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人脱细胞羊膜与体外培养大鼠血管平滑肌细胞的生物相容性
目的 了解人脱细胞羊膜(HAM)的细胞相容性;观察以HAM为生长载体,复合大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)构筑组织工程膀胱的可能性.方法 用物理和酶消化方法处理人羊膜,将大鼠VSMCs与HAM进行体外复合培养,分别进行组织学、相差显微镜和扫描电镜观察.将20只大鼠随机分为两组后行半膀胱切除术,实验组10只行半膀胱切除后用复合大鼠VSMCs的HAM进行修补,另外10只以单纯的HAM修补.分别于术后2、4、8周测定膀胱容量并取膀胱进行组织学观察.结果 经物理和酶处理的HAM纯度高,孔隙多,胶原纤维未受损;VSMCs在HAM上可黏附生长,并能长人材料的孔隙内.应用HAM行大鼠膀胱重建术后,实验组与对照组膀胱大容量(Volmax)比较无显著性差异.组织学观察显示,2周时HAM即已吸收降解,膀胱移行细胞和平滑肌细胞开始形成,炎性反应明显;实验组膀胱平滑肌比对照组厚且规则.4周和8周时实验组和对照组膀胱均与正常膀胱组织无明显区别.结论 HAM的细胞相容性良好,不影响VSMCs的形态,作为膀胱移植物进行膀胱修补吸收降解迅速,可用做组织工程膀胱的支架材料进一步研究.
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脱细胞羊膜在结膜囊成形术中的研究与应用
目的 研究脱细胞羊膜组织补片在结膜囊成形术中的临床效果.方法 对46例(46眼)羟基磷灰石义眼台植入术后结膜囊狭窄进行结膜囊成形术.随访观察6～18月,平均11月.结果 16例均获得良好效果.3月后组织补片呈正常结膜色泽外观,且稳定.无感染、坏死及排异等发生.配戴义眼片后患眼外形满意.结论 采用脱细胞羊膜组织补片进行结膜囊成形术,取材方便、手术安全、疗效可靠.
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台盼蓝染色脱细胞羊膜在结膜囊成形术中的应用
由于各种原因引起的结膜囊变浅、变小而使义眼不能置入者，安装义眼时需行结膜囊成形术。我们采用脱细胞羊膜（Amnion extracellular matrix，AECM）加台盼蓝囊膜染色剂染色对羟基磷灰石（hydroxyapatite , H A）眼胎植入术后结膜囊狭窄患者行结膜囊成形术，取得了满意的疗效。现报告如下。
1材料和方法
1.1一般资料：本组92例（92眼），年龄平均38.5岁。其中男性56例，女性36例。H A眼胎植入原因：外伤68例，眼内炎10例，绝对期青光眼8例，视网膜母细胞瘤6例。HA眼胎植入时间长16月，短6月，平均10月。结膜囊狭窄Ⅰ度54例，Ⅱ度38例。本组术后随访观察6～18月，平均11月。 -
小肠黏膜下层与脱细胞羊膜促进大鼠损伤皮肤修复及血管形成的作用
目的：探讨小肠黏膜下层及脱细胞羊膜在促进大鼠皮肤损伤修复和血管形成中的作用。方法取SD大鼠60只，于每只背部两侧各做一个1．5 cm ×1．5 cm大小全层皮肤缺损，至深筋膜。将大鼠随机分为3组，A组创面采用小肠黏膜下层细胞覆盖，B组创面以双层脱细胞羊膜覆盖，C组创面以等渗生理盐水纱布覆盖。观察各组创面愈合情况，在1～4周时将动物处死并取材，HE染色下观察并计数炎症细胞数，免疫组化SP法染色下观察血管内皮细胞数目。结果1周时，与C组相比，A、B组敷料与缺损创面贴合紧密，与纱布无粘连，更换敷料时创面无渗血。各时间点，A、B组创面组织内炎症因子数均明显低于C组（ P均＜0．05），而A组与B组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。1～3周时，A、B组血管内皮细胞数明显高于C组（P均＜0．05），而A组与B组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论应用小肠黏膜下层细胞及及脱细胞羊膜来覆盖皮肤缺损创面，均可减少创面的出血及渗出，减轻局部炎症反应，促进内皮细胞增殖及新生血管形成，具有加快创面愈合的作用。
关键词： 小肠黏膜下层 脱细胞羊膜 皮肤 血管内皮细胞生长因子 -
脱细胞羊膜预防生物衍生肌腱修复鸡屈趾肌腱Ⅱ区缺损修复后的粘连
背景:羊膜有预防肌腱修复后粘连的作用,但存在一定的免疫排斥反应.目的:探讨脱细胞羊膜对生物衍生肌腱修复鸡屈趾深肌腱Ⅱ区缺损修复后肌腱粘连的预防作用.方法:分别以罗曼鸡右爪的第2,3,4趾将实验分成生物衍生肌腱组,生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组以及自体肌腱组,建立屈趾深肌腱Ⅱ区1 cm缺损模型.以生物衍生肌腱桥接第2,3趾缺损,以自体肌腱桥接第4趾的肌腱缺损,在第3趾的生物衍生肌腱和上下吻合口周围包裹完整的脱细胞羊膜.结果与结论:生物衍生肌腱组与自体肌腱组移植物为外源性愈合,生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组羊膜有效地防止了成纤维细胞向修复区域内浸润,形成内源性愈合.肌腱粘连程度生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组优于生物衍生肌腱组和自体肌腱组,生物衍生肌腱组和自体肌腱组相似,移植物周围的炎症反应生物衍生肌腱+脱细胞羊膜组>生物衍生肌腱组>自体肌腱组.证实脱细胞羊膜能通过机械性阻挡周围肉芽组织向修复区域内生长而防止外源性愈合造成的肌腱粘连.
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脱细胞羊膜与医用膜修复腱鞘缺损防治肌腱粘连的比较
背景：实验证实生物膜可用于腱鞘缺损的重建，抑制肌腱外源性愈合，为肌腱滑动提供良好的基床，减轻肌腱粘连。
目的：比较脱细胞羊膜与医用膜修复腱鞘缺损中防治肌腱粘连的作用。
方法：于66只来亨鸡双足第Ⅲ趾制备肌腱损伤、腱鞘缺损模型，随机分为3组，每组22只，羊膜组采用脱细胞羊膜修复腱鞘缺损，医用膜组采用可吸收医用膜修复腱鞘缺损，对照组不修复腱鞘。术后2，4，8，12周取各组标本，进行大体、组织学及生物力学检测。
结果与结论：①大体观察：术后12周，羊膜组、医用膜组腱鞘完整，肌腱愈合良好，无粘连；对照组肌腱粘连严重。②组织学：术后8周，羊膜组假鞘中滑膜细胞数多，基质内粗面内质网高度扩张，分泌旺盛，医用膜组次之，对照组滑膜细胞数少，分布杂乱，基质内扩张空泡较前两组弱。术后12周羊膜组、医用膜组成纤维细胞层状整齐排列，结构致密；对照组腱鞘组织结构疏松，成纤维细胞分布絮乱。③生物力学：羊膜组、医用膜组肌腱滑动距离、总屈趾角度均大于对照组(P<0.05)，前两组间比较差异无显著性意义。术后12周，3组间大拉伸断裂强度比较差异无显著性意义。④结果表明，脱细胞羊膜与医用膜重建腱鞘缺损均能明显屏障肌腱外源性愈合，防治肌腱粘连。 -
新鲜羊膜与脱细胞羊膜修复腱鞘缺损预防肌腱粘连
背景:羊膜独有的结构可阻止某些物质通过,能保证包裹内组织正常营养供应,而且具有抗粘连、组织相容性好、炎性反应轻、纤维包裹少及可降解等特性.目的:比较新鲜羊膜及脱细胞羊膜修复腱鞘缺损,预防肌腱粘连和促进肌腱愈合的作用.方法:取60只雄性来亨鸡,制作双足第三足趾制备肌腱及腱鞘损伤模型,随机分为3组修复,新鲜羊膜组采用新鲜人羊膜修复腱鞘缺损,脱细胞羊膜组采用人脱细胞羊膜修复腱鞘缺损,对照组不做腱鞘修复.修复后进行第三足趾组织学观察及生物力学测试.结果与结论:①组织学观察:修复后2周,3组均存在充血水肿及炎症反应,新鲜羊膜组轻,对照组严重,3组水肿及炎症反应随时间延长逐渐减轻.修复12周,各组假鞘较修复后4周明显成熟,新鲜羊膜组及脱细胞羊膜组假鞘表面细胞致密层状排列整齐,表面光滑;对照组假鞘表面细胞排列紊乱,结构松散,可见表面纤维组织突出假鞘表面;②生物力学测试:脱细胞羊膜组、新鲜羊膜组修复后4,8,12周的肌腱滑动距离均大于对照组(P<0.05),前2组间比较差异无显著性意义;脱细胞羊膜组、新鲜羊膜组修复后4,8周的肌腱大拉伸断裂强度高于对照组(P<0.05),且新鲜羊膜组高于脱细胞羊膜组(P<0.05),3组修复后12周的肌腱大拉伸断裂强度无差异;③结果表明:新鲜羊膜和脱细胞羊膜均可用于重建腱鞘缺损,预防肌腱粘连,新鲜羊膜在促进早期肌腱愈合方面优于脱细胞羊膜.
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人脱细胞羊膜负载大鼠骨髓间充质干细胞构建组织工程膀胱的研究
目的 探讨人脱细胞羊膜(Human acellular amniotic membrane ,HAAM)负载大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)进行膀胱替代修复的可能性.方法 用去污剂洗涤和酶消化方法 制备HAAM.将大鼠MSCs在体外培养、扩增、传代.取第4代干细胞用1%二甲亚砜(DMSO)预诱导8 h,然后应用膀胱匀浆上清液诱导7 d.将诱导分化后的MSCs接种于HAAM表面进行短暂体外培养,获得组织工程膀胱.将雄性大鼠60只随机分为3组,行半膀胱切除术,然后分别采用负载干细胞后的HAAM(A组)、HAAM(B组)以及单纯缝合(C组)的方法 进行修补,每组20只.分别于术后2、4、8 w测定膀胱容量、进行膀胱造影并取材观察组织再生情况.结果 去污剂洗涤联合酶消化法能有效去除人羊膜中的细胞成分,光镜及电镜观察无细胞成分残留,细胞相容性好.大鼠膀胱重建术后,A、B两组与C组膀胱大容量(Volmax)比较有极显著性差异(P＜0.01),而A、B两组之间膀胱大容量比较无显著性差异(P＞0.05).组织学观察,2 w时HAAM即已吸收降解,膀胱移行细胞和平滑肌细胞开始形成,A组吻合修补区较厚,平滑肌细胞规则且丰富.结论 HAAM作为膀胱移植物进行膀胱修补吸收降解迅速,负载MSCs后构建的组织工程膀胱是理想的替代修补材料.
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人脱细胞羊膜移植物用于兔膀胱切除修复的研究
目的:探讨人脱细胞羊膜(HAM)移植物用于兔膀胱重建的效果.方法:用物理和酶消化方法制备人脱细胞羊膜,将12只兔行半个膀胱切除后用人脱细胞羊膜移植物进行修补,另外6只兔行半个膀胱切除后单纯缝合作为对照.分别于术后2、4、8周测定膀胱容量并取膀胱进行组织学观察.结果:应用人脱细胞羊膜行兔膀胱重建术后,实验组与时照组2、4、8周膀胱大容量(Volmax)比较差异有显著性(P<0.05).与术前相比,实验组和对照组膀胱容量均缩小,差异有显著性(P<0.05和P<0.01).组织学观察,2周时人脱细胞羊膜即已吸收降解,膀胱移行细胞和平滑肌细胞开始形成,炎性反应明显;4、8周后膀胱的三层结构明显,炎性反应轻微,接近正常兔膀胱.而对照组仅2周时有轻微炎性反应,4、8周炎性反应消失.膀胱三层结构均正常.实验组大多数重建膀胱均有结石形成(8/11),对照组仅1例结石形成(1/6).结论:人脱细胞羊膜作为膀胱移植物进行膀胱修补吸收降解迅速,移行细胞和膀胱平滑肌细胞可在移植物支架上再生,可以用做组织工程膀胱的支架材料进一步研究.
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脱细胞羊膜制备及生物学评价
目的:制备脱细胞羊膜,经过干燥、辐照灭菌,生物学试验,评价脱细胞羊膜作为眼表损伤修复材料的安全性,为建立产业化的行业标准提供依据.方法:在洁净无菌环境下新鲜羊膜经冲洗处理后,胰蛋白酶酶解,细胞刮子去除细胞,干燥、辐照灭菌,根据GB/T 16886-ISO 10993系列标准方法进行生物学评价试验.结果:制备的脱细胞羊膜为白色半透明膜,HE染色,光学显微镜观查无上皮细胞残留,生物学检测结果无菌、细菌内毒素、细胞毒性、皮肤刺激、眼刺激反应、皮下植入试验,符合三类医疗器械评价标准.结论:在洁净无菌环境下制备的脱细胞羊膜,作为眼表损伤修复材料是安全性的,可根据该标准方法对其进行质量控制,实现产业化.
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快速培养纯化猪角朊细胞及复合羊膜体外培养实验研究
目的研究快速培养和纯化猪角朊细胞的方法及观察角朊细胞在脱细胞羊膜上的生长状况,为组织工程皮肤研究提供实验依据.方法采用加10%胎牛血清的人无血清角朊细胞培养基(defined keratinocyte-SFM,DKSFM)培养原代猪角朊细胞,分别用DKSFM(A组)、加5%胎牛血清的DKSFM(B组)、加10%胎牛血清的DKSFM(C组)培养传代猪角朊细胞,于接种后1、3、5和7 d观察猪角朊细胞的形态及生长曲线.利用猪角朊细胞与培养瓶黏附牢固的特点,用0.02%乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)和0.05%胰蛋白酶分步消化,纯化细胞.将第2代猪角朊细胞接种在冻干脱细胞羊膜上,直接苏木素染色、石蜡切片、免疫组织化学染色等方法观察猪角朊细胞在脱细胞羊膜上的生长状况.结果采用加10%胎牛血清的DKSFM培养原代猪角朊细胞,细胞生长速度快,形态好,培养5 d铺满培养瓶底60%～70%.B组培养的传代猪角朊细胞生长速度较C组培养猪角朊细胞生长速度快.A组培养传代的角朊细胞,细胞生长缓慢.用0.02%EDTA和0.05%胰蛋白酶分步消化的方法纯化猪角朊细胞,可获得纯度为95%以上的猪角朊细胞.将第2代猪角朊细胞接种在脱细胞羊膜后12 d,可形成单层细胞,呈多角形、铺路石样排列;14 d和16 d细胞进一步密集,16 d细胞出现老化.结论 10%胎牛血清的DKSFM培养原代猪角朊细胞,5%胎牛血清的DKSFM培养传代猪角朊细胞,细胞生长速度快.用0.02%EDTA和0.05%胰蛋白酶分步消化的方法纯化猪角朊细胞,可以获得高纯度猪角朊细胞.脱细胞羊膜为猪角朊细胞提供良好的支架,接种培养后12 d,细胞形态好.
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脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层修复猪创伤性皮肤缺损的比较研究
目的比较脱细胞羊膜与脱细胞小肠黏膜下层作为创伤性皮肤缺损覆盖物,对创面修复的效果.方法 7只四川长白小猪,每只猪背部两侧各做3个4 cm×4 cm大小的皮肤缺损,深达深筋膜.每侧缺损随机分为3组,用不同敷料覆盖.A组:双层脱细胞羊膜;B组:双层脱细胞小肠黏膜下层;C组:空白,生理盐水纱布覆盖.术后观察创面局部情况、创面愈合率,10 d(2只,各组4个皮肤缺损)、20 d(2只,各组4个皮肤缺损)、30 d(3只,各组6个皮肤缺损)处死动物取材.行组织学观查,炎性细胞、血管内皮细胞及增殖细胞计数,羟脯氨酸含量测定.结果A、B组覆盖的敷料与创面黏附紧密,与纱布无粘连,更换敷料时创面无渗血.C组纱布与创面黏附紧密,术后22 d前更换纱布时创面出血.组织学观察:术后各时间点A、B组皮下组织内炎性细胞数较C组少;C组皮下组织内胶原分布较A、B组紊乱.术后各时间点A、B组创面愈合率较C组高,差异有统计学意义(P＜0.05);C组术后各时间点炎性细胞计数、皮下组织及肉芽组织内增殖细胞数明显高于A、B组,术后20、30 d,羟脯氨酸含量高于A、B组,差异有统计学意义(P＜0.05);3组内皮细胞计数,差异无统计学意义(P＞0.05).A、B组创面局部情况、创面愈合率、病理组织学检查、炎性细胞数计数、血管内皮细胞计数、增殖细胞计数和羟脯氨酸含量,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论采用脱细胞羊膜、脱细胞小肠黏膜覆盖创伤性皮肤缺损,有提高创面愈合率、减少炎性反应,控制皮下组织及肉芽组织中细胞增殖,使胶原纤维有序排列的作用,能减少创面组织的出血和渗出.脱细胞小肠黏膜覆盖创面具有与脱细胞羊膜覆盖创面相近的修复效果.
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染色脱细胞羊膜在Ⅱ期义眼座置入并结膜囊成形术中的应用
探讨Ⅱ期义眼座直接置入联合染色脱细胞羊膜移植治疗结膜囊狭窄临床应用的可行性及疗效.方法:对38例(38只眼)眼球摘除术后眼窝内陷、结膜囊狭窄患者行Ⅱ期羟基磷灰石义眼座置入,同时用染色脱细胞羊膜移植治疗结膜囊狭窄.结果:术后随访3月,38例(38只眼)无1例感染.2周后,移植的羊膜透明,缝合处结膜向羊膜上爬行；1个月后新生的结膜上皮完全覆盖移植区.无义眼座暴露及脱出,无羊膜溶解及排斥反应发生.术后均能安装义眼.结论:Ⅱ期义眼座直接置入联合染色脱细胞羊膜移植结膜囊成形术是一种取材简便,方法简单,疗效肯定的手术方法.
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脱细胞羊膜在结膜囊成形术中的应用
由于各种原因引起的结膜囊变浅、变小而使义眼不能置入者,安装义眼时需行结膜囊成形术.笔者2006年10月～2008年10月,采用脱细胞羊膜(Amnion extracellular matrix,AECM)对羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)眼台植入术后I～II度结膜囊狭窄者行眼结膜囊成形术,取得了满意的疗效.现报道如下.
