,观察其对HO-1表达的影响.采用HO-1的激动剂钴原卟啉(CoPP),抑制剂锌原卟啉(ZnPP)或HO-1 siRNA处理细胞,ELISA检测处理前后LAMP对诱导肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)分泌的影响.结果 LAMP能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白表达,并能诱导其产生ROS以及促进Nrf2核转位.ROS抑制剂NAC预处理后,可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量.同时,Nrf2siRNA转染后,HO-1表达显著减少.采用ZnPP处理滋养层细胞,或RNA干扰HO-1表达后,可促进LAMP诱导滋养层细胞分泌TNF-α和IL-1β,而CoPP处理能进一步降低TNF-α和IL-1β水平.结论 LAMP能通过ROS/Nrf2诱导滋养层细胞表达HO-1,从而抑制细胞因子的过度分泌.
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生殖支原体脂质相关膜蛋白诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2
目的 观察生殖支原体脂质相关膜蛋白(LAMP)能否诱导宫颈上皮细胞表达人β防御素2(hBD-2),并探讨其可能的调控机制.方法 体外培养End1/E6E7人宫颈上皮细胞,用不同浓度的LAMP作用细胞48 h,反转录PCR检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot法检测hBD-2蛋白的表达;用Toll样受体2(TLR2)和TLR6中和抗体孵育End1/E6E7细胞,并用TLR2、TLR6和MyD88负显性突变体转染细胞,以明确ⅡR2、TLR6和MyD88在介导hBD-2表达中的作用;Western blot法检测核因子κB(NF-κB) p65亚基核转位情况,电泳迁移率实验(EMSA)分析LAMP处理前后NF-κB的DNA结合活性;采用NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)处理,观察对hBD-2表达的影响.结果 生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2mRNA和蛋白.TLR2和TLR6中和抗体以及其负显性突变体转染后,能降低hBD-2表达;MyD88负显性突变体也能显著抑制LAMP诱导的hBD-2表达.Western blot结果显示,LAMP处理后可诱导p65核转位,并能增强NF-κB的DNA结合活性.而NF-κB抑制剂PDTC处理后,hBD-2表达降低.结论 生殖支原体LAMP可诱导End1/E6E7细胞表达hBD-2,可能受TLR2、TLR6/MyD88/NF-κB调控.
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支原体脂质相关膜蛋白致病机制的研究进展
支原体是一种没有细胞壁的原核细胞型微生物。支原体膜表面含有丰富的脂质相关膜蛋白（ Lipid-associated membrane proteins， LAMPs），LAMPs在支原体对宿主的致病过程中起着重要的作用。了解支原体LAMPs致病机制可为开发针对性疫苗和有效药物提供依据。根据近年来发表的文献，对支原体LAMPs的结构特点及其致病机制的研究进展予以综述。
