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培养细胞缝隙连结细胞间通讯功能的测定
缝隙连结是机体多数细胞间连接的通道。细胞间通过缝隙连结形成电偶联和(或)代谢偶联,产生细胞间通讯,即缝隙连结细胞间通讯( gap junction intercellular communication, GJIC ) 。GJIC与细胞生长调控及癌变的关系日益受到重视。目前,已有多种技术途径用于功能性GJIC的研究。已经报道的技术有:电偶联、经过放射性代谢物移转的代谢协同、基因突变所致的代谢协同、刮除负载(scrape loading)染料传递、微注射荧光染料传递(microinjection and dye transfer assay, MDTA ),以及荧光光漂白再恢复(fluorescence redistribution after photobleaching,FRAP)技术[1]。我们就近年来本学科常用的MDTA法和新近开发的FRAP法对正常的和十四酰基咐拜醇酯(TPA)作用的体外培养中国仓鼠肺成纤维(CHL)细胞单层GJIC功能进行测定,并作量化比较。
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肺泡巨噬细胞单层模型在生物药剂学中的应用
目的建立体外肺泡巨噬细胞单层模型,用于研究药物在巨噬细胞的分布特征和相应机理,并可以用来预测药物(主要为治疗肺部炎症的抗生素),在体内分布到肺泡巨噬细胞的程度.方法采用支气管肺泡洗净法(broncho-alveolarlavage,BAL)从大鼠肺部分离肺泡巨噬细胞,并进行纯化和体外培养.根据巨噬细胞的吸附特征通过洗净法除去混杂的细胞,在95%air-5%CO2,37℃的细胞孵育箱下,进行肺泡巨噬细胞单层的体外培养.在此基础上,使用该模型初步考察了环丙沙星在肺泡巨噬细胞的分布.结果环丙沙星能够逆着细胞内外的浓度差向细胞内转运,使得细胞内外(I/E)药物的浓度比值为11.结论肺泡巨噬细胞单层是有效的研究药物在体内分布到肺泡巨噬细胞的体外细胞模型.
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烧伤后CD11b/CD18介导的中性多形核白细胞粘附对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响
目的:观察烧伤后中性多形核白细胞(PMN)对肺微血管内皮细胞单层通透性的影响,以及PMN粘附及其粘附分子CD11b/CD18在该影响中的介导作用.方法:用培养血管内皮细胞单层模型,建立培养肺微血管内皮细胞(PMEC)单层通透性测定的方法,根据处理内皮细胞单层的不同成分,将实验分为7组,用含荧光素异硫氰酸酯-清蛋白的灌流液灌流后,测定液体滤过系数(kf)和渗透压反射系数(δ).结果:烧伤后PMN能使反映小分子物质通透性的kf值明显增加,使δ值显著下降.用单抗封闭PMN膜上CD11b/CD18能使δ值的变化得到纠正;用孔径0.2 μm的滤膜阻断PMN与内皮细胞单层的粘附则使kf值和δ值均接近正常水平.结论:白细胞与内皮细胞的粘附是介质类物质发生作用的前提条件,这些物质主要影响肺血管对小分子物质的通透性.粘附分子CD11b/CD18本身可能具有生物学信号调控的作用,并介导着对肺血管内皮细胞大分子物质通透性的影响.
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实时聚合酶链反应定量沙眼衣原体
以往定量临床标本中的沙眼衣原体(Ct)依赖于细胞培养,即把标本接种于细胞单层上,72 h后在显微镜下计数细胞内荧光单克隆抗体染色的衣原体包涵体.
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辐照到培皿中细胞单层上的毫米波功率流密度分析
涉及到细胞层次上的毫米波生物学效应的实验使用了内含细胞单层的培皿,并使毫米波从下方进行辐照.针对培皿直径远大于毫米波波长的情况,分析了辐照到细胞单层上的毫米波功率流密度与培皿厚度、毫米波波长以及培皿和培养液的电磁参数等影响因素的关系;使用电磁场时域有限差分法分析了一种典型的直径与波长相近的小口径培皿的结构对辐照到细胞单层上的毫米波功率流密度的影响.结果表明此类实验需要对辐照到细胞单层上的毫米波功率流密度进行严格分析、精确测量和准确计算,而且实验中使用大直径培皿比小口径培皿更加有利.