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维生素E琥珀酸酯诱导人白血病细胞凋亡的发生
本研究选择两株人白血病细胞Raji(人单核细胞白血病细胞株)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞株),体外比较观察了VE和VES对细胞的生长抑制作用及其与诱发细胞凋亡的关系.检测指标及结果如下:(1)维生素E和VES诱导细胞凋亡的形态学观察.倒置显微镜下观察维生素E和VES作用72 h后的Raji细胞;制备单细胞层涂片,4℃固定、Hoechst 33258避光染色后,荧光显微镜观察.倒置显微镜下,VES组细胞透亮性下降,并见颗粒、碎片,台盼蓝染色大多为阳性.荧光显微镜下,对照培养细胞的胞核大多数大小一致、染色均匀,VES处理组细胞可见随作用剂量增加而逐渐增多的凋亡细胞核.维生素E处理组的上述改变较相同剂量VES组轻.(2)维生素E和VES对细胞的生长抑制作用.Raji.jurkat细胞分装于24孔培养板,设维生素E组(5、10、20μg/mL)、VES组(5、10、20μg/mL),空白对照组、乙醇对照组、丁二酸组,台盼蓝排除法5 d计数.维生素E和VES对Raji、Jurkat细胞的生长均具有程度不一的抑制作用,维生素E对Jurkat细胞的抑制作用较弱,而Raji细胞对维生素E和VES的反应更为敏感,20μg/mL的VES在24h的抑制率达到30%,72 h抑制率为100%,并表现出时间效应和剂量效应的关系.(3)流式细胞仪检测维生素E和VES诱导细胞凋亡.
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染色剂在玻璃体视网膜手术中的应用
玻璃体手术联合视网膜前膜(epiretinal membrane,ERM)、内界膜(internal limiting membrane,ILM)剥除术,是黄斑区相关手术中普遍使用的主流术式.近年来新兴的生物染色剂辅助下ERM/ILM剥除术可降低手术相关操作的难度和风险.目前应用较多的ERM/ILM染色剂有吲哚青绿、台盼蓝、亮蓝、曲安奈德等几种.但所有生物染色剂都对视网膜存在潜在的毒性和副作用,同时,某些染色剂对ILM/ERM的染色也不尽人意.
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台盼蓝染色在玻璃体视网膜手术中应用的研究进展
视网膜前膜及视网膜内界膜的剥除是玻璃体切除术中的关键步骤,对视网膜前膜及内界膜的有效染色可使手术医师清晰辨别并准确、彻底剥除这些组织,减少对视网膜的损伤,降低复发率.近年来,台盼蓝染色技术在玻璃体视网膜手术中的应用取得了良好的临床效果.本文就台盼蓝对视网膜毒性的基础研究、台盼蓝染色在眼后节手术中的临床应用做一综述.
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台盼蓝囊膜染色剂在复明工程成熟期白内障手术撕囊中的应用
目的 探讨台盼蓝囊膜染色剂在白内障复明工程白内障手术撕囊中的应用价值.设计 回顾性比较性病例系列.研究对象 2012-2013年期间河北省兴隆县人民医院“百万贫困白内障患者复明工程”成熟期或过熟期白内障手术患者84例(84眼).方法 随机分为观察组和对照组,每组42例(42眼).观察组超声乳化白内障手术过程中接受0.1 ml 0.1％台盼蓝磷酸盐缓冲溶液前囊膜染色后行连续环形撕囊,对照组超声乳化白内障术中撕囊前未予染色.主要指标 术中囊膜染色情况,撕囊成功率,术后视力、眼压、前房炎症反应、角膜水肿及后囊混浊情况.结果 观察组台盼蓝染色后,晶状体前囊膜100％被染成淡蓝色.撕囊成功率观察组97.6％,对照组78.6％(P=0.003);术后1个月视力、眼压、前房炎症反应、角膜水肿情况两组比较差异无统计学意义(均为P＞0.05);术后3个月后囊膜明显混浊观察组1/42例、对照组6/42例(P=0.027).结论 白内障复明工程成熟期或过熟期白内障手术中采取台盼蓝囊膜染色剂行前囊膜染色,使连续环形撕囊相对容易,保证手术更顺利进行.
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台盼蓝及弹性虹膜拉钩在马凡综合征晶状体不全脱位手术中的应用
目的 评价台盼蓝及弹性虹膜拉钩在马凡综合征晶状体不全脱位手术中应用的效果.方法 回顾性分析12例(17眼)马凡综合征晶状体不全脱位术中以台盼蓝及虹膜拉钩辅助进行超声乳化人工晶状体植入术,术后随访6~24个月.结果 术后裸眼视力及佳矫正视力均较术前提高(P=0.001,0.039).术后6个月人工晶状体偏中心距离为(0.23±0.28)mm,倾斜度为(1.140±1.060)度.结论 在马凡综合征晶状体不全脱位术中应用台盼蓝染色及虹膜拉钩稳定晶状体位置效果良好.
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前囊染色在白色白内障手术中的应用
目的 评价晶状体前囊快速直接染色在白色白内障手术连续环形撕囊中应用的意义.方法 前瞻性随机对照临床研究.进行超声乳化术52例(67眼),随机分为两组:A组27例(34眼),前房内单纯注入0.06％台盼蓝0.1 ml;B组25例(33眼)前房内注入带有灭菌空气的0.06％台盼蓝0.1 ml.均于前囊染色后进行连续环行撕囊.比较两组撕囊成功率、角膜内皮细胞情况、所用的超声能量、乳化时间及并发症等.结果 经染色后两组前囊均呈淡蓝色,清晰可辨,两组撕囊成功率均达100％.术后角膜内皮细胞密度、平均超声能量、有效乳化时间及并发症两组间均无统计学意义.A组角膜内皮细胞丢失率(7％±1.1％)低于B组(10％±1.2％),术后A组六边形细胞比率(48.6％±13.5％)高于B组(44.0％±9.5％),差异均无统计学意义(t=-0.691,P=0.49;t=-1.509,P=0.14).结论 直接将0.06％台盼蓝注入前房进行前囊染色,快捷、安全.
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台盼蓝晶状体前囊染色实验研究
目的研究台盼蓝晶状体前囊染色的效果和安全性.方法健康日本大耳白兔24只,分为台盼蓝染色组和空白对照组;每只兔左右眼分别采用直接染色法(A组)及气泡下染色法(B组).观察角膜内皮、眼前段、眼压变化及不同时期病理和超微病理表现.结果A组角膜内皮轻度着色,晶状体前囊着色,虹膜浅着色;B组晶状体前囊着色.术前、术后1、3、7日角膜内皮细胞计数、内皮细胞变异系数、六角形细胞比例及眼压变化差异均无显著意义(P＞0.05).各组病理切片角膜内皮细胞均见不同程度核异形及水肿.扫描电镜显示术后1日 B组角膜内皮细胞肿胀轻于A组.结论0.1%台盼蓝可使兔眼晶状体前囊着色,眼内应用安全有效.气泡下染色效果更好.
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台盼蓝染色与FDA/PI双染色对检测肝细胞活率的评价
台盼蓝排除试验是常用的检测细胞活率的方法,但有文献报道其并不能准确反映肝细胞的存活情况.分离的肝细胞在用于病人治疗前,必须有1个精确迅速的检测肝细胞活率的方法.我们采用FDA/PI(荧光二乙脂/碘丙啶)双染,应用流式细胞仪,可迅速精确地检测肝细胞活率.
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台盼蓝染色脱细胞羊膜在结膜囊成形术中的应用
由于各种原因引起的结膜囊变浅、变小而使义眼不能置入者，安装义眼时需行结膜囊成形术。我们采用脱细胞羊膜（Amnion extracellular matrix，AECM）加台盼蓝囊膜染色剂染色对羟基磷灰石（hydroxyapatite , H A）眼胎植入术后结膜囊狭窄患者行结膜囊成形术，取得了满意的疗效。现报告如下。
1材料和方法
1.1一般资料：本组92例（92眼），年龄平均38.5岁。其中男性56例，女性36例。H A眼胎植入原因：外伤68例，眼内炎10例，绝对期青光眼8例，视网膜母细胞瘤6例。HA眼胎植入时间长16月，短6月，平均10月。结膜囊狭窄Ⅰ度54例，Ⅱ度38例。本组术后随访观察6～18月，平均11月。 -
北苍术多糖的酶法辅助超声提取工艺的优化及其体外抗肿瘤活性研究
目的 通过生物酶解技术优化北苍术多糖的酶辅助超声提取方法,并考察其体外抗肿瘤活性.方法 选用纤维素酶和果胶酶水解北苍术药材,酶解后采用超声法提取北苍术药材中多糖.以多糖得率为指标,在单因素试验的基础上采用4个因素(酶用量、酶解时间、酶解pH值、酶解温度)3个水平L9(34)正交设计法对酶解条件进行优选,并选用苯酚-浓硫酸法测定多糖,采用MTS、台盼蓝法对北苍术粗多糖体外抗肿瘤活性进行初探.结果 佳酶解条件为酶用量为药材1.2％、在60℃、pH 5条件下酶解50 min,再以超声提取40 min,北苍术多糖的得率为32.29％,所提粗多糖对HeLa细胞增殖的抑制率为64.42％.结论 酶解辅助超声提取北苍术中多糖简便易行,可以提高多糖得率,多糖活性较好.
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细胞毒性试验中两种细胞计数方法的比较
目的 比较Countstar自动细胞计数仪法和传统显微镜计数法两种计数方法在细胞毒性试验中细胞计数的差异.方法 选用常见的两种类型的药品稀释液,稀释液为真溶液的注射用左旋泮托拉唑钠和稀释液为混悬液的毛蚶提取物,设立不同剂量组,细胞染毒6h后制备细胞悬液,台盼蓝染色,分别用显微镜和Countstar自动细胞计数仪计数,对结果进行比较分析.结果 Countstar自动细胞计数仪法和显微镜计数法两种计数方法相关性良好,细胞计数结果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Countstar自动细胞计数仪法是相对简单、快捷、准确的细胞计数方法.
关键词： 细胞毒性试验 Countstar自动细胞计数 显微镜计数法 台盼蓝 计数 -
建立活肿瘤组织细胞库的研究
目的 通过对乳腺癌组织进行体外细胞原代培养,观察其生长状况及规律,适时的进行细胞传代及冻存,探讨乳腺癌细胞培养新方法,为后续肿瘤细胞库的建立提供新思路.方法 选取2014年2月至2015年1月期间在我院住院患者52例,所有患者病理学诊断明确,患者及家属签署自愿同意书.术中留取部分癌组织进行处理,对细胞进行培养,定时观察生长状况,定期换液、传代,冻存并对细胞进行纯度及细胞活率检测.结果 (1)培养24 h后,可见大部分细胞呈贴壁状态;48 h后,细胞基本全部呈贴壁生长.培养9～10 d,镜下观察细胞数大量增加.冻存前对细胞行检测活率均高于86％,肿瘤细胞纯度均在75％以上.(2)随培养天数增加,细胞活力下降,传至第五代后,开始出现死亡细胞并伴纤维细胞生长.(3)52例标本,40例成功冻存;8例发生污染;6例未出现增殖.培养成功率为76.92％.结论 (1)乳腺癌细胞可以进行体外选择性原代培养并增殖达到冻存所需细胞数.(2)换液和传代可在一定程度上刺激癌细胞生长及增殖.(3)准确地活率及纯度检测能够为实验提供保障工作.(4)实验的成功能够为肿瘤组织细胞库的建立提供基础保障工作.
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台盼蓝囊膜染色辅助撕囊技术在超声乳化术中的应用
目的:探讨0.1%台盼蓝溶液囊膜染色辅助撕囊技术的有效性、安全性和手术操作技巧.方法:回顾分析接受台盼蓝溶液染色的25例成熟期、过熟期白内障的撕囊成功率及超声乳化术后的并发症等有关情况.结果:经台盼蓝囊膜染色后25例成熟期、过熟期白内障的环形撕囊成功率为100%,染色全过程仅需1～2分钟即可完成.门诊随访期间所有病例均未发现与染色有关的角膜内皮受损、虹膜炎及眼压升高等并发症.结论:若能正确掌握染色和撕囊技巧,台盼蓝囊膜染色可显著提高缺乏红光反射的白内障的前囊膜能见度、撕囊成功率,既安全有效又方便快捷.
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台盼兰在成熟期白内障前囊膜染色撕囊中的应用
目的探讨台盼蓝染色撕囊在成熟期白内障手术中的应用.方法随机收集老年性白内障成熟期、过熟期患者60例,分为染色组与非染色组进行对照研究.染色组采用台盼蓝溶液染色后实施连续环形撕囊.结果染色后的晶状体前囊膜呈淡蓝色,在手术显微镜下清晰可辨,撕扯轨迹快捷,易于随时调整控制.结论染色后撕囊使成熟期白内障眼的连续环形撕囊更为易行.
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台盼蓝辅助定位睫状沟缝线固定人工晶状体光学中心研究
目的 台盼蓝染色标记技术引进到睫状沟缝线固定人工晶状体手术流程中,评估其术中辅助术者精确定位光学中心的可行性.方法 临床系列病例分析研究.对2010年1月至2013年6月在无锡市第二人民医院眼科就诊的无囊膜支撑的无晶状体眼37例(37只眼)接受睫状沟缝线固定人工晶状体植入术;台盼蓝标记人工晶状体光学中心,术中观测标记点与角膜中心点重合度;术后裂隙灯前段照相分析光学中心位置;对比全部病例术前佳矫正视力(best corrected visual acuity,BCVA)、术后ld、3个月、6个月的裸眼视力(uncorrected visual acuity,UCVA).结果 术中观察台盼蓝标记点与角膜中心点高度重合31只眼(84％),标记点与角膜中心点偏离6只眼(16％),通过调整线-襻结合位点及缝线张力及时纠正偏位;术后观察全部病例标记点与角膜中心点高度重合,标记点在2周内逐渐肖失;术后第1d UCVA由术前的(0.05±0.03)提高到(0.44±0.19)差异有统计学意义(t=4.63,P =0.0017,P＜0.05),0.5以上占46％ (17/37);术后3个月的UCVA达到(0.56±0.19),0.5以上占65％ (24/37);全部病例未发生人工晶状体缝线松解、人工晶状体脱位、角膜失代偿等并发症.结论 台盼蓝可以提供精确的定位标记,辅助术者及时发现、纠正光学中心的偏位,使整个定位操作更为精准、可控,充分保障睫状沟缝线固定人工晶状体手术所具备的临床优势.
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白色白内障撕囊丢失囊膜台盼蓝染色的有效性探讨
目的 探讨成熟期和过熟期白色白内障连续环形撕囊(CCC)囊膜丢失后,在不吸除黏弹剂情况下使用台盼蓝染色找回丢失囊膜的有效性.方法 对52例(52只眼)术中连续环形撕囊发生囊膜丢失的连续性白色白内障病例进行前瞻性研究.随机分为两组,染色组27例(27只眼),对照组25例(25只眼).染色组不吸除前房玻璃酸钠,使用台盼蓝囊膜染色.对照组吸除前房玻璃酸钠后进行撕囊或截囊.对两组连续环性撕囊成功率、人工晶状体囊袋内植入率进行统计学分析.结果 染色组连续环形撕囊及人工晶状体囊袋内植入率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01),无毒性及并发症发生.对照组有9只眼人工晶状体植入睫状沟,6只眼发生后囊膜破裂及玻璃体脱出.结论 在连续环形撕囊发生囊膜丢失后,采取不吸除前房黏弹剂,应用台盼蓝对晶状体前囊膜染色,对找回丢失囊膜和CCC继续完成是有效和安全的.
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不同缝合方式对大鼠角膜穿通伤后内皮细胞影响的研究
目的:通过手术缝合治疗大鼠角膜穿通伤,探索全层缝合、深板层缝合、及不缝合对角膜内皮细胞的影响.方法:建立大鼠角膜穿通伤模型,同一手术者对角膜切口进行全层、深板层、及不缝合操作.在裂隙灯下动态观察角膜创伤愈合情况；对不同时间点愈合角膜行内皮细胞台盼蓝-茜素红联合活细胞染色及HE染色,观察内皮细胞损伤、修复及白细胞浸润情况.结果:无论是全层缝合还是板层缝合以及不缝合组角膜内皮细胞均损伤明显.但从第1天观察至1月,三组损伤区面积大小无明显差别.结论:全层和深板层缝合及未缝合组可直接造成角膜内皮细胞受损,继发性炎症反应损伤后角膜内皮细胞的损害；伤口周围1.5 mm处角膜内皮几乎损失殆尽,内皮细胞受损可使角膜损伤区水肿迁延不愈,终形成瘢痕愈合,所以角膜内皮损伤及终愈合程度三组间无明显差异.
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台盼蓝染色在白内障撕囊术中的应用
目的探讨0.1%台盼蓝(Vision blue)染色在缺乏眼底红光反射条件下的白内障超声乳化术中连续环形撕囊的有效性、安全性及操作注意点.方法 21例21只眼,采用前房空气泡下染色法,4号钝针头抽取Vision blue 0.1～0.2ml,自辅助切口注入到前囊膜中央表面,留置2～3 s灌注液置换出空气和多余染料,应用撕囊镊完成连续环形撕囊操作.结果 19眼前囊膜1次均匀着色,2眼经过2次染色后着色均匀,撕囊全部成功顺利,在后续的超声乳化手术中保存的囊袋边界清晰,完整率为100%(21/21),术后无并发症,术后随访1年未见与染色有关的副作用及并发症.结论台盼蓝染色是1种简单安全的技术,提高了前囊膜的可见度,有助于术中的连续环形撕囊和整个手术的安全顺利进行.
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台盼蓝染色技术在内眼手术中的研究与应用
台盼蓝(Trypan Blue)是一种良好的内眼手术染色剂,可有效的将晶状体前囊膜、视网膜前膜及视网膜内界膜等膜组织染色,目前已广泛的应用于临床.本文就台盼蓝的基本特性、台盼蓝对角膜内皮和视网膜的毒性研究、台盼蓝染色在内眼手术中的临床应用做一综述.
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台盼蓝辅助的小切口白内障囊外摘除联合人工晶体植入术治疗过熟期白内障的临床观察
目的:评价台盼蓝辅助的小切口白内障囊外摘除联合人工晶体植入术治疗过熟期白内障的手术要点及临床效果.方法:对56例(58只眼)过熟期白内障行小切口白内障囊外摘除联合人工晶体植入术,手术中使用台盼蓝辅助染色,观察撕囊过程及术后疗效.结果:58只眼中54只眼完成连续环形撕囊,3只眼行截囊术,57只眼植入人工晶体;1只眼行白内障囊内摘除术,未植入人工晶体.术后视力(矫正)均有提高,术后3 d视力＞0.3者48只眼(85.1%),术后7 d视力＞0.5者53只眼(91.4%).结论:台盼蓝辅助的小切口白内障囊外摘除联合人工晶体植入术对于过熟期白内障安全有效,完成连续环形撕囊是手术的关键.
