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维生素E琥珀酸酯诱导人白血病细胞凋亡的发生
本研究选择两株人白血病细胞Raji(人单核细胞白血病细胞株)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞株),体外比较观察了VE和VES对细胞的生长抑制作用及其与诱发细胞凋亡的关系.检测指标及结果如下:(1)维生素E和VES诱导细胞凋亡的形态学观察.倒置显微镜下观察维生素E和VES作用72 h后的Raji细胞;制备单细胞层涂片,4℃固定、Hoechst 33258避光染色后,荧光显微镜观察.倒置显微镜下,VES组细胞透亮性下降,并见颗粒、碎片,台盼蓝染色大多为阳性.荧光显微镜下,对照培养细胞的胞核大多数大小一致、染色均匀,VES处理组细胞可见随作用剂量增加而逐渐增多的凋亡细胞核.维生素E处理组的上述改变较相同剂量VES组轻.(2)维生素E和VES对细胞的生长抑制作用.Raji.jurkat细胞分装于24孔培养板,设维生素E组(5、10、20μg/mL)、VES组(5、10、20μg/mL),空白对照组、乙醇对照组、丁二酸组,台盼蓝排除法5 d计数.维生素E和VES对Raji、Jurkat细胞的生长均具有程度不一的抑制作用,维生素E对Jurkat细胞的抑制作用较弱,而Raji细胞对维生素E和VES的反应更为敏感,20μg/mL的VES在24h的抑制率达到30%,72 h抑制率为100%,并表现出时间效应和剂量效应的关系.(3)流式细胞仪检测维生素E和VES诱导细胞凋亡.
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人单核细胞对煤焦沥青烟提取物诱导BEAS-2B细胞TRAF2mRNA表达的影响
目的 探讨人单核细胞(THP-1)对煤焦沥青烟提取物(CTPE)诱导BEAS-2B细胞肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)mRNA表达的影响.方法 构建THP-1细胞和BEAS-2B细胞的共培养模型,用终浓度3μg/mL的CTPE处理共培养模型,细胞培养至第9代时加入肿瘤坏死因子-α(TNF-α)中和抗体和C-Jun氨基端激酶(JNK)抑制剂SP600125,继续培养至第15代(cc15),设立共培养模型CC15组、TNF-α中和抗体组、JNK激酶抑制剂SP600125组,同代培养的BEAS-2B细胞为对照组,用Real-time PCR方法检测各组细胞中TRAF2 mRNA的相对表达水平.结果 与CC10组相比,TNF-α中和抗体对共培养细胞作用不同时间时TRAF2 mRNA的相对表达量均降低(P <0.001),作用48 h时TRAF2 mRNA相对表达水平达到低(0.19 ±0.02).SP600125抑制剂作用共培养细胞不同时间时c-Jun mRNA的相对表达水平与CC10组相比差异均有统计学意义(P <0.001),36 h组表达水平低(0.03-±0.02).TNF-α中和抗体组和SP600125抑制剂组TRAF2 mRNA相对表达水平(分别为1.73 ±0.04和1.88 ±0.05)均高于对照组(1.07±0.06),低于CC15组(2.23±0.09),差异有统计学意义(P<0.05).结论 THP-1可通过TNF-α上调了CTPE诱导的BEAS-2B细胞中TRAF2 mRNA的表达水平,TRAF2和AP-1之间可能存在负反馈作用.
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2005-2010年北京市立克次体病流行病学特征分析
立克次体(Rickettsia)是一类严格细胞内寄生的原核细胞型微生物,人类通过节肢动物人虱、鼠蚤、蜱或螨的叮咬而感染立克次体.近几年,恙虫病、人粒细胞无形体病等立克次体病在我国部分地区发病呈上升趋势,目前我国至少存在10余种立克次体病,其中包括流行性斑疹伤寒、地方性斑疹伤寒、恙虫病、北亚蜱传斑点热、黑龙江蜱传斑点热、内蒙古蜱传斑点热、Q热、人单核细胞埃立克体病、人粒细胞埃立克体病、人粒细胞无形体病,以及巴尔通体病等疾病[1-3].为了解北京市立克次体病的发病趋势及流行规律,为合理制订防控措施提供科学依据,笔者对2005 -2010年北京市恙虫病、斑疹伤寒和人粒细胞无形体病等3种立克次体病病例的流行病学特征进行分析,现报告如下.
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查菲埃立克体表面抗原P120蛋白基因的克隆与表达
查菲埃立克体(Ehrlichia chaffeensis)是人单核细胞埃立克体病(human mononcytic ehrlichiosis, HME)的病原体,已证实我国存在该病原。血清学分析是目前诊断HME及其流行病学调查的主要方法。但由于该病原体为严格胞内寄生菌,难以通过细胞培养制备大量抗原去满足临床HME的血清学诊断和流行病学调查的需要。
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雷公藤内酯醇对人树突状细胞分化成熟的抑制
雷公藤内酯醇是雷公藤提取物中生物活性强的物质.其免疫抑制功能主要是通过抑制T细胞的活性[1],包括抑制T细胞的激活和细胞因子的基因转录以及一些转录因子和信号转导通路调节因子的表达等.本研究以人单核细胞衍生的树突状细胞(monocyte-derived dendritic cells,moDC)为研究对象,探讨雷公藤内酯醇对DC的体外分化和成熟过程的影响.
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埃立克体病
埃立克体病(Ehrlichiosis)是埃立克体感染引起的人畜共患的新发现传染病,由蜱叮咬传播,主要表现为发热、血小板和白细胞减少.人埃立克体病(HE)分腺热埃立克体病(Sennetsu 热)、人单核细胞埃立克体病(human monoctyic ehrlichiosis,HME)和人粒细胞埃立克体病(human granulocytic ehrlichiosis,HGE)3种.至2000年,全球确诊病例超过1 000例[1].本文对该病作一综述.
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福建西北林区人单核细胞埃立克体病分子流行病学调查研究
[摘要]目的 了解福建西北林区人单核细胞埃立克体病的存在情况.方法 评价以查菲埃立克体16S rRNA基因序列高变区构建引物进行的半套式PCR的敏感性和特异性,并用此种半套式PCR技术检测从福建武夷山市和宁化县采集的蜱类、野生动物内脏和血液及人群血液标本中的查菲埃立克体DNA,对有代表性的阳性标本的扩增产物进行克隆和序列测定,并与GenBank中注册的核苷酸序列进行同源性比较.
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MPO及Ox-HDL可能通过调节单核细胞 NLRP3表达影响IL-1β的产生
目的:观察不稳定型心绞痛患者外周血单核细胞MPO和NLRP3表达水平,并分析其相关性。观察MPO及ox-HDL对人单核细胞NLRP3、IL-1β的调节作用。
方法:本研究入选120例受试者,其中不稳定型心绞痛患者80例(UA组),均为近一次胸痛发作12 h以内入院的患者[平均胸痛时间为(7.13±1.91) h]。按性别和年龄匹配入选正常健康人群40例(对照组)。在入院时即刻经肘静脉采外周血,用梯度离心法,分离单核细胞。用流式细胞技术检测外周血单核细胞MPO及NLRP3表达水平,并用ELISA法检测血浆IL-1β水平。用MPO、HDL及ox-HDL处理THP-1单核细胞24 h后,用RT-PCR及Western blot检测细胞NLRP3及其下游caspase-1和IL-1β的表达水平。用特异性siRNA敲减THP-1单核细胞NLRP3后,再用MPO,HDL及ox-HDL处理细胞,观察NRP3下游分子caspase-1和IL-1β的表达水平。 -
对不明原因发热者要考虑到人粒细胞无形体病的诊断
立克次体病是由各种立克次体感染导致的人兽共患自然疫源性疾病.立克次体是革兰阴性胞内寄生菌,生物学特征介于病毒和细菌之间,在动物宿主包括啮齿动物如鼠类和家畜等贮存宿主体内繁殖,传播途径主要是由节肢动物蜱、螨、蚤、虱等媒介的叮咬或暴露,以及气溶胶方式进行传播.传统的立克次体病包括斑疹伤寒、恙虫病、斑点热、战壕热、Q热,其主要致病机制是病原体侵染血管内皮细胞导致小血管炎和血管周围炎.近年来世界范围内新发立克次体病不断出现,如人粒细胞无形体病及人单核细胞埃立克体病等.
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齐墩果酸体外对感染HIV的人单核细胞的抗病毒作用
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233 钩果草提取物SteiHap69对LPS刺激的初级人单核细胞中TNF-α合成的抑制
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黄芪注射液对人单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇外流的影响
目的 观察黄芪注射液是否对人外周血单核细胞源性泡沫细胞内胆固醇外流产生作用和影响,从机体胆固醇逆转运(RCT)的角度探讨黄芪的调脂机制和抗动脉粥样硬化的作用.方法 采用密度梯度离心法和塑料吸附法从人外周血中分离出单核细胞,以50 nmol/L佛渡酯(PMA)刺激48 h使之转化为巨噬细胞.细胞分为对照组与实验组,以黄芪注射液干预后分别测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)与蛋白(Pro)含量的变化,观察黄芪注射液对细胞内TC/Pro比影响的量效关系和时效关系.结果 成功建立人单核细胞源性泡沫细胞模型.经不同浓度黄芪注射液作用后,细胞中TC/Pro随黄芪注射液浓度的增加而呈剂量依赖性降低,细胞泡沫化程度也随着药物浓度的升高而降低(P<0.01),且在药物浓度一定的情况下,细胞中TC/Pro随黄芪注射液处理时间的延长而呈时间依赖性降低(P<0.01).结论 黄芪注射液通过降低细胞内TC含量,一定程度上减轻巨噬细胞的泡沫化程度,推测可能与其抑制巨噬细胞上SR-B1受体功能从而抑制细胞对胆固醇摄取,或是通过增强巨噬细胞上ABCA1转运体的功能而促进了细胞内胆固醇的外流有关,或者是两者共同作用的结果.
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二甲双胍对LPS诱导THP1细胞所产生的相关炎症因子的影响
目的:通过反转录聚合酶链反应(RT PCR)技术,检测在二甲双胍(Met)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的阻断剂复合物 C(compound C)干预下,脂多糖(LPS)诱导的人单核细胞(THP 1)相关炎症因子白介素1β(IL 1β)、肿瘤坏死因子(TNF α)基因水平的表达,探讨 Met 的抗炎作用及抗炎机制。方法体外培养人单核细胞,并分为对照组,LPS 组(1μg/mL LPS),Met 组(Met 5 mmol/L+ LPS 1μg/mL),复合物C组(Met 5 mmol/L+ LPS 1μg/mL+compound C 10μmol/L)分别孵育6 h后,提取细胞进行检测。台盼蓝染色镜下计数观察细胞存活率。RT PCR检测细胞炎症因子 IL 1β、TNF α的表达水平。结果 Met在干预6 h后,可降低 LPS所诱导的THP 1细胞的炎症因子IL 1β、TNF α的基因表达。Met组炎症因子IL 1β、TNF α的分泌显著低于 LPS组(P<0.01)。复合物C组炎症因子 IL 1β、TNF α较 Met组表达增加(P<0.01)。结论 Met干预6 h可降低 LPS诱导的THP 1细胞相关炎症因子 IL 1β、TNF α的基因表达,提示二甲双胍在基因水平上有一定的抗炎作用,且其抗炎途径与激活 AMPK有关。
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PMA及IL4序贯诱导人单核细胞系成为M2型巨噬细胞
目的 将人单核细胞系U937及THP-1体外诱导得到M2型巨噬细胞.方法 将U937及THP-1细胞以phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA)及白介素-4(interleukin,IL-4)序贯诱导,采用qRT-PCR法及ELISA法检测M1/M2标志物mRNA及蛋白表达.结果 PMA使两种细胞转化为巨噬细胞,IL-4序贯诱导使巨噬细胞伸出伪足,序贯诱导后巨噬细胞M1表型标志物(IL-1 β、IL-6、IL-12及iNOS)mRNA表达水平下调,M2表型标志物(IL-10、CD163) mRNA表达水平上调.同时,CCL18蛋白和mRNA表达水平均上调,而雷帕霉素可下调升高的CCL18表达水平.结论 及IL-4序贯诱导人单核细胞系成为M2型巨噬细胞,雷帕霉素可逆转这一过程.
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硅酸钙、β-磷酸三钙和羟基磷灰石三相陶瓷复合物与骨细胞活性的体外鉴定
由于羟基磷灰石陶瓷与骨无机质的化学成份相似,所以10年来研究者对羟基磷灰石陶瓷在骨修复替换中的应用进行了深入的研究.羟基磷灰石因其高生物相容性和骨传导性已被广泛的应用,但羟基磷灰石的再吸收能力差.立童对由硅酸钙、β-磷酸三钙和羟基磷灰石组成的三相陶瓷复合物进行了研究.在三相陶瓷复合物环境下,采用不同比率硅酸钙、β-磷酸三钙和羟基磷灰石对骨髓夹源间充质干细胞进行体外研究.细胞在加入和没有加入成骨细胞的情况下培养28 d.采用碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶基因码转录和骨唾液蛋白Ⅱ表达评估成骨分化水平.成骨细胞和破骨细胞在陶瓷复合80%羟基磷灰石材料上完成预实验.将鼠颅盖骨成骨细胞与人单核细胞共同培养以分析其向破骨细胞分化的可能性.结果显示人骨髓间充质干细胞在陶瓷复合物材料上表现出快速黏附和高度增殖率,在所有实验材料上,成骨诱导的骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性增加,碱性磷酸酶基因码转录和骨唾液酸蛋白Ⅱ的表达在3种材料上同样增加.扫描电镜和聚焦激光扫描显微镜结果证明在陶瓷复合80%羟基磷灰石材料上的人单核细胞向破骨样细胞分化.结果提示制各的三相陶瓷复合材料支持人骨髓间充质干细胞的黏附、增殖和成骨分化,以及人单核细胞与成骨细胞联合培养条件下破骨细胞形成.
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人单核细胞对煤焦沥青烟提取物诱导人永生化支气管上皮细胞c-Jun mRNA表达的影响
[目的]探讨人单核细胞对煤焦沥青烟提取物(CTPE)处理人永生化支气管上皮细胞中c-Jun mRNA表达的影响. [方法]用3 μg/mL CTPE刺激人永生化支气管上皮细胞(CTPE组),及人单核细胞共培养的人永生化支气管上皮细胞(CC组),设立二甲基亚砜对照组;分别收集各组1、5、10、15、20代细胞.将CC组第9代细胞分别常规培养至10代(CC10组)、15代(CC15组),加入100μg/mL肿瘤坏死因子-α中和抗体培养至15代(中和抗体组).应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组细胞中c-Jun mRNA的表达水平. [结果]15、20代CC组人永生化支气管上皮细胞c-Jun mRNA相对表达水平高于CTPE组和二甲基亚砜对照组(均P<0.05);中和抗体组c-Jun mRNA的相对表达水平高于CC10组,低于CC15组(均P<0.05). [结论]人单核细胞可能通过肿瘤坏死因子-α调控CTPE诱导人永生化支气管上皮细胞c-Jun mRNA的表达.
关键词: 煤焦沥青烟提取物 c-jun mRNA 人单核细胞 肿瘤坏死因子-α -
查菲埃立克体的抗原分子
查菲埃立克体(E.chaffeensis)是埃立克体属第1基因群中的1个种,主要侵犯单核细胞系统,所致人的感染称为人单核细胞埃立克体病(HME).它有7种主要抗原蛋白,相对分子质量(Mr)分别为120×103、65×103、58×103、44×103、29×103、28×103和22×103,其中120×103蛋白是查菲埃立克体的种特异抗原;28×103蛋白是一家族蛋白,与同属的犬埃立克体有高度同源性,具基因群特异性,是潜在的保护性抗原;58×103和65×103蛋白与致病性有关;44×103蛋白为HME分子流行病学的研究提供了基础.
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053 登革病毒感染原代人单核细胞、上皮细胞与内皮细胞株后IL-8分泌增加
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穿透支原体脂质相关膜蛋白诱导人单核细胞产生炎症性细胞因子
穿透支原体(M.penetrans,Mpe)是从感染人类免疫缺陷病毒的患者尿液中分离出来的,被称为艾滋病相关支原体.
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胰腺炎相关性腹水对单核细胞的炎性损伤作用
重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)可产生大量的胰腺炎相关性腹水(pancreatitis associated ascetic fluid,PAAF),其中所含诸多致炎物质如细胞因子、胰酶等对SAP的病情发展及多器官功能衰竭起促进作用[1-2].动物实验表明对SAP模型进行腹腔灌洗可明显改善症状[3];而在临床治疗中,对SAP患者行腹腔灌洗亦能有效改善症状,减少并发症发生[4].然而,PAAF如何发挥促炎作用至今尚不清楚.本研究拟采用SAP患者腹水作用于人单核细胞,观察其对单核细胞的炎性损伤作用,进一步探究PAAF对SAP的炎性损伤机制.