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哮喘小鼠气道上皮TSLP表达及激活DCs加重气道炎症的研究
目的 研究支气管哮喘小鼠气道上皮中胸腺间质淋巴细胞生成素(TSLP)表达,探讨其对哮喘小鼠肺部炎症的影响.方法 BALB/c小鼠分为生理盐水对照组、哮喘模型组和TSLP中和抗体干预组.通过气道反应性和肺组织病理学评价哮喘模型;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5和IL13的含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定肺组织中TSLP mRNA的表达;免疫组化及Western blot法测定肺组织中TSLP蛋白的表达;流式细胞术检测BALF中树突状细胞(OCs)表面CD40、CD80、CD86的表达水平.结果 小鼠气道反应性增高和肺组织病理学检查结果均符合哮喘的典型表现证实造模成功;哮喘组BALF中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著高于正常组(P<0.05),且TSLP与其成正相关;与正常对照组相比,哮喘组气道上皮TSLPmRNA和蛋白高表达,两组间差异有统计学意义(P<0.05);哮喘组BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显高于正常组(P<0.05).TSLP中和抗体干预后,BALF中DCs表面CD40、CD80、CD86表达明显减低,并进一步减少IL-4、IL-5和IL-13的表达.结论 哮喘气道上皮中TSLP表达增高,TSLP通过上调DCs表面CD40、CD80、CD86的表达,激活DCs诱导CD4~+T细胞向Th2分化发育,与加重哮喘的气道炎症有关;TSLP抗体干预可阻断DCs的活化,减少Th2细胞因子的分泌,这些因素可能与减轻哮喘炎症反应有关,为哮喘治疗途径提供新的思路.
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哮喘患者治疗前后气道上皮TSLP表达及炎性因子的相关研究
目的 通过对支气管哮喘患者治疗前后TSLP及炎性因子的变化情况的对比研究,分析探讨支气管哮喘的作用机制.方法 使用抗炎药物布地奈德对于支气管哮喘患者进行治疗,试验前后对患者TSLP的表达活性、含量及血浆中IL-4,IL-5,IL-13的含量,以及外周血单个核细胞(PBMCs)中CD40、CD80、CD86的表达水平进行检测,采用健康人数据作为对照组,并对检测结果进行统计对比,研究其变化及其之间关系.结果 患者经治疗哮喘症状明显减轻,TSLP表达活性以及炎性因子的表达水平都显著减少,与对照组相比更为接近.结论 布地奈德等抗炎药物可有效治疗支气管哮喘,降低TSLP等的表达水平,而该类指标与支气管哮喘的加重密切相关.
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TSLP在肺癌组织中的表达及其与调节性T细胞的相关性
目的:探讨胸腺基质淋巴生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在肺癌组织中的表达及其与临床指标以及局部调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)数量的相关性.方法:分别采用Q-RT-PCR和免疫组织化学染色方法检测TSLP在不同病变类型的肺组织中的表达,分析TSLP在不同病变肺组织中的表达差异;并运用免疫组化方法检测TSLP蛋白在不同病理类型的肺癌组织中的表达,分析TSLP表达与临床病理特征之间的相关性;采用免疫组化法检测肺癌组织中的Tregs细胞.分析TSLP表达与肿瘤局部Tregs细胞数量之间的关系.结果:TSLP基因在肺癌组织、癌旁组织、非肿瘤肺上皮均表达阳性,且表达差异无统计学意义;TSLP蛋白表达于胞浆中,其在肺癌组织中的阳性表达率(69.57%)显著高于肺的良性病变(13.33%)和非肿瘤肺上皮(30.00%).且TSLP表达与肿瘤大小和淋巴结转移有关;TSLP表达阳性的患者其肿瘤局部浸润的调节性T细胞数量明显高于TSLP阴性组(P<0.05).结论:TSLP蛋白在肺癌组织中表达增加,且与肿瘤局部调节性T细胞数量增多有关,这提示TSLP可能是通过诱导Tregs增加在肺癌免疫耐受中发挥作用.
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真菌TLR配体增强TSLP表达及在获得性免疫中作用
胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)是过敏反应及炎症反应中至关重要的细胞因子.TSLP可以通过TLRs和NF-kB信号通路,建立固有免疫和获得性之间的潜在联系.文中将探讨真菌TLR配体在TSLP表达中的作用,以及TSLP在获得性免疫中所扮演的角色,为抗真菌感染新药的研发提供靶点.
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MUC5B 和 TSLP 在新疆乌鲁木齐市维吾尔族和汉族变应性鼻炎患者鼻粘膜的差异性表达
目的：观察新疆乌鲁木齐市维吾尔族和汉族变应性鼻炎患者鼻粘膜 MUC5B 和 TSLP 的差异表达，探讨其对变应性鼻炎（AR）发生和发展的作用。方法：选择变应性鼻炎患者40例（维吾尔族和汉族各20例），设定为 AR 组，以及同期非变应性鼻炎患者20例（维吾尔族和汉族各10例），设定为对照组，取下鼻甲粘膜采用免疫组化染色观察 MUC5B 和 TSLP 的表达水平。结果：与对照组比较，AR 组的 MUC5B 水平明显降低，而 TSLP水平明显升高，有统计学差异（P ＜0．05）。维吾尔族和汉族人 TSLP 水平差异不大（P ＞0．05），但维吾尔族人 MUC5B 水平明显高于汉族人（P ＜0．05）。结论：MUC5B 低表达、TSLP 高表达的人群易患变应性鼻炎，汉族人的 MUC5B 表达水平低于维吾尔族，这可能是新疆汉族人变应性鼻炎较高发的原因之一。
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胸腺基质淋巴细胞生成素对小鼠巨噬细胞抗原提呈功能及炎性分泌功能的影响
目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制.方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激.采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ、CD86的表达;采用实时定量PCR以及ELISA方法检测小鼠巨噬细胞内以及培养上清液炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达.结果:与野生型对照组比较,野生型实验组小鼠巨噬细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达明显升高,炎症因子MCP-1和TNF-α表达及分泌均增高,IL-10表达及分泌无明显变化;与TSLPR基因敲除对照组相比较,TSLPR基因敲除小鼠巨噬细胞经TSLP刺激后细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达及炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达及分泌均无明显变化;与野生型实验组相比较,TSLPR基因敲除可明显抑制TSLP诱导的小鼠巨噬细胞抗原提呈分子增加以及炎症因子表达.结论:TSLP可通过与TSLPR结合促进小鼠巨噬细胞活化,增加巨噬细胞抗原递呈能力,产生炎症因子,促使小鼠巨噬细胞向促炎巨噬细胞表型M1型转化.
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抗T SL P全人源单链抗体筛选与初步鉴定
目的：表达TSLP蛋白，从全人源单链抗体文库中筛选得到抗TSLP单链抗体。方法：扩增TSLP cDNA，将目的基因与表达载体pET101／D-TOPO连接，转化大肠杆菌BL21，IPTG诱导表达并对表达产物进行纯化鉴定。以生物素化的TSLP蛋白为抗原从前期构建的全人源抗体文库中采用噬菌体展示技术筛选抗TSLP全人源单链抗体（ scFv ）。结果：扩增的TSLP cDNA片段大小为423 bp左右。表达的TSLP蛋白大小为26 kD左右，Dot blot及Western blot鉴定显示表达的蛋白正确，为TSLP目的蛋白。以生物素化的TSLP蛋白为抗原，采用噬菌体展示技术对全人源抗体文库进行3轮富集，通过ELISA检测有35％的scFv与TSLP有结合特性。将筛选的与TSLP结合能力强的单链抗体进行了Western blot鉴定和测序。结论：成功筛选到抗TSLP全人源单链抗体。
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TSLP促进肌成纤维细胞向哮喘小鼠气道募集
目的：探讨胸腺基质淋巴细胞生成素（ Thymic stromal lymphopoietin，TSLP)与慢性哮喘小鼠气道组织中浸润的肌成纤维细胞的关系。方法：将12只BALB/c小鼠随机分为4组：生理盐水组、屋尘螨（ House dust mite，HDM)组、anti-TSLP组、同型对照组。激光共聚焦检测气道组织中出现的肌成纤维细胞。 ELISA法检测肺泡灌洗液中TSLP、TGF-β1、IL-25和IL-33的表达水平。结果：拮抗TSLP可显著抑制HDM持续暴露导致的气道结构改变，减少肌成纤维细胞向哮喘小鼠气道组织募集。 Anti-TSLP组小鼠BALF中TSLP、TGF-β1和IL-33蛋白水平也较同型对照组明显降低（ P值均<0．05)。结论：TSLP促进肌成纤维细胞向慢性哮喘小鼠气道募集是其参与气道重塑的主要机制之一。
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胸腺基质淋巴细胞生成素在慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者预后评价中的应用
目的：探讨胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在慢性阻塞性肺疾病急性发作期（AECOPD）患者预后评价中的应用效果情况。方法：分析60例 AECOPD 患者和60例非 AECOPD 患者临床资料，分为 AECOPD组和非 AECOPD 组。观察两组患者治疗前后 PaO2、PaCO2、白细胞计数、PCT、CPR 和 TSLP。结果：AECOPD 组患者治疗前 PaO2、白细胞计数均低于非 AECOPD 组，PCT、CPR 和 TSLP 均高于非 AECOPD 组，治疗后 AECOPD组 TSLP 高于非 AECOPD 组，差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论：TSLP 和 AECOPD 发展有着密切的关系，对于指导临床治疗提供了可靠的理论依据。
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麻黄-甘草药对抑制Th2型变应性接触性皮炎的作用及机制探讨
目的 研究麻黄-甘草药对对Th2型变应性接触性皮炎(Allergic contact dermatitis,ACD)的影响及机制.方法 采用不同浓度异硫氰酸荧光素(FITC)诱导BALB/c小鼠建立Th2型ACD模型及诱导初期ACD模型.HE染色观察小鼠耳组织病理学变化,测量小鼠耳肿胀,ELISA法检测小鼠耳组织Th2细胞因子水平及胸腺基质淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)蛋白水平,用qPCR检测小鼠耳组织TSLP mRNA水平,Poly(I∶C)和TNF-α联合刺激HaCaT细胞,检测细胞分泌的TSLP蛋白水平.结果 Th2型ACD模型中,与模型组小鼠比较,麻黄-甘草2.34 g/kg和7.02 g/kg组均明显抑制小鼠耳肿胀,减少耳组织炎性细胞浸润;麻黄-甘草2个剂量组均显著降低耳匀浆中IL-4水平,麻黄-甘草7.02 g/kg组明显降低IL-13水平.诱导初期Th2型ACD模型中,与模型组比较,麻黄-甘草药对显著降低耳匀浆TSLP的基因及蛋白表达,体外麻黄-甘草药对及其主要单体成分同样抑制TSLP的分泌.结论 麻黄-甘草药对具有抑制过敏性炎症的作用,其作用机制可能是通过减少TSLP的分泌.
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南蛇藤素对哮喘小鼠TSLP介导的Th2优势免疫干预的研究
目的 观察南蛇藤素对小鼠哮喘模型胸腺基质淋巴生成素(TSLP)介导的气道炎症的影响及机制.方法 24只SPF级BALB/c雌性小鼠随机分成4组.哮喘组、甲强龙组及南蛇藤素组分别予OVA致敏,然后腹腔注射等体积药物(分别为生理盐水、甲强龙及南蛇藤素),再予以雾化吸入1%OVA激发.对照组使用等剂量生理盐水.末次激发24h后,检测各组小鼠血清总IgE及TSLP含量,支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-13水平,HE染色肺组织病理学检测炎症浸润.结果 南蛇藤素组小鼠哮喘表现较哮喘组明显改善;其血清总IgE、TSLP含量及BALF中IL-4、IL-13水平均低于哮喘组(P<0.05);且小鼠肺组织气道炎症明显减轻,但与甲强龙组无异(P>0.05).结论 南蛇藤素组可以通过抑制哮喘小鼠TSLP介导的Th2优势免疫改善其临床症状.
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TNF-α和TSLP在干眼症患者结膜上皮细胞和泪液中的表达水平及意义
目的 通过检测干眼症(DES)患者结膜上皮细胞和泪液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)的表达,初步探讨TNF-α和TSLP在DES发病的机制中的作用.方法 分别选取2012年5月至2014年12月在我院眼科就诊的干眼症患者45例,经眼科体检未见异常且无全身免疫性疾病的健康志愿者45例,分成DES组及健康对照组,采集两组结膜上皮细胞并利用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF-α和TSLP的表达水平;采集两组泪液并利用ELISA法检测泪液中TNF-α、TSLP表达水平.结果 与健康对照组相比,DES组结膜上皮细胞中TNF-α、TSLP表达明显强于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);与健康对照组相比,DES组泪液中TNF-α和TSLP表达明显高于健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 TNF-α和TSLP有可能参与了干眼症的发病过程,具体机制有待进一步探讨.
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过敏性疾病关键启动因子在人角质形成细胞中表达的适宜刺激方法探索
目的：研究不同刺激条件对人角质形成细胞 HaCaT细胞中 TSLP、IL-33表达水平的影响，探讨过敏性疾病中关键启动因子 TSLP、IL-33体外表达细胞模型的佳刺激方法。方法应用角质形成细胞无血清培养液（K-SFM）体外培养 HaCaT 细胞，给予不同刺激剂，筛选出明显促进 HaCaT细胞中 TSLP 和 IL-33表达的刺激剂。进而考察单独与联合刺激剂时的量效关系，后对选出的刺激剂进行时效关系考察。TSLP 和 IL-33表达水平采用 ELISA 和免疫荧光法检测。结果（1）Poly（I：C）与 TNF-α两种刺激剂单独使用时均能明显刺激 HaCaT 细胞分泌 TSLP 和 IL-33，其余刺激剂在本实验浓度范围内未见明显差异。（2）Poly（I：C）100 mg· L －1与 TNF-α20μg·L －1联合刺激对 HaCaT 细胞表达 TSLP和 IL-33的促进作用为明显。（3）对 Poly（I：C）100 mg· L －1与 TNF-α20μg·L －1联合刺激 HaCaT 细胞的时效关系考察发现，刺激12 h HaCaT 细胞中 TSLP 和 IL-33的表达水平高。结论不同刺激剂和刺激时间对体外刺激 HaCaT细胞表达细胞因子 TSLP 和 IL-33的效应不同，其中以 Poly （I：C）100 mg·L －1与 TNF-α20μg·L －1联合刺激 HaCaT 细胞12 h 后，TSLP 和 IL-33的表达水平升高为明显。该结果为过敏性疾病的病理机制及药物作用研究提供了合适的方法。
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变应性疾病启动因子TSLP的研究进展
变应性疾病的发病率在全世界范围内呈逐年增高趋势,给患者造成了严重的思想压力和经济负担,因此,防治变应性疾病具有重要的临床意义.新研究表明由上皮细胞分泌的胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在变应性疾病中发挥着重要的作用,能激活树突状细胞来介导Th2型炎症反应.本文主要通过TSLP及其受体(TSLPR)的特性,以及TSLP与变应性疾病发病机制的关系两个方面进行综述.
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TSLP-OX40信号通路对哮喘小鼠气道重塑的影响及地塞米松的干预作用
目的 探讨TSLP-OX40信号通路对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响及地塞米松的干预作用.方法 SPF级BALB/C雌性小鼠30只,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组10只.采取卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;检测肺泡灌洗液中细胞分类计数;HE染色观察炎症细胞浸润;支气管壁厚度及平滑肌厚度测定;Western blot检测肺组织TSLP蛋白、OX40蛋白的表达.结果 通过HE染色观察哮喘组气道炎症浸润明显;哮喘组小鼠支气管壁厚度及平滑肌厚度较对照组增加(P<0.05),地塞米松组支气管壁厚度与平滑肌厚度低于哮喘组(P<0.05).哮喘组小鼠肺组织TSLP蛋白与OX40蛋白的表达高于对照组(P<0.05),地塞米松组TSLP蛋白与OX40蛋白表达较哮喘组下降(P<0.05).结论 TSLP-OX40信号通路的活化促进了哮喘小鼠气道重塑的发生,地塞米松可能通过抑制TSLP-OX40信号通路的活化从而治疗哮喘.
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穴位贴敷诱发的接触性皮炎中胸腺基质淋巴细胞生成素与树突状细胞相关性研究
目的 观察穴位贴敷诱发的接触性皮炎中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)与树突状细胞(DCs)表达相关性,探讨穴位贴敷诱发的接触性皮炎皮肤免疫调节机制.方法 选取接受穴位贴敷治疗后出现接触性皮炎的哮喘及变应性鼻炎患者共15例,通过观察其正常皮肤与皮炎局部皮肤组织中TSLP及DCs特异性标志CDllc的表达进行分析.结果 正常皮肤中TSLP、CDllc表达数量均较少,分布部位均涉及表皮层、真皮层.皮炎处TSLP、CDllc表达数量均较正常皮肤显著增加,分布部位均涉及表皮层、坏死组织内及真皮层,其中以真皮层血管周围表达为主.结论 TSLP与DCs共同参与穴位贴敷诱发的接触性皮炎,两者密切相关,表达数量同向升高,分布部位具有高度一致性.
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正常C57BL/6J小鼠器官组织中胸腺间质淋巴细胞生成素的表达
目的 观察正常小鼠各种器官组织中胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的表达.方法 利用Real-time PCR、免疫荧光法检测正常C57BL/6J小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠、胸腺、阴道中TSLP的表达.结果 心、肝、脾、肺、肾、肠、胸腺、阴道中均有TSLP表达,其中心、肝、肾、阴道表达较高,肠道表达低(P＜0.01).结论 TSLP在正常C57BL/6J小鼠许多器官组织中均有表达,但以心、肝、肾、阴道黏膜中表达较高.
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Toll样受体3在呼吸道合胞病毒诱导气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素中的作用
目的:探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染的大鼠气道上皮细胞表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)增高与Toll样受体3(TLR3)及TLR4的关系.方法:设计并合成了针对大鼠TLR3和TLR4基因的siRNA,以具有永生化特征的大鼠气道上皮细胞株RTECs(rat tracheae epithelial cells)为细胞模型,通过转染siTLR3及siTLB4至RTECs并下调其TLR3或TLR4的表达.随后观察这些经过siRNA预处理的RTECs在感染RSV后是否仍有高表达TSLP的能力.结果:Real time PCR检测结果显示,与RSV组(4.447±0.764)相比,siTLR3+RSV组TSLP表达明显降低(1.050±0.245),而siTLR4+RSV组TSLP表达无明显改变(3.066±0.585).n=4,P<0.05.结论:RSV感染的大鼠气道上皮细胞表达TSLP的增高与TLR3相关,为进一步研究RSV感染在哮喘发病中的作用机制奠定了基础.
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感染斯氏狸殖吸虫大鼠IL-4、IL-6、TSLP、TGF-β1水平检测
目的 研究斯氏狸殖吸虫感染引起的SD大鼠Th2免疫反应产生的细胞因子IL-4、IL-6、TSLP、TGF-β1水平,探寻寄生虫感染所致大鼠细胞免疫反应情况.方法 用斯氏狸殖吸虫囊蚴感染SD大鼠5只,于感染后16周对其血清进行IL-4、IL-6、TSLP、TGF-β1的EHSA检测.结果IL-4、TSLP、TGF-β1无显著变化,分别为0.34 pg/ml、8.69 pg/ml、2 06681.86 pg/ml(P ＞0.05),IL-6显著升高到40.45 pg/ml,具有统计学意义(P＜0.05).结论 感染SD大鼠Th2免疫反应活化,IL-6表达显著上调.
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融合蛋白mTSLPR-Ig的表达、纯化及其鉴定
目的:构建含小鼠TSLPR胞外段与小鼠Ig Fe段融合基因的腺病毒表达载体(Ad-mTSLPR-Ig),体外表达、纯化并鉴定可溶性融合蛋白mTSLPR-Ig.方法:运用PCR方法从小鼠胸腺cDNA文库中扩增mTSLPR胞外段基因,构建并鉴定mTSLPR胞外段与小鼠Ig Fc段融合基因的腺病毒表达载体(Ad-mTSLPR-Ig);将Ad-TSLPR-mIg转染COS-7细胞,收集细胞上清液;采用双抗体ELISA夹心法检测上清中融合蛋白表达;经蛋白A亲和层析,制备纯化可溶性融合蛋白mTSL-PR-Ig.结果:经测序证实,所构建表达载体的目的基因片段mTSLPR-Ig序列正确,成功包装出腺病毒表达载体Ad-mTSL-PR-Ig; ELISA法检测到上清中融合蛋白mTSLPR-Ig的表达;通过亲和层析法获得纯化的融合蛋白,经Western blot鉴定融合蛋白表达无误.结论:成功获得可溶性融合蛋白mTSLPR-Ig,为进一步研究其生物学特性奠定基础.
