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紫杉醇遗传毒性研究
目的 探讨紫杉醇的遗传毒性作用.方法 进行Ames试验,小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验,对中国仓鼠肺细胞(CHL细胞)进行细胞毒性试验,并根据细胞毒性试验结果,在加和不加代谢活化系统的条件下,用CHL细胞进行体外哺乳动物细胞染色体畸变试验.结果 Ames试验结果为阴性;小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验中,30.0 mg/kg· BW剂量组雌、雄小鼠微核率分别为20.4‰和20.0‰,与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);细胞毒性试验中,5 000、1 667、556、185、62、21和7μg/ml剂量组RGR值分别为56.7％、63.6％、72.7％、73.2％、82.5％、89.2％和93.2％,显示紫杉醇有细胞毒性;在加和不加代谢活化系统的条件下5 000、1 667和556μg/ml剂量组致CHL细胞染色体畸变率分别为42.33％、27.67％、22.33％;39.33％、26.00％和20.33％,与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 紫杉醇对原核细胞未显示致突变作用,在真核细胞体内和体外实验中均显示对染色体具有损伤作用.
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基于U251细胞的急性毒性体外检测方法
目的 建立基于人神经胶质瘤细胞系U251细胞的急性毒性体外检测方法,初步评估其预测化学品急性毒性的能力.方法 体外培养U251细胞,对11种已知急性毒性的化学物质进行中性红摄取试验,获得不同浓度受试物与细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性(IC50)与急性毒性(LD50)的关系,并与Registry Cytotoxicity(RC)模型曲线进行比较;对21种化学品进行中性红摄取试验,根据RC模型预测急性毒性LD50值,并对其进行急性毒性分级,将分级结果与体内急性经口毒性试验分级结果进行比较.结果 与U251细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性IC50与相应的急性毒性LD50存在相关性(R242h =0.857,R482h=0.895,R722h=0.929;P＜0.05),且结果回归模型在RC模型可接受区间内,本试验体系可应用RC模型预测急性毒性;21种化学品的急性毒性LD50预测值与体内急性毒性LD50值进行比较,分级一致率分别为76.2％ (24 h,16/21)、66.7％ (48 h,14/21)和71.4％ (72 h,15/21).结论 在本试验体系下,U251细胞中性红摄取试验能够较好的预测化学品急性毒性.
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包埋紫杉醇的Pluronic P85/聚乳酸纳米粒子制备及体外释放行为考察
目的:制备包埋紫杉醇的Pluronic P85/聚乳酸(PLA-P85-PLA)纳米粒子并考察其形态及体外释放行为.方法:采用本体聚合法合成PLA-P85-PLA嵌段共聚物,透析法制备PLA-P85-PLA纳米粒子,UV测定包封率及载药量,HPLC测定紫杉醇的体外释放行为,MTT测定纳米粒子的生物相容性.HPLC条件为流动相乙腈-PBS(50∶50),检测波长227 nm.结果:包埋紫杉醇的PLA-P85-PLA纳米粒子粒径140 nm,包封率56％,载药量9.4％,体外释放在前20 h呈快速释放形式,接着在长达近4d的时间内呈现缓慢释放,且仅约12％被包埋的紫杉醇释放出来,包埋紫杉醇的PLA-P85-PLA纳米粒子处理的OVCAR-3细胞存活率(41％)明显低于空白紫杉醇(70％).结论:PLA-P85-PLA嵌段共聚物是良好的药物载体,可用于包埋疏水性强的抗癌药物.
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应用微量淋巴细胞毒与流式细胞仪检测HLA-B27的比较
目的:探讨不同HLA-B27检测方法之间的差异及各自的优缺点,为临床检验提供参考.方法:分别采用微量淋巴细胞毒法及流式细胞仪法检测134例血标本的HLA-B27抗原,将两者结果进行比较分析.结果:两种检测方法结果符合率为94.8%.微量淋巴细胞毒法检测强直性脊柱炎者HLA-B27阳性率为89.5%,对照组阳性率11.0%,符合国内外大样本调查结果.结论:两种检测方法均准确可靠,适合于有条件的医院开展.
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雾化吸入γ-干扰素对免疫低下大鼠肺部抗感染能力和细胞免疫的影响
随着免疫低下患者日益增多。由此造成的难治性呼吸系统感染已经成为这些患者的主要死亡原因。目前认为免疫低下宿主肺部细胞免疫功能低下主要是因为缺乏淋巴细胞源性细胞因子。我们撰文旨在探讨通过雾化吸入的方法补充肺局部γ-干抗素1(IFN-γ)水平，对免疫低下大鼠肺部抗感染能力和细胞免疫状态的影响。 材料和方法复制免疫低下并支气管-肺炎大鼠模型［1］。吸入IFN-γ组于气管内注射白色念珠菌的前1天开始，雾化吸入IFN-γ 10 000 IU，每日1次，至实验结束。对照组每日吸入等体积生理盐水。检测各组大鼠肺泡巨噬细胞（AM）的吞噬及杀菌功能（白色念珠菌法［2］）、Ⅰa抗原表达（间接免疫荧光法）、AM培养上清中TNF-α活性（L929细胞毒性试验［3］），第7天进行左肺白色念珠菌培养计数以及血清IFN-γ活性（L929细胞病变抑制试验［4］）、血淋巴细胞杀伤功能检测（51Cr释放试验［5］）。白色念珠菌计数以中位数表示，采用秩和检验处理数据；其余数据以均值±标准差表示，采用t检验处理各组数据。
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非清髓性方案在诱导大鼠后肢移植免疫耐受中的应用
目的 探讨基于淋巴细胞毒性相关抗原4-抗体重组腺病毒(AdCTLA4-Ig)的非清髓性方案在造血干细胞嵌合体诱导复合组织异体移植免疫耐受中的作用.方法 以近交系Brown Norway(RT1n)大鼠为供体,Lewis(RT11)大鼠为受体.以后肢移植当天记为day 0.实验分4组,A组:受体直接给予同种异体后肢移植,移植前不进行非清髓件预处理,移植后连续100 d,每天仅给予低剂量环胞素A(CsA),8 mg/kg腹腔注射.B组:受体先给予非清髓性预处理,移植前第33天至移植后第100天,每日用免疫抑制剂三联方案腹腔注射雷帕霉素(RAPA,0.2 mg/kg)+麦考(MMF,20 mg/kg)+甲泼尼龙(MP,10 mg/kg),在移植当日及移植前及移植后第30天分3次尾静脉注射AdCTLA4-Ig(5×109 PFU/d),后肢移植前30 d接受单次3 Gy(照射率0.5 Gy/min)低强度全身照射,不予骨髓移植(BMT).C组:受体预处理方案同B组,移植前30 d,在低强度全身照射后4 h内给予单次尾静脉注射供体骨髓细胞(100×106 cells).D组:受体预处理方案及BMT方法同C组,但大鼠后肢移植供体为第三方动物WF大鼠.在后肢移植后第100天开始,B、C及D组均停止免疫抑制剂三联方案,每日仅给予低剂量CsA(8 mg/kg),连续100 d,直至大鼠后肢移植物发生排异反应而坏死.通过外周血嵌合率检测、移植物抗宿主病检测、后肢移植物存活情况观察、移植物组织病理学检查与评价及混合淋巴细胞反应对免疫耐受状态进行分析评价.结果 C组外周血嵌合率移植当口为(38.8±10.6)%,并长期保持稳定,移植后第300天为(29.3±11.9)%,均未发生移植物抗宿主病,停止免疫抑制剂三联方案后移植物存活>200 d,A、B、D组均发生免疫排异,后肢移植物分别存活(8±2)、(18±3)及(20±2)d,与C组相比,差异有统计学意义(P<0.01).C组移植物病理学检查显示无毛囊炎及血管周围炎等慢性免疫排异现象,混合淋巴细胞反应显示为供体特异性免疫耐受状态.结论 基于AdCTLA4-Ig的非清髓性BMT方案可以诱导长期稳定的造血干细胞嵌合体状态,并可以诱导受体对大鼠后肢移植物的供体特异性部分性免疫耐受.
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通过检测包被HLA抗体Luminex微球上补体C4d沉积预测心脏移植后移植物失功
器官移植时受体中存在供体(donor specific antibody,DSA)特异性抗体会导致快速的体液排斥反应.至今为止,检测受体中供体特异性抗体存在的经典方法是供体白细胞补体依赖性的细胞毒性试验(CDC).近几年来,采用包覆人类白细胞抗原(HLA)的多孔塑料板或微球等固相检测法可以更加敏感地检测到移植受体HLA抗体的存在.但这种检测法无法分辨这些抗体是否为补体依赖性的,因此其在临床中的实际应用价值仍不确定.英国皇家医学院移植免疫的相关研究人员采用了一种新的方法来检测Luminex微球上补体C4d结合的HLA抗体从而发现特异性抗体的存在.
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Penner 19空肠弯曲菌毒素的细胞毒性作用研究
目的探讨Penner 19空肠弯曲菌毒素(CJT)对细胞毒性的影响.方法 (1)应用CHO及Vero细胞检测CJT毒性效应,以及CJT抗血清和GM1中和/抑制作用;(2) ELISA检测CJT结合GM1、CHO细胞受体,评价CJT抗血清及GM1中和或抑制作用.结果 (1)CJT对CHO和Vero细胞均具毒性,效应低CJT量均为3.125 mg/L,细胞变形率分别为(57.3±5.6)%及(58.6±5.2)%,变形细胞中死亡率分别为(53.8±6.2)%及(37.2±6.9)%.对照组细胞变形率分别为(8.6±2.1)%及(7.3±2.4)%,显著低于CJT组(P＜0.01).(2)与GM1呈阳性反应的CJT低量为1.563 mg/L,吸光度差值(P-N)为0.24±0.01(P＞0.20).(3)CJT抗血清可中和CJT毒性效应,其1∶8及1∶1倍稀释时,细胞变形率分别＜50%和＜10%,与对照组比较差异有显著意义(P＜0.01).(4)GM1由0.01增至0.08 μg/100 μl时,CJT致细胞形变率逐渐下降,继续增加GM1剂量(0.08～0.64 μg/100 μl),细胞变形率却维持不变,且始终大于50%.(5)CJT结合CHO于作用后3 min明显.CJT抗血清及GM1均可导致CJT结合CHO细胞能力减低.CJT抗血清完全抑制;而GM1部分抑制.结论 CJT对细胞可产生形态及致死性变化,在其毒性损伤过程中,除GM1受体外,还应有其他受体参与毒性反应的启动过程.
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阿司匹林对胃癌细胞株SGC-7901作用的相关机理研究
目的:探讨阿司匹林(ASA)对胃癌细胞株SGC-7901作用的相关机理,为寻找其新的药物用途奠定理论基础.方法:用MTT法检测药物对细胞的抑制率;用流式细胞仪测定细胞周期;用琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡;3H-TdR同位素示踪测定细胞DNA合成.结果:ASA对SGC-7901细胞株的细胞作用具有量效和时效依赖关系.ASA对细胞DNA合成有抑制作用,并可使SGC-7901细胞周期中S期及G2/M期比例升高,G1期比例下降,呈一定的剂量效应关系.琼脂糖凝胶电泳结果未见典型的阶梯状凋亡条带.结论:阿司匹林对SGC-7901细胞株存在着细胞毒作用,其细胞毒作用可能与抑制DNA的合成、阻止细胞周期有关系.
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MTT法评价镓合金的细胞毒性
目的研究新型不含汞的牙体充填材料镓合金的细胞毒性。方法采用一种能快速评定细胞增殖率和细胞毒性的比色分析方法——MTT比色法，检测镓合金和高铜银汞合金对小鼠成纤维细胞L929细胞相对增殖率的影响，评价其细胞毒性。结果参照上海市医用生物材料生物性能测试标准，镓合金表现出较高的细胞相对增殖率，2 d时为93.0%±4.9%,4 d时为102.0%±3.5%,7 d时为107.2%±4.2%, 其细胞毒性为0级，即无明显细胞毒性；高铜银汞合金表现为中度细胞毒性。结论镓合金无明显的细胞毒性。
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Ceramicrete根管倒充填材料的生物学性能评估
目的 体外评估Ceramicrete根管倒充填材料的细胞毒性和生物学活性,以期为临床应用提供实验室基础.方法 采用甲基噻唑基四唑(MTT)实验评估Ceramicrete根管倒充填材料对大鼠成骨样细胞ROS 17/2.8的细胞毒性.透射电子显微镜观察不同阶段细胞超微结构的形态学变化.扫描电子显微镜观察Ceramicrete根管倒充填材料浸泡于模拟体液中24 h的形态学变化.结果 第1阶段ROS17/2.8细胞表现为重度毒性,细胞相对增值率为0.95％～2.45％；随后细胞毒性呈下降趋势,第2阶段为轻度毒性,细胞相对增值率为73.65％ ～ 88.62％；第6阶段无细胞毒性,细胞相对增值率为91.53％ ～ 97.25％.透射电镜下细胞的超微结构变化显示细胞损伤程度与MTT实验一致；扫描电镜下观察到在模拟体液中Ceramicrete倒充填材料表面有成簇的针状晶体生长.结论 Ceramicrete 根管倒充填材料具有良好的生物相容性和潜在的生物学活性.
关键词： 根管充填 细胞毒性试验 免疫 Ceramicrete 生物学活性 -
铸造钴铬合金含银抗菌涂层表面性能及体外细胞毒性研究
目的 检测钴铬合金含银抗菌涂层的表面性能及细胞毒性,为其临床应用提供依据.方法 于钴铬合金表面应用等离子喷涂技术制备含银抗菌涂层(涂层组),通过扫描电镜、能谱分析及X射线衍射分析表面性能.以常规铸造的钴铬合金试件为合金对照组,利用甲基噻唑基四唑法测试涂层组合金浸提液(分为25％、50％、75％和100％亚组)和合金对照组浸提液以及阴性对照组(新鲜培养液)对小鼠成纤维细胞L929增殖的影响(培养1、2、3d)；用流式细胞术测试阴性对照组、涂层组和合金对照组培养48 h后L929细胞周期的差异.结果 涂层表面均匀致密,与基底材料未见明显间隙,表层主要物相为Ag、Cr和少量的Ag2O、Cr2O3.细胞培养1、2、3d后,阴性对照组、各涂层亚组和合金对照组A值差异无统计学意义(P＞0.05)；阴性对照组各时间点毒性评级均为0级,各涂层亚组和合金对照组各时间点毒性评级均为1级.涂层组G2期细胞周期比例为(8.23±0.39)％,合金对照组G2期细胞周期比例为(8.70±0.46)％,两组间差异无统计学意义(P＞0.05),显著低于阴性对照组[(24.15±0.71)％].结论 钴铬合金含银涂层结构稳定,与临床常用钴铬合金相比,对L929细胞的增殖及细胞周期影响无明显差异,细胞相容性良好.
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配色颜料-硅橡胶复合体的细胞毒性试验和溶血试验
目的: 研究油画类赝复配色颜料加入SY-1硅橡胶后的细胞毒性和溶血性能.方法: 采用分子滤过法对颜料-硅橡胶复合体进行细胞毒性评价;采用分光光度计测定由试验材料所引起的新鲜抗凝兔血细胞红细胞溶解和游离血红蛋白程度.结果:在复合体与细胞材料相接触区域试验滤纸的外观呈现蓝染,与其它单层细胞区域相比较,染色密度无差异.细胞毒性评级为0级;复合体溶血率小于5%,不会引起急性溶血.结论: 配色颜料-硅橡胶复合体在细胞毒性和急性溶血方面,具有良好的生物安全性.
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有色氧化铝玻璃复合体的细胞毒性试验和敏感试验
目的:研究有色氧化铝玻璃复合体修复体的细胞毒性反应和皮肤致敏性.方法:采用分子滤过法对有色氧化铝玻璃复合体进行细胞毒性评价,通过豚鼠皮内注射试验试液,经诱发和加强及过敏激发后观察局部组织的过敏现象.结果:在细胞材料相接触区域试验滤纸的外观呈现蓝染,与其它单层细胞区域相比较,染色密度无差异.细胞毒性评级为0级.20只豚鼠均未见有明显红斑或水肿发生,评定有色氧化铝玻璃复合体的小鼠皮肤过敏率为0%.结论:有色氧化铝玻璃复合体材料无细胞毒性和皮肤致敏性.
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采用三维细胞培养的牙本质屏障细胞毒性试验研究
目的：采用牙本质屏障法对4种常用的牙体充填材料和2种牙本质粘接剂进行细胞毒性试验，并与传统的滤膜扩散法进行比较，从而探讨牙本质屏障法的优势。方法：选取丁香油水门汀、磷酸锌水门汀、粘结用玻璃离子水门汀、复合树脂和两种自酸蚀粘接剂（ REMI BOND与Adper Easy One）进行试验。牙本质屏障法中将L929细胞立体培养于聚苯乙烯网状支架上，切取人第三磨牙近髓牙本质片，用液压通透装置测量其通透性，选取试验区域内通透值相近的牙本质片进行试验。将长满细胞的网状支架置于细胞培养分隔灌注小室的“牙髓腔”，牙本质片（“牙髓面”）紧贴网状支架放置其上，试验材料和对照与牙本质片的“牙合面”接触24 h后用MTT法测量细胞的光密度值（ D540 nm ），试验材料与阴性对照光密度值的百分比为材料的相对细胞存活率。使用非参数检验对结果进行统计学分析。滤膜扩散法中材料与有单层细胞生长的滤膜接触24 h后进行细胞染色、评级。结果：近髓牙本质片的平均通透值为0．293μL／（min· cm2· cmH2O）（1 cmH2O＝0．098 kPa）。牙本质屏障法中，丁香油水门汀降低细胞存活率至82％，REMI BOND与Adper Easy One分别降低细胞存活率至63％和54％，其余材料对细胞无损伤或损伤很低；滤膜扩散法中，光固化复合树脂为中度细胞毒性、牙科粘接用玻璃离子水门汀为轻度细胞毒性，其余材料均为重度细胞毒性；6种材料在牙本质屏障法中表现的细胞毒性明显低于滤膜扩散法的试验结果。结论：使用牙本质屏障法测得材料与三维培养的细胞接触后的细胞毒性比使用滤膜扩散法时的细胞毒性低，结果与临床实际相关性好。
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细胞因子激活骨髓免疫细胞的实验研究
目的:通过对骨髓单个核细胞在体外与不同细胞因子培养,了解不同细胞因子对骨髓淋巴细胞的激活能力和对骨髓干祖细胞的损伤情况.方法:将IL-1、IL-2、T-IFN、CD3单抗进行不同组合后,在体外与骨髓单个核细胞分成对照组、IL-2组、CD3-AK、CIK组进行培养.培养过程中观察细胞形态和数量的变化,并在培养后检测免疫活性细胞的细胞毒性和造血干细胞的保存情况.结果:培养过程中对照组细胞数量减少;IL-2组细胞数量变化不明显;CD3-AK组、CIK组细胞数量显著增多,并出现较多的集聚成簇的淋巴样细胞,培养后其细胞毒性明显强于对照组及IL-2组,但细胞数量增加和细胞毒性无明性差异.培养后各组造血干细胞保存情况约60%～87%.结论:IL-2、CD3单抗在体外与骨髓单个核细胞培养后,即能激活免疫细胞增殖,又能保留足够的造血干细胞.
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壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性研究
目的 了解壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞的毒性作用,为其治疗牙周病提供依据.方法 人牙龈成纤维细胞在不同浓度的壳聚糖温敏凝胶中体外培养24h、48h、72h、96h.用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),判断细胞毒性的级别.结果 各组细胞不同时间点相对增殖率均在96%～144%之间,各浓度的壳聚糖水凝胶材料浸提液的细胞毒性均为0级或1级,完全符合生物材料的安全评价标准.结论 壳聚糖温敏凝胶对人牙龈成纤维细胞无毒性,用于牙周病局部治疗具有进一步的研究价值.
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Hela细胞MTT试验作为眼刺激替代试验的研究
目的 探讨Hela细胞MTT试验(Hela-MTT)是否可作为家兔眼刺激试验(Draize test)的一种替代方法.方法 用该方法对22种化妆品的眼刺激性进行检测,并与1999年卫生部颁布的《化妆品卫生规范》和新颁布的《化妆品卫生规范》(2002版)测定的眼刺激试验大平均值(MASold和MASnew)分别进行相关性比较.结果 Hela-MTT和MASold、MASnew的相关系数分别为-0.811、-0.639.结论 Hela-MTT可作为替代方法用于眼刺激性的评价,是比较有潜力的眼刺激替代试验方法.
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5种垫料物质的细胞毒性研究
目的研究松木、麦秸、玉米秸、玉米芯和国外商品垫料5种垫料物质的细胞毒性作用.方法将五种垫料物质的丙酮提取物按1、3、5、10、20和40mg/ml的终浓度梯度加入到H22-H2D8细胞中,培养72h后用考马斯亮蓝法测定细胞的总蛋白量,计算细胞的半数致死量(LD50);用MTT法测定H22-H2D8细胞在492nm的吸光度值(A492),计算细胞的相对增值率,用6级毒性分类法进行毒性分级.结果松木的LD50<5mg/ml,麦秸、玉米秸、国外商品垫料的LD50<20mg/ml,玉米芯的LD50>40mg/ml.麦秸和商品垫料的细胞毒性为2～3级,松木的细胞毒性2～5级,玉米秸的细胞毒性为1～3级,玉米芯的细胞毒性为1～2级.在垫料提取物浓度为5mg/ml、10mg/ml时,麦秸组的A492值显著低于玉米秸组和商品垫料组的A492值(P<0.05),而玉米秸组和商品垫料组相比无显著差异(P>0.05);在浓度为20mg/ml、40mg/ml时,王米秸组的A492值大于麦秸组和商品垫料组的A492值(P<0.05),麦秸组和商品垫料组相比差异无显著性(P>0.05).结论松木的细胞毒性大,玉米芯的细胞毒性作用小,玉米秸、国外商品垫料、麦秸三种物质均显示有细胞毒性作用,但它们的毒性显著低于松木,高于玉米芯.
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雾化吸入γ-干扰素增强免疫低下大鼠肺部抗感染能力的研究
免疫低下患者日益增多，难治性呼吸系统感染是这些患者的主要死亡原因，且已成为临床医学的研究重点。本研究旨在探讨雾化吸入提高肺局部干扰素γ(IFN-γ)水平，对免疫低下大鼠肺部抗感染能力和细胞免疫的影响。 一、材料和方法 1.实验方法：（1）动物模型的制备、分组和标本留取：方法请参见参考文献［1］。（2）肺泡巨噬细胞（AM）的吞噬及杀菌功能检测：白色念珠菌法［2］。（3）AM的Ⅰa抗原表达：间接免疫荧光试验［3］。（4）AM培养上清和血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平检测：酶联免疫吸附(ELISA)法。（5）AM培养上清和支气管肺泡灌洗液（BALF）中肿瘤坏死因子(TNF)-α活性的检测：L929细胞毒性试验［4］。（6）血清和BALF中IFN-γ活性的检测：L929细胞病变抑制试验［5］。BALF的测定结果用小牛血清白蛋白的含量校正，以U/ml的形式表示。
