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风湿清对RANKL诱导的RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响
目的:通过观察风湿清(Fengshiqing,FSQ)含药血清对RAW264.7细胞向破骨细胞分化及细胞分泌骨免疫相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-17(IL-17)的影响,初步探讨FSQ缓解类风湿性关节炎(RA)骨破坏的机制.方法:5％,10％,15％3个不同体积分数的FSQ含药血清与核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κBligand,RANKL)诱导的RAW264.7共孵育6d,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞的形成；FSQ含药血清(5％,10％,15％)与白介素-1β(IL-1β)诱导的RAW264.7细胞共孵育24 h后收集细胞上清液,ELISA方法检测TNF-α和IL-17的含量.结果:RANKL诱导RAW264.7细胞形成TRAP阳性多核细胞,IL-1β诱导TNF-α和IL-17在RAW264.7细胞中异常高表达,5％～15％ FSQ含药血清能剂量依赖地降低TRAP阳性细胞数；10％和15％的FSQ含药血清能显著抑制TNF-α(P＜0.05)以及IL-17 (P＜ 0.01)的表达量.结论:FSQ能抑制破骨前体细胞向破骨细胞分化,降低TNF-α和IL-17在RAW264.7细胞中的异常高表达,这可能是FSQ抑制骨破坏治疗RA的作用机制之一.
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Calpain及抑制剂对小鼠破骨细胞分化的作用
目的 探讨Calpain及其抑制剂Calpastatin能否抑制核因子-κB活化受体配体(receptor activatorof NFκB ligand,RANKL)诱导的小鼠破骨细胞分化.方法 体外培养小鼠RAW264.7细胞,在诱导组分别加入不同浓度的RANKL(0、20、50、70、100ng/mL),并另设抑制剂组加入RANKL 50ng/mL和Calpastatin50 nmol/L,共同诱导分化6 d至破骨细胞分化成熟.第2天应用荧光定量分析试剂盒分析各组Calpain活性,并在第6天应用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色和骨凹陷分析方法(pitformation assay)比较各组破骨细胞分化程度的差异.结果 Calpain活性随RANKL剂量的增加而递增(P<0.05),其活性分别与TRAP阳性细胞数和骨凹陷面积呈正相关,相关性具有统计学意义(P<0.05).Calpastatin抑制剂组与单纯RANKL 50ng/mL诱导组相比,TRAP阳性细胞数和骨凹陷面积均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Calpain是小鼠RAW264.7细胞中RANK L诱导的破骨细胞分化过程中的关键因子,使用Calpastatin抑制Calpain活性可以有效抑制RANKL诱导的破骨细胞分化.Calpain可能成为抑制破骨细胞分化和骨质破坏的新型治疗靶点.
关键词： calpain 破骨细胞分化 RANKL RAW264.7细胞 骨凹陷 -
破骨细胞分化过程中的信号通路及信号因子的研究进展
破骨细胞（ osteoclast，OC）来源于骨髓，在生长发育过程中，起着骨吸收的重要功能，其增多或减少会引起骨质疏松或骨质硬化等相关的骨代谢性疾病。本文将从OC分化过程中所涉及的信号通路（ NF-κB、Src-PI3K-Akt、MAPK、CN／NFAT、IDO／Tryptophan通路等）及相关信号因子（ PU 1、Lhx2、TNF-α、M-CSF、TGF-β等）方面，对OC分化的信号通路及相关信号因子的研究进展进行简要综述，以期能为相关骨代谢性疾病的治疗提供新的思路。
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γ射线对人外周血单核细胞向破骨样细胞诱导分化的影响
目的 探讨电离辐射对人外周血单核细胞来源的破骨细胞体外诱导分化的影响.方法 将人外周血采用密度梯度离心法获得单核细胞,经核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导培养24 h,分别给予0、0.75和2 Gy的1377Cs γ射线照射,第7天行TRAP染色后计数TRAP阳性多核破骨细胞,第10天取象牙骨片基质行甲苯胺蓝染色观察骨吸收陷窝形成;qRT-PCR检测破骨细胞特征标志物组织蛋白酶K和integrin β3的mRNA表达水平;ELISA法检测培养上清液中TRAcP-5b含量.结果 0.75 Gy照射组TRAP染色阳性多核破骨细胞计数显著多于对照组(0 Gy)(t=3.451,P＜0.05),组织蛋白酶K和integrin β3的mRNA表达水平明显上调(t=2.343、2.728,P＜0.05),且培养液中TRAcP-5b浓度明显增加(t=3.631,P＜0.05).而2 Gy照射组的TRAP染色阳性多核破骨细胞计数少于对照组,并伴有组织蛋白酶K和integrin β3的mRNA表达水平下调、培养上清液中TRAcP-5b浓度下降,但差异无统计学意义.结论 电离辐射可改变人外周血单核细胞破骨样细胞分化趋势,小剂量照射时可促进破骨细胞分化和骨吸收活性,而较大剂量照射后破骨细胞分化和骨吸收活性均降低.
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唑来膦酸影响单个核细胞向破骨细胞分化及RANK表达的研究
目的 研究唑来膦酸(zoledronate,ZLN)对破骨细胞分化及相关信号分子组织蛋白酶K(capthsin K)、细胞核因子κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factor kappa-B,RANK)表达的影响,初步探讨唑来膦酸对破骨细胞分化的影响和机制.方法 采用核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor kappa-B ligand,RANKL)诱导小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化.在诱导开始时即分成2组:G1组为空白对照组,采用50 ng/ml RANKL诱导;G2组为实验组,从诱导开始就加入1×10-6 mol/L唑来膦酸处理,诱导4d后收获并进行抗酒石酸磷酸酶(TRAP)染色观察、计算破骨细胞数量并检测TRAP酶活性;采用Real-Time PCR和Western Blot分析组织蛋白酶K、RANK的表达水平.结果 唑来膦酸组生成的TRAP阳性的破骨样细胞较对照组少且核的数目也较少,唑来膦酸组较对照组破骨细胞生成的数目下降[(62.0±10.2)％,P＜0.05];唑来膦酸组TRAP活性较对照组下降[(31.0±4.1)％,P＜0.05];唑来膦酸组的组织蛋白酶K、RANK基因表达较对照组分别下降[(78.0±4.2)％、(49.0±1.9)％,P＜0.05].结论 唑来膦酸通过抑制破骨前体细胞RANK的表达来抑制体外破骨细胞分化.
关键词： 唑来膦酸 破骨细胞分化 细胞核因子κB受体活化因子 -
miR-125 a／TRAF6调控通路在破骨细胞分化中的作用研究
目的：研究miR-125a在破骨细胞分化过程中的作用及其作用机制，方法单核细胞集落刺激因子（M-CSF）和核因子-κB配体的受体激活剂（RANKL）诱导CD1＋4 PBMCs向破骨细胞分化。生物信息学运算预测miR-125a的靶基因以及结合于miR-125a启动子区域的转录因子。实时定量PCR法检测miR-125a以及其他相关基因的表达。过表达实验和抑制试验用于研究miR-125a在破骨细胞分化中的作用及其与靶基因之间的相互关系。荧光素酶报告基因实验验证miR-125a与其靶基因之间的结合。结果（1） miR-125a表达在CD1＋4 PBMCs前体细胞高表达，随着诱导时间的延续逐渐下降，在诱导第5天开始明显下降并在第15天达到低值，表明miR-125 a的表达在破骨细胞分化过程中呈现明显下降趋势。（2）miR-125a参与调控RANKL和M-CSF诱导的破骨细胞分化，过表达miR-125a明显抑制了TRAP和NFATc1的mRNA表达和CD1＋4 PBMCs向破骨细胞的分化。（3）miR-125a直接作用于靶基因肿瘤坏死因子相关因子6（TRAF6），TRAF6是RANKL／RANK／NFATc1信号转导通路的转录因子，过表达miR-125a降低了TRAF6的蛋白表达水平，而TRAF6的mRNA水平无明显改变。结论 miR-125 a通过作用于新的TRAF6／NFATC1／miR-125a负反馈调控环路在破骨细胞的分化中发挥了重要的调控作用，调控miR-125a的表达可能成为骨代谢疾病新的治疗靶点。
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破骨细胞分化中NFATc1/miR-125a作用通路的研究
目的 研究破骨细胞分化中miR-125a受转录因子NFATc1的调控模式及其作用机制,寻找骨代谢疾病新的治疗靶点.方法 单核细胞集落刺激因子(M-CSF)和核因子-κB配体的受体激活剂(RANKL)诱导CD14外周血单核细胞(PBMCs)向破骨细胞分化.生物信息学运算预测结合于miR-125a启动子区域的转录因子,过表达实验和抑制实验用于研究转录因子对miR-125a在破骨细胞分化中表达的影响,荧光素酶报告基因实验验证miR-125a与其靶基因之间的结合,凝胶迁移电泳实验(EMSA)和染色质免疫沉淀实验(CHIP)验证转录因子与miR-125a启动子区域的结合.结果 凝胶迁移电泳和染色质免疫沉淀实验证明了NFATc1结合于miR-125a的启动子靶位点.过表达NFATc1抑制miR-125a的表达;抑制NFATc1的表达则升高miR-125a的表达.结论 miR-125a在作用于其靶基因——肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)6的同时受到转录因子NFATc1的负反馈调控,发挥其在破骨细胞分化中的调控作用.表明通过调控NFATc1的表达来改变miR-125a的表达,可能成为骨代谢疾病新的治疗靶点.
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硅酸钙、β-磷酸三钙和羟基磷灰石三相陶瓷复合物与骨细胞活性的体外鉴定
由于羟基磷灰石陶瓷与骨无机质的化学成份相似,所以10年来研究者对羟基磷灰石陶瓷在骨修复替换中的应用进行了深入的研究.羟基磷灰石因其高生物相容性和骨传导性已被广泛的应用,但羟基磷灰石的再吸收能力差.立童对由硅酸钙、β-磷酸三钙和羟基磷灰石组成的三相陶瓷复合物进行了研究.在三相陶瓷复合物环境下,采用不同比率硅酸钙、β-磷酸三钙和羟基磷灰石对骨髓夹源间充质干细胞进行体外研究.细胞在加入和没有加入成骨细胞的情况下培养28 d.采用碱性磷酸酶活性、碱性磷酸酶基因码转录和骨唾液蛋白Ⅱ表达评估成骨分化水平.成骨细胞和破骨细胞在陶瓷复合80%羟基磷灰石材料上完成预实验.将鼠颅盖骨成骨细胞与人单核细胞共同培养以分析其向破骨细胞分化的可能性.结果显示人骨髓间充质干细胞在陶瓷复合物材料上表现出快速黏附和高度增殖率,在所有实验材料上,成骨诱导的骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性增加,碱性磷酸酶基因码转录和骨唾液酸蛋白Ⅱ的表达在3种材料上同样增加.扫描电镜和聚焦激光扫描显微镜结果证明在陶瓷复合80%羟基磷灰石材料上的人单核细胞向破骨样细胞分化.结果提示制各的三相陶瓷复合材料支持人骨髓间充质干细胞的黏附、增殖和成骨分化,以及人单核细胞与成骨细胞联合培养条件下破骨细胞形成.
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红车轴草提取物对破骨细胞骨吸收及分化的作用机制
背景:近研究发现红车轴草异黄酮能够通过提高雌激素作用,有效抑制骨吸收,降低骨转化率,增强成骨细胞活性及骨密度,对骨质疏松具有一定的防治作用.目的:观察红车轴草提取物对破骨细胞骨吸收及分化的作用影响.方法:提取大鼠骨髓腔细胞,用淋巴细胞分离液分离细胞,培养5 h后,取未贴壁细胞加入30μg/L巨噬细胞集落刺激因子和75μg/L核因子 κB受体活化因子配体诱导细胞(对照组),将不同质量浓度(0.3,0.6和1.2 g/L)的红车轴草提取物加入诱导的破骨细胞中,观察不同质量浓度的红车轴草提取物对破骨细胞分化与骨吸收作用;采用Western bloting法测定破骨细胞分化相关蛋白c-fos和NFATcl的含量.结果与结论:①与对照组比较,不同质量浓度的红车轴草提取物能够不同程度的抑制破骨细胞分化和骨吸收;②抗酒石酸酸性磷酸酶染色发现红车轴草提取物能够明显降低破骨细胞数目;③Western blotting结果表明红车轴草提取物能够抑制破骨细胞分化相关蛋白c-fos和NFATC1表达;④结果提示,红车轴草提取物能够抑制破骨细胞分化及骨吸收.
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骨关节炎基因差异谱的生物信息学分析
背景:骨关节炎对中老年人群的健康具有重要的威胁,其疾病发生发展受到多个基因的调控,但其具体机制尚未明确.目的:应用生物信息学方法研究骨关节炎的差异基因表达.方法:从GEO在线数据库中下载并分析获得在骨关节炎发生时关节滑膜组织中明显表达差异的158个基因.通过DAVID数据库对基因进行功能富集.通过STRING数据库分析蛋白质与蛋白质间相互作用关系.结果与结论:共筛选出158个差异基因,其中上调12个,下调146个.利用DAVID数据库对差异基因进行GO和KEGG Pathway分析显示,差异基因主要富集在破骨细胞分化的正性调节、细胞连接等功能以及MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路及ECM受体相互作用等信号通路.将差异基因进行蛋白质相互作用分析后筛选出网络的核心基因为VEGFA,JUN,PRKACA,PXN,SPTAN1,核心基因之间存在复杂的相互作用.结果证实,差异基因的相互作用可能与骨关节炎的发生有关,可为骨关节炎的诊疗提供新的靶点.
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破骨细胞形成过程中唑来膦酸的作用途径及机制
背景:唑来膦酸可用来治疗骨吸收疾病,但其确切机制不明确.目的:探讨唑来膦酸对RANKL诱导的破骨细胞形成的影响和机制.方法:通过CCK8实验检测小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7细胞的活力,分析大半数抑制浓度(IC50).体外用RANKL将RAW264.7细胞诱导为破骨细胞,鬼笔环肽和DAPI染色进行鉴定,并经抗酒石酸酸性磷酸酶染色来评估唑来膦酸在破骨细胞分化不同阶段对破骨细胞形成的影响,骨吸收实验检测破骨细胞骨吸收活性,后Western blot检测IκBα、P38、JNK及ERK蛋白的表达.结果与结论:①唑来膦酸作用48 h,对RAW264.7细胞的大半数抑制浓度(IC50)为33.9μmol/L,相比对照组,低于该浓度的唑来膦酸抑制破骨细胞分化;②唑来膦酸处理后骨吸收陷窝数目和面积明显减少(P<0.05);③蛋白表达水平上,唑来膦酸抑制RANKL诱导的IκBα磷酸化,其他蛋白磷酸化未见明显改变;④结果表明,唑来膦酸在体外可能通过调节NF-κB信号通路来抑制破骨细胞形成.
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紫草素抑制破骨细胞分化及改善去卵巢诱导的小鼠骨质疏松
目的:研究紫草素对破骨细胞体外分化的影响,并探讨其对去卵巢(ovariectomized,OVX)诱导的骨质疏松模型小鼠的骨保护作用.方法:体外细胞生物学实验,采用CCK-8法检测不同浓度紫草素对C57BL/6J小鼠骨髓源性单核巨噬细胞的毒性;采用RANKL和M-CSF诱导单核巨噬细胞破骨分化模型,给予不同浓度的紫草素干预后,经TRAP染色对破骨细胞进行形态学观察,并通过Real-Time PCR技术检测破骨细胞特异性基因TRAP、c-Fos和NFATc1的表达.动物体内实验,随机将15只小鼠平均分为假手术组、OVX组、治疗组.造模成功后治疗组给予紫草素干预,假手术组和OVX组以等体积生理盐水处理.连续处理30天后取胫骨,用MicroCT扫描重建观察胫骨近端骨丢失状况.结果:①高于250 nmol/L的紫草素显著抑制小鼠单核巨噬细胞生长(P＜0.01).②不同浓度的紫草素干预能显著抑制体外破骨细胞形成(P＜0.01).③不同浓度的紫草素干预能显著抑制TRAP,c-Fos和NFATc1等参与破骨细胞分化的重要基因表达(P＜0.01).④紫草素干预能显著改善去卵巢诱导的骨质疏松模型小鼠的骨丢失(P＜0.05).结论:紫草素能在体外抑制破骨细胞分化并在体内改善去卵巢诱导的小鼠骨质疏松.
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TNF-α对人脱落乳牙牙髓干细胞促破骨细胞形成能力的影响
目的:探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)对人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促破骨细胞形成能力的影响.方法:通过酶消化法体外分离、培养处于生理性根吸收时期的自然脱落乳牙牙髓干细胞;建立SHED与破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclearcells,PBMCs)的间接共培养模型,在破骨诱导培养液中加入0、5、10、50、100 ng/mL不同浓度的TNF-α,通过实时定量RT-PCR和Western免疫印迹检测破骨相关基因及核转录因子κB (nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路相关基因的表达.采用SPSS 19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:在10 ng/mL的TNF-α刺激下,PBMCs中破骨相关蛋白CTSK和TRAP的表达水平均显著增高.Western免疫印迹和实时定量RT-PCR检测结果显示,SHED胞质内p-IκBα和胞核内p65蛋白、基因的表达水平在10 ng/mL的TNF-α刺激下显著高于无TNF-α刺激组.结论:炎症细胞因子TNF-α通过NF-κB信号通路对SHED促破骨细胞形成能力具有调控作用.
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川续断皂苷VI对大鼠正畸牙周组织改建影响的研究
目的 探究局部注射川续断皂苷VI(ASD)是否通过促进大鼠正畸牙移动过程中破骨细胞分化而影响牙周组织改建.方法 选择40只6周龄雌性Wistar大鼠,随机分为4组(10只/组):A组:空白对照组(局部注射生理盐水),B组:ASD低浓度组(局部注射5 mg/kg ASD),C组ASD高浓度组(局部注射10 mg/kg ASD),D组:前列腺素E2组(局部注射适宜浓度PGE2).实验分别于第3、7、14、21及28天5个时间点处死2只大鼠,对大鼠上颌第一磨牙近中压力侧牙周组织进行TRAP染色以观察破骨细胞数及免疫组化以观察破骨细胞分化因子(ODF)表达情况.结果 从第3天到第21天,4组上颌第一磨牙近中压力侧TRAP阳性细胞的数目及ODF的表达随加力时间不断增多,第28天时出现下降.从第7天开始,与A组相比,实验组破骨细胞数量和ODF表达均增加,B组比C组、D组减少且有统计学差异,C组与D组无统计学差异.结论 局部注射ASD和适宜浓度的PGE2可有效促进压力侧牙周组织破骨细胞的分化,加快牙周改建.局部注射10 mg/kg ASD与PGE2效果基本相近,而稍低浓度 ASD效果弱于PGE2和稍高浓度ASD.
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miR-34a在口腔医学领域中的研究进展
微小分子RNA(microRNAs,miRNAs)是一类内源性非编码小分子RNA,可以通过阻遏靶mRNA的翻译或降解靶mRNA调节基因表达.众多miRNAs中,miRNA-34a(miR-34a)是新近发现且备受关注的miRNAs之一.目前关于miR-34a的研究主要集中在其抗肿瘤作用上,关于其在口腔疾病中的研究较少.本文论述miR-34a可以抑制牙周炎炎症反应,抑制舌鳞状细胞癌的转移和侵袭以及促进牙乳头细胞分化,综述miR-34a在口腔医学领域中的研究进展,为深入认识miR-34a在口腔疾病中的作用奠定基础.
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骨保护素与脑血管疾病
骨保护素(osteoprotegerin,OPG)是肿瘤坏死因子(TNF)受体家族的成员之一,与核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand, RANKL)、核因子-κB受体活化因子(receptor activator of nuclear factorκB,RANK)共同构成骨保护素系统.该系统在破骨细胞分化中起到重要的作用,也在免疫系统的多种细胞相互作用方面起调节作用,可调节血管细胞的存活、骨化及血管壁炎症反应,与动脉硬化性疾病关系密切.尤其近年来,发现其与粥样斑块的稳定性有关,日益受到学者们的关注.
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正畸力作用下压力侧Wnt10b、RANKL在牙周组织中的表达
目的:研究大鼠在正畸力作用下压力侧wnt10b、RANKL在牙周组织中的表达变化.方法:将42只健康雄性SD大鼠随机分为7组,即0h、6h、12h、24 h、5d、7d、14d组,使用镍钛拉簧对第一磨牙向近中施加50 g正畸力,以0h为对照组,每组处死6只.应用实时定量PCR(RT-PCR)对wnt10b、RANKL的mRNA表达进行检测.结果:Real-time PCR结果显示,与对照组相比,实验组压力侧牙周组织中Wnt10b、RANKL mRNA均有表达,其中wnt10b于加力初期表达受抑制,随后升高,于5d达高峰随后下降,14 d恢复至正常水平.RANKL表达随加力时间延长而逐渐升高,7d达到高峰,随后下降.结论:Wnt10b、RANKL参与正畸加力作用下的牙周组织改建.
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NF-κB信号通路介导人脱落乳牙牙髓干细胞促进破骨细胞形成的体外实验研究
目的:探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促进破骨细胞形成中的作用.方法:通过酶消化法体外分离培养SHED;建立破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)与SHED的间接共培养模型,在破骨诱导液中加入核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制剂BAY11-7082,通过实时定量PCR和West-ern Blot检测破骨相关基因及NF-κB信号通路相关因子表达的差异.结果:SHED共培养组的破骨相关基因CTSK、TRAP的表达水平较PBMCs单独培养组显著上调,而加入BAY11-7082刺激的SHED共培养组中破骨相关基因CTSK、TRAP和RANKL/OPG比值的表达水平显著低于SHED共培养组.结论:NF-κB信号通路通过调控RANK/RANKL/OPG受体配体系统介导SHED促进破骨细胞形成.
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人脱落乳牙牙髓干细胞促进破骨细胞形成的体外实验研究
目的:通过间接共培养的方法初步探讨人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated decidu-ous teeth,SHED)在体外对破骨前体细胞分化的影响.方法:建立SHED与破骨前体细胞(外周血单个核细胞,periph-eral blood mononuclear cells,PBMCs)的间接共培养模型,利用TRAP染色观察PBMCs向破骨细胞样细胞分化后的细胞数目与形态,利用qPCR技术和Western Blot技术检测破骨相关基因TRAP、CTSK、c-Fos、TRAF6的表达,以评估PBMCs向破骨细胞样细胞分化的情况.结果:与对照组相比,SHED与PBMCs间接共培养模型中,TRAP染色阳性、具有多个核的破骨细胞样细胞数量显著增多,破骨相关基因TRAP、CTSK、c-Fos、TRAF6在PBMCs中的表达水平显著上调.结论:SHED能够以细胞非接触的方式促进破骨前体细胞向破骨细胞样细胞分化.
关键词： 人脱落乳牙牙髓干细胞 外周血单个核细胞 间接共培养 破骨细胞分化 -
金葡菌脂磷壁酸促进破骨细胞分化的分子机制
目的：探讨金黄色葡萄球菌脂磷壁酸（LTA-sa）促进破骨细胞分化的分子机制。方法：以浓度为200 ng／mL的LTA-sa作用于Raw264．7细胞，分别作用0、5、10、20、40、60 min及0、1、2、3 d后，用Western blot 检测破骨细胞分化过程中相关信号通路的蛋白表达水平；并以100、200及400 ng／mL的LTA-sa及磷酸盐缓冲液作用于Raw264．7细胞，于作用后1、2、3 d用酶联免疫吸附法（ELISA）检测TNF-α、IL-1α及IL-6的表达情况。结果：（1）Western blot显示，在LTA-sa的作用下，IκB-α在5、10 min时降低，而p-NFκB在10 min时表达明显增高；此外，NFATc1在LTA-sa作用后第2及第3天表达逐渐增高，上述结果经统计分析，差异均有统计学意义（均P ＜0．001）。（2）ELISA检测发现，IL-6在第2、3天表达增高，并随LTA-sa浓度的增加及作用时间的延长，其表达逐渐增多，经统计分析差异有统计学意义（均P ＜0．001）。结论：LTA-sa通过NF-κB信号通路及IL-6的分泌促进破骨细胞分化。
关键词： 骨髓炎 金黄色葡萄球菌脂磷壁酸 破骨细胞分化 分子机制
