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维生素E琥珀酸酯诱导人白血病细胞凋亡的发生
本研究选择两株人白血病细胞Raji(人单核细胞白血病细胞株)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞株),体外比较观察了VE和VES对细胞的生长抑制作用及其与诱发细胞凋亡的关系.检测指标及结果如下:(1)维生素E和VES诱导细胞凋亡的形态学观察.倒置显微镜下观察维生素E和VES作用72 h后的Raji细胞;制备单细胞层涂片,4℃固定、Hoechst 33258避光染色后,荧光显微镜观察.倒置显微镜下,VES组细胞透亮性下降,并见颗粒、碎片,台盼蓝染色大多为阳性.荧光显微镜下,对照培养细胞的胞核大多数大小一致、染色均匀,VES处理组细胞可见随作用剂量增加而逐渐增多的凋亡细胞核.维生素E处理组的上述改变较相同剂量VES组轻.(2)维生素E和VES对细胞的生长抑制作用.Raji.jurkat细胞分装于24孔培养板,设维生素E组(5、10、20μg/mL)、VES组(5、10、20μg/mL),空白对照组、乙醇对照组、丁二酸组,台盼蓝排除法5 d计数.维生素E和VES对Raji、Jurkat细胞的生长均具有程度不一的抑制作用,维生素E对Jurkat细胞的抑制作用较弱,而Raji细胞对维生素E和VES的反应更为敏感,20μg/mL的VES在24h的抑制率达到30%,72 h抑制率为100%,并表现出时间效应和剂量效应的关系.(3)流式细胞仪检测维生素E和VES诱导细胞凋亡.
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运用转基因技术研究卵巢内细胞凋亡的进展
1972年,Kerr等首先提出了apoptosis的概念[1].Apoptosis一词原意是指树叶从树上凋谢,用此来命名今天认识到的细胞凋亡现象.细胞凋亡又称细胞程序性死亡(Programmed Cell Death, PCD),是有核细胞在生理条件下,通过启动其自身的遗传机制,主要通过内源性DNA内切酶的激活,而发生的自动死亡过程.凋亡细胞有其明显的形态学和生物化学的特征[2].表现为:①细胞皱缩(cellshrinkage),此时细胞变小,胞浆致密,细胞器互相靠近.②核的致密化(chromation condensation)是凋亡细胞重要的形态特点.染色质浓缩,沿着核膜排列,形成不同形状和大小的块状,然后染色质逐步分裂为碎片.⑧与此同时细胞器也发生浓缩,失去水分.而后细胞膜下陷,包裹核碎片和细胞器,形成凋亡小体.凋亡细胞核DNA断裂成不连续的片段等重要特征.细胞凋亡不同于细胞坏死,后者是由于某些外界因素的影响,如各种理化损伤和生物的侵袭等引起细胞病理性死亡的过程[3].
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胰腺缺血-再灌注损伤细胞凋亡及其相关因素的研究
我们对胰腺缺血-再灌注损伤细胞凋亡及其相关因素如肿瘤坏死因子(TNF)-α、组织Ca 2+等在其过程中的作用进行研究，现将结果报道如下。 一、材料与方法 成年Wistar大鼠60只，体重(200±25) g，雌雄不拘。随机分为对照组(A组，10只)、缺血-再灌注损伤组(B组，30只)、异搏定保护组(C组，10只)和TNF-α拮抗组(D组，10只)。戊巴比妥钠45 mg/kg体重腹腔注射麻醉，A组直接取胰腺组织标本，心脏穿刺取血2 ml；B组分别以血管夹阻断腹腔干和肠系膜上动脉15、30、60 min(各10只)后再灌注6 h，取标本；C组阻断血管(同B组)15 min，于再灌注前5 min尾静脉注射异搏定溶液0.1 mg/100 g体重，取标本；D组于术前5 min尾静脉注射抗TNF-α单克隆抗体20 μg/100 g体重后阻断血管(同B 组)15 min，再灌注6 h，取标本。 胰腺标本常规固定，苏木素-伊红染色，以各组10个病理切片中出血坏死性胰腺炎所占比例来衡量胰腺组织损伤的严重程度。 采用末端标记法(TUNLE)标记胰腺凋亡细胞核中的DNA 3’-OH末端，按TUNLE试剂盒要求操作。3，3’-2氨基联苯胺显色，苏木素复染。光镜下计算凋亡细胞百分比，3次记数平均值，作为胰腺细胞凋亡指数(AI)。按TNF-α放射免疫试剂盒(北京东亚免疫研究所)说明测定TNF-α。以原子吸收光法测定组织Ca2+ 。所有数据以(****±s)表示，方差分析及相关性检验。 二、结果 缺血15、30、60 min细胞凋亡百分比分别为(28.3±3.2)%、(19.6±3.0)%、(11 .2±2.9)%，不同缺血时间的细胞凋亡百分比之间差异均有显著性意义(P＜0.05)。各组胰腺细胞AI、TNF-α、组织Ca2+检测结果见表1。缺血-再灌注损伤组血TNF-α、组织Ca2+与细胞凋亡指数之间均具有显著相关性(r=0.692 7，P＜0.05 ；r=0.848 5，P＜0.05)。
