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应用3T3细胞中性红摄取试验预测化学物质急性毒性的探讨
目的 评价3T3细胞中性红摄取试验预测急性毒性的能力,探讨其替代急性经口毒性试验的可行性.方法 依据体外替代方法跨部门协调委员会( US ICCVAM)发布的3T3细胞中性红摄取试验标准操作规程检测50种化学物质的细胞毒性,将IC50结果与急性经口毒性试验的大鼠LD50值进行分析比较;IC50值代入RC预测模型获得急性毒性LD50预测值,并进行GHS急性毒性分级,将分级结果与急性经口毒性试验分级结果进行比较.结果 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性经口毒性试验LD50值存在相关性(Pearson r=0.802,P＜0.01);3T3细胞中性红摄取试验分级结果与急性经口毒性试验分级结果具有等级相关性(Spearman r=0.793,P＜0.01;Gamma =0.909,P＜0.01)和一致性(Kappa=0.545,P＜0.01),两者的分级一致率为72.0％( McNemar-Bowker W=5,P=0.082).结论 3T3细胞中性红摄取试验可较好地预测化学物质的急性毒性,是一种有效的体外快速筛查急性毒性的方法;可作为急性经口毒性试验起始剂量的参考,可望用于化学物质急性毒性分级的初步判断.
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影响卷烟烟气总粒相物细胞毒性测试的因素
目的 建立卷烟烟气总粒相物(TPM)的中性红细胞毒性测试方法.方法 采用体外培养细胞的中性红摄取试验,优化影响卷烟烟气TPM细胞毒性测试的几个因素(稀释培养液血清浓度、卷烟烟气TPM染毒时间和测试细胞).结果 高浓度的血清含羞将导致卷烟烟气TPM的毒性效应被低估;染毒24 h能更好地区分不同卷烟样品TPM的细胞毒性;中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)较人肺癌细胞系A549细胞对卷烟烟气TPM的细胞毒性作用敏感.结论 通过比较不同因素,选择CHO细胞作为测试细胞,使用5%胎牛血清浓度的稀释培养液对卷烟烟气TPM母液进行稀释,染毒24 h,进行中性红摄取试验.
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基于U251细胞的急性毒性体外检测方法
目的 建立基于人神经胶质瘤细胞系U251细胞的急性毒性体外检测方法,初步评估其预测化学品急性毒性的能力.方法 体外培养U251细胞,对11种已知急性毒性的化学物质进行中性红摄取试验,获得不同浓度受试物与细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性(IC50)与急性毒性(LD50)的关系,并与Registry Cytotoxicity(RC)模型曲线进行比较;对21种化学品进行中性红摄取试验,根据RC模型预测急性毒性LD50值,并对其进行急性毒性分级,将分级结果与体内急性经口毒性试验分级结果进行比较.结果 与U251细胞共孵育24、48和72 h的细胞毒性IC50与相应的急性毒性LD50存在相关性(R242h =0.857,R482h=0.895,R722h=0.929;P＜0.05),且结果回归模型在RC模型可接受区间内,本试验体系可应用RC模型预测急性毒性;21种化学品的急性毒性LD50预测值与体内急性毒性LD50值进行比较,分级一致率分别为76.2％ (24 h,16/21)、66.7％ (48 h,14/21)和71.4％ (72 h,15/21).结论 在本试验体系下,U251细胞中性红摄取试验能够较好的预测化学品急性毒性.
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体外3T3成纤维细胞中性红摄取试验对光毒物质的评价
光毒性是指应用于机体局部的物质经暴露于光线后诱发或增强的毒性反应,或者全身系统地应用某一物质后由皮肤光照引发的反应,许多化学物质能诱导产生光毒性效应.传统的光毒性实验方法是将一定量的受试物涂抹在动物去毛的皮肤上,经一定时间间隔后暴露于UVA,观察受试动物皮肤反应并确定该受试物是否具有光毒性.体外3T3成纤维细胞中性红摄取光毒试验(in vitro 3T3 NRu phototoxicitytest,3T3-NRU PT)是经过欧洲体外替代试验有效性验证中心(EVCAM)验证.早经欧盟委员会批准的替代方法之一,已获得欧盟许可和经济合作与发展组织(OECD)认可作为皮肤光毒性试验的替代方法用于欧盟国家的化学物质安全性评价~（[1-2]).
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BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的验证研究
目的 探讨BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的可行性,为建立细胞毒性试验预测急性毒性试验平台,开展化合物急性毒性筛查提供理论依据.方法选取11种受试物,开展BALB/c 3T3中性红摄取试验,以IC50结果与急性毒性试验LD50进行线性回归,将拟合的曲线与RC模型曲线进行比较.同时,将受试物的IC50值代入RC模型方程获得急性毒性LD50的预测值,依据GHS急性毒性分级法进行分级,与急性毒性试验的LD50和分级进行比较,同时对结果进行相关性分析.结果 阳性对照十二烷基硫酸钠的结果符合试验质量控制的要求.受试物拟合曲线与RC模型曲线几乎平行,11种受试物中,LD50预测值与急性经口毒性试验分级一致的有9种.BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性毒性试验LD50值存在相关性(Pearsonr=0.997,P＜ 0.01).受试物分级结果与实际分级具有等级相关性(Spearman r=0.905,P＜ 0.01).结论 在本试验体系下,BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验能够较好地预测急性毒性.既可以作为化合物急性毒性的快速初筛,又可为动物试验起始剂量的选择提供依据.
关键词： Balb/c 3T3细胞 中性红摄取试验 急性毒性预测 验证研究
