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二氧化钛纳米颗粒对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡的影响研究
目的 探讨不同粒径的二氧化钛纳米颗粒(TiO2-NPs)对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383凋亡的影响.方法 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383暴露于粒径为10、30、50、100 nm二氧化钛纳米颗粒48 h后,采用CCK-8法检测NR8383的细胞活力,Hoechst33258染色观察凋亡的核形态,PI单染流式细胞术检测凋亡情况.结果 不同浓度不同粒径Tio2-NPs作用48 h后,与正常对照细胞组相比,NR8383细胞活力和凋亡率在同一粒径下随浓度增加而增加,同一浓度下随粒径增加而降低.结论 二氧化钛纳米颗粒对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383凋亡有一定的影响,这与TiO2-NPs的粒径和浓度有关.
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茶多酚抗矽作用的实验研究
矽肺的自由基理论逐渐完善,矽肺的抗氧化治疗取得一定进展[1],如汉防己甲素(简称汉甲)就是其中的代表[2].但人或动物长期服用汉甲后,会出现不同程度的消化道刺激症状及肝脏损害[3],限制了它的广泛使用.近年来,从茶叶中分离提纯的一类无毒无害的多酚类化合物--茶多酚(green tea polyphenols,GTP)因其强大的抗氧化能力,越来越受到医学界的重视.GTP的主要成分是儿茶素类化合物,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在GTP中占50%~60%.儿茶素类化合物主要结构是2-苯基苯并吡喃.它含有多个酚羟基,容易氧化而释放H+,竞争性地与自由基及氧化物结合,阻断自由基反应链[4],抑制脂质过氧化,具有广泛的生物学效应.本实验根据矽肺的自由基理论,利用GTP清除自由基和抗氧化活性,研究其对体外染尘的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)的保护作用及对染尘大鼠肺纤维化的抑制作用.
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1-24 茶多酚、维生素C对石英致肺泡巨噬细胞DNA损伤的保护作用
目的探讨体外培养条件下石英粉尘对肺泡巨噬细胞DNA的损伤作用及茶多酚和维生素C的保护作用.方法将肺灌洗收获的肺泡巨噬细胞分别与石英粉尘悬液共同培养后,用单细胞凝胶电泳技术检测肺泡巨噬细胞DNA损伤的状况.结果大鼠肺泡巨噬细胞与不同浓度石英粉尘共同培养后,彗星出现率、DNA迁移长度增加,与阴性对照组比较,差异有显著性(P<0.05).随着石英粉尘与肺泡巨噬细胞作用时间的延长,彗星出现率及DNA损伤也呈增加的趋势.在培养液中加入茶多酚和维生素C能减轻石英粉尘所致肺泡巨噬细胞DNA的损伤.其中以40μg/ml的茶多酚及30μg/ml的维生素C保护效果较好.结论石英粉尘能诱导肺泡巨噬细胞DNA损伤.且随着粉尘浓度的增加以及作用时间的延长其DNA损伤程度有增加的趋势.茶多酚及维生素C对石英粉尘所致的DNA损伤有一定的保护作用.
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免疫荧光法检测脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB的活化
人们一直关注脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等细菌产物如何激活炎性细胞,并促进炎性细胞因子表达.目前已经明确,编码TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8的基因,是由核转录因子κB(nuclear factor-κB, NF-κB)控制表达的.
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BMSCs移植对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞自噬活化的影响
目的::观察骨髓间充质干细胞( bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞自噬活化的影响,探讨骨髓间充质干细胞对矽肺的疗效及其机制。方法:体外分离、培养雄性3-5周龄SD大鼠,获取BMSCs原代,培养至3代。将60只雌性SD大鼠随机分为3组( n=20):对照组,矽肺模型组,BMSCs治疗组。采用非暴露气管灌注法建立大鼠矽肺病模型,于造模成功后12 h给予BMSCs干预治疗(3x106/ml)。分别于1 d、7 d、14 d及28 d处死各组大鼠,应用原位支气管肺泡灌洗技术,获取大鼠肺泡巨噬细胞( Alveolar macrophages, AM)。使用细胞流式仪鉴定BMSCs;HE染色观察AM形态学改变;免疫细胞化学法与Western blotting 法检测LC-3、Beclin-1分布、定位和定量。结果:模型组与对照组相比AM 体积较大,胞质丰富,部分细胞内可见矽尘吞噬颗粒;模型组大鼠肺组织LC-3、Beclin-1在各时间点的表达较对照组均增多(P<0.05),1 d 即开始增多,至14 d 时达高峰,28d 时回落,但仍高于对照组的表达水平;BMSCs 治疗组大鼠肺组织较模型组病理改变有明显的缓解,各时间点LC-3、Beclin-1蛋白的表达显著下调(P<0.05)。结论:在矽肺大鼠AM 中存在自噬的激活,BMSCs 可有效抑制自噬的激活,进而缓解矽肺的病理进程。
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N-乙酰-L-半胱氨酸对矽肺模型大鼠肺泡巨噬细胞基质金属蛋白酶2、9表达的影响
在SiO2粉尘引起的矽肺纤维化过程中,肺泡巨噬细胞具有重要作用.基质金属蛋白酶(MMP)是降解细胞外基质的主要酶类.肺泡巨噬细胞分泌的MMP-2和MMP-9能够降解肺泡基膜,从而启动肺间质纤维化[1].目前,阻断肺泡巨噬细胞氧化损伤对其分泌MMPs影响的研究尚不多见.本研究以N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)为抗氧化剂,应用免疫细胞化学和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,探讨NAC对矽肺纤维化模型大鼠肺泡巨噬细胞MMP-2和MMP-9表达的影响.
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脂多糖结合蛋白多抗对内毒素急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞TOLL样受体4与白细胞介素18表达的影响
内毒素急性肺损伤时肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)与下游炎症因子白细胞介素18(IL-18)表达明显增强[1].脂多糖结合蛋白(LBP)对LPS炎症反应起增敏作用,LBP抗体可能减轻上述作用,但机制尚不清楚.我们检测LBP多抗对LPS刺激后大鼠AM TLR4、IL-18 mRNA与TLR4蛋白表达变化,以探讨LBP多抗对内毒素急性肺损伤大鼠AM TLR4信号通路的影响.
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雾化吸入γ-干扰素对免疫低下大鼠肺部抗感染能力和细胞免疫的影响
随着免疫低下患者日益增多。由此造成的难治性呼吸系统感染已经成为这些患者的主要死亡原因。目前认为免疫低下宿主肺部细胞免疫功能低下主要是因为缺乏淋巴细胞源性细胞因子。我们撰文旨在探讨通过雾化吸入的方法补充肺局部γ-干抗素1(IFN-γ)水平,对免疫低下大鼠肺部抗感染能力和细胞免疫状态的影响。 材料和方法复制免疫低下并支气管-肺炎大鼠模型[1]。吸入IFN-γ组于气管内注射白色念珠菌的前1天开始,雾化吸入IFN-γ 10 000 IU,每日1次,至实验结束。对照组每日吸入等体积生理盐水。检测各组大鼠肺泡巨噬细胞(AM)的吞噬及杀菌功能(白色念珠菌法[2])、Ⅰa抗原表达(间接免疫荧光法)、AM培养上清中TNF-α活性(L929细胞毒性试验[3]),第7天进行左肺白色念珠菌培养计数以及血清IFN-γ活性(L929细胞病变抑制试验[4])、血淋巴细胞杀伤功能检测(51Cr释放试验[5])。白色念珠菌计数以中位数表示,采用秩和检验处理数据;其余数据以均值±标准差表示,采用t检验处理各组数据。
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甘草酸二铵对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞白细胞介素10及18表达的影响
目前研究表明,肺泡巨噬细胞(AM)在急性肺损伤(ALI)发病过程中可能起着决定性作用[1].而中成药甘草酸二铵(商品名:甘利欣)具有良好的免疫调节功能[2],可能对ALI具有治疗作用.我们就ALI大鼠AM肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)及IL-18 mRNA表达及甘草酸二铵、地塞米松的作用进行了研究.
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低氧诱导因子1α促进大鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子α的产生
低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是介导细胞缺氧反应的关键核转录因子,在巨噬细胞等髓系细胞介导的炎症反应中发挥着重要的作用[1].肺部和气道的慢性非特异性炎症是慢性阻塞性肺疾病(COPD)的重要特征,活化的巨噬细胞及其释放的炎症介质如肿瘤坏死因子α(TNF-α)等与这一慢性炎症过程密切相关[2].近来研究证实在常氧下TNF-α等炎症介质可明显促进HIF-1α的稳定和活性[3,4],HIF-1α又可增强TNF-α的产生[5],这些研究进一步提示了HIF-1α的炎症放大作用.但在活化的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的表达及其在TNF-α产生中的作用还不清楚.我们通过对此问题的探讨,旨在阐明COPD等慢性炎症病变的机制.
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烟雾暴露对大鼠肺泡巨噬细胞核因子κB的影响及机制
核因子κB(NF-κB)是重要的转录调节因子, 吸烟作为导致慢性阻塞性肺疾病(COPD)的重要因素, 其对NF-κB的影响及作用机制尚不清楚.我们的实验通过在体及离体研究,探讨烟雾暴露对大鼠肺泡巨噬细胞(AM) NF-κB的作用及相关机制.
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胆囊收缩素对脂多糖刺激大鼠肺泡巨噬细胞的影响
八肽胆囊收缩素(CCK-8)对内毒素休克(ES)大鼠有保护作用,可能与抑制ES大鼠促炎性细胞因子过量生成有关[1,2].CCK-8可能与CCK受体结合干扰脂多糖(LPS)诱导肺泡巨噬细胞(AM)过度激活.LPS和CCK可激活p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK).CCK受体为一种G蛋白偶联受体,可能直接激活信号转导与转录激活子3(STAT-3).观察CCK-8对LPS引起大鼠AM分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响和CCK受体非特异性抑制剂的作用,以及p38MAPK和STAT-3表达的变化.
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糖尿病大鼠肺泡巨噬细胞功能变化及胰岛素治疗的影响
肺泡巨噬细胞广泛分布于肺泡内及支气管表面,是肺组织接触抗原早、机会多的免疫细胞,组成肺组织的第一道防线,能够比其他细胞更有效地清除细菌、病毒、真菌感染[1].
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高氧暴露对新生大鼠肺泡巨噬细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响
氧疗是临床不可缺少的抢救措施,然而新生儿长时间吸入高浓度氧常可引起严重的肺损伤~([1]).N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)过度激活引起的兴奋性神经毒性在急性脑损伤及多种神经系统退行性疾病的发生发展中有重要的作用~([2]).本研究小组前期研究发现,在整体水平上NMDAR的激活在新生大鼠高氧性肺损伤的发展过程中发挥重要作用~([3]).Dickman等~([4])报道大鼠肺泡巨噬细胞存在NMDAR,但高氧暴露是否会影响新生大鼠肺泡巨噬细胞NMDAR的表达罕见报道.因此,本研究旨在探讨高氧暴露对新生大鼠肺泡巨噬细胞NMDAR的影响.
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赤芍、白芍凉血作用比较研究(Ⅰ)-LPS刺激大鼠肺泡巨噬细胞的作用研究
目的 观察赤芍、白芍各醇提物对脂多糖(LPS)致大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)不同时间段活性的影响,比较赤芍、白芍各醇提物的凉血作用的异同.方法 采用四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法检测LPS(1μg/mL)对NR8383 细胞不同时间点的抑制率及赤芍、白芍(10μg/mL)对LPS 诱导NR8383 活性的调节作用.结果 1μg/mLLPS 刺激NR8383 6h 之前抑制率为负值之后逐渐转为正值,即先诱导其过度激活后促进其凋亡;观察到川赤芍、赤芍、白芍给药组能够在3h 时显著抑制NR8383 的过度活化,与LPS 对照组比较具有显著差异(P<0.05);24h 时各药物组均能够显著抑制NR8383 的异常凋亡,与LPS 对照组比较具有显著差异(P<0.05);24h 时川赤芍、赤芍组与白芍组之间有显著差异(P<0.05).结论 赤芍、白芍是在共同具有凉血功效的前提下有所偏重.
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纳米氧化铈对过氧化氢所致大鼠肺泡巨噬细胞氧化损伤的影响
目的 研究纳米氧化铈对过氧化氢致大鼠肺泡巨噬细胞NR8383氧化损伤的影响.方法 将对数生长期的NR8383细胞分别暴露于终浓度为5、10、20、50、100 μg/ml纳米氧化铈(20 nm)悬液孵育24 h,再加入新鲜配制的终浓度为100μmol/L的过氧化氢刺激细胞2h,另设对照(PBS)组及过氧化氢(100 μmol/L)组.采用CCK-8法检测NR8383细胞的细胞活性,采用酶标法检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,并测定细胞内谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)的水平.结果 与对照组相比,过氧化氢对NR8383细胞造成氧化损伤,细胞的存活率下降25.25%.与过氧化氢组相比,5 μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的存活率较高,而100 μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的存活率较低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);且随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞的存活率呈下降的趋势.与过氧化氢组相比,对照组NR8383细胞的LDH释放量较低,50 μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的LDH释放量较高,差异有统计学意义(P<0.05);而5、10 μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞的LDH释放量有所降低,但差异均无统计学意义(P>0.05).且随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞的LDH释放量呈上下波动.与过氧化氢组相比,对照组NR8383细胞内GSH的水平升高,而ROS的水平上升;5、10 μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞内的ROS水平均下降,而10 μg/ml纳米氧化铈+过氧化氢组NR8383细胞内的GSH水平上升,差异均有统计学意义(P<0.05).随着纳米氧化铈染毒浓度的升高,NR8383细胞内的SOD、GSH呈上下波动,ROS的水平呈逐渐升高的趋势.结论 低浓度(5、10 μg/ml)的纳米氧化铈颗粒可以缓解过氧化氢对NR8383细胞造成的氧化损伤,对细胞起到保护作用.
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稀土氧化钕暴露对大鼠肺泡巨噬细胞毒性及炎性因子分泌的影响
目的 研究稀土氧化钕暴露对大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383)的毒性及其炎性因子分泌的影响.方法 将处于对数生长期的NR8383细胞,暴露于终浓度分别为0(对照,PBS)、12.5、25、50、100、200 μg/ml的氧化钕混悬液12、24、48 h后,采用MTT法测定NR8383细胞的抑制率;终浓度为0(对照,PBS)、25、50、100 μg/ml的氧化钕混悬液24 h后,采用酶标法测定细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(TN F-α)、白介素-1p(IL-1β)及白介素-8(IL-8)的浓度.结果 与对照组比较,各浓度氧化钕暴露不同时间后NR8383细胞的抑制率均较高,各浓度氧化钕暴露NR8383细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-8的浓度均较高,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氧化钕暴露浓度的升高,NR8383细胞的抑制率及上清中TNF-α、IL-1β、IL-8的浓度均呈上升趋势.氧化钕暴露NR8383细胞的抑制率与上清中TNF-α、IL-1β、IL-8的浓度均呈正相关(P<0.01);且NR8383细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-8浓度两两之间均呈正相关(P<0.01).结论 氧化钕刺激可引起NR8383细胞分泌炎性因子增加.
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灌洗的大鼠肺泡巨噬细胞碱性磷酸酶组化显示
血液中单核细胞的碱性磷酸酶(Alkline phosphatase,AKP)呈阴性。本文对灌洗的大鼠肺泡巨噬细胞,以偶氮偶联法进行细胞化学染色,对其碱性磷酸酶的阳性反应进行探讨,并从肺泡巨噬细胞的获取、固定时间及孵育条件等方面进行了摸索。
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氯胺酮预先给药对脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞超氧阴离子生成和细胞内钙离子浓度的影响
脂多糖(LPS)是革兰氏阴性菌外膜的组成成分,侵入机体后,在LPS结合蛋白介导下,与巨噬细胞膜上的CD14结合,通过NF-κB信号转导途径促进细胞因子释放和超氧阴离子(O2-·)生成,诱发炎性反应[1].
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肺泡巨噬细胞单层模型在生物药剂学中的应用
目的建立体外肺泡巨噬细胞单层模型,用于研究药物在巨噬细胞的分布特征和相应机理,并可以用来预测药物(主要为治疗肺部炎症的抗生素),在体内分布到肺泡巨噬细胞的程度.方法采用支气管肺泡洗净法(broncho-alveolarlavage,BAL)从大鼠肺部分离肺泡巨噬细胞,并进行纯化和体外培养.根据巨噬细胞的吸附特征通过洗净法除去混杂的细胞,在95%air-5%CO2,37℃的细胞孵育箱下,进行肺泡巨噬细胞单层的体外培养.在此基础上,使用该模型初步考察了环丙沙星在肺泡巨噬细胞的分布.结果环丙沙星能够逆着细胞内外的浓度差向细胞内转运,使得细胞内外(I/E)药物的浓度比值为11.结论肺泡巨噬细胞单层是有效的研究药物在体内分布到肺泡巨噬细胞的体外细胞模型.