首页 > 文献资料
-
食品纸质包材中荧光增白剂的仪器检测方法综述
荧光增白剂是一种荧光染料,在我国,荧光增白剂并非食品添加剂,而是被划分为精细化工产品;在国际上,荧光增白剂被认定为具有潜在的致癌性,其使用应当受到一定的限制.我国相关标准明确规定:食品中严禁违法添加,且在食品包装用原纸、餐具洗涤剂、食品工具设备用洗涤剂与洗涤消毒剂中均不得使用荧光增白剂.
-
不止于快,更致于准-维德维康快检产品新突破
维德维康首次向业界公布了食品安全快速检测新方案—荧光定量快速检测系统。据了解, NC膜下方固定的荧光染料正是该系统的“秘密武器”。大限度地减少甚至避免各类食品安全事件带来的伤害,有效提高食品安全监管工作效率,提升食品安全监管系统的完善水平。
-
PCR-荧光探针法检测临床痰标本结核分枝杆菌的可靠性研究
目的 评价PCR-荧光探针法快速检测Mtb和非结核分枝杆菌(NTM)的临床应用价值.方法 应用分枝杆菌核酸检测试剂对1015例痰标本和56株临床分离株进行检测,与Mtb核酸扩增(PCR)荧光(目前临床上认可惟一同类产品)检测结果进行比较.采用 SPSS 11.5统计软件进行数据统计处理,采用x2检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 PCR-荧光探针法检测痰标本分枝杆菌灵敏度50.3% (373/741),特异度98.9%(271/274);菌阳肺结核标本检测灵敏度97.0%(257/265),菌阴肺结核标本检测灵敏度24.4% (116/476);1015份痰标本中检测出11例非结核分枝杆菌(NTM)核酸阳性标本(占1.1%),经16S rDNA测序确认,准确率100.0%.随机数字量表法抽取138例标本重复进行第2次检测,符合率100.0%.对56株临床分离株(1株Mtb临床分离株,55株NTM临床分离株)检测,准确率100.0%.对临床需要的226份标本同时与达安公司试剂盒检测结果比较,总体符合率95.1% (215/226),经统计学分析,两者之间差异无统计学意义(x2=2.98,P=0.226).结论 PCR-荧光探针法可快速检测和区分痰标本Mtb与NTM,具有临床推广应用价值.
-
抗酸杆菌荧光染色镜检的应用研究
目的 对荧光显微镜检测抗酸杆菌的应用进行评价.方法 5个结核病专业诊疗机构共收集2157份标本,每份标本均采用荧光染色(FS)、萋-尼染色(Z-N染色)镜检.其中1245份标本同时进行传统培养检查,并且以培养结果为终的金标准,计算FS和Z-N染色镜检方法的敏感度、特异度和正确指数[正确指数=(敏感度+特异度)-1=1-(假阴性率+假阳性率)].所有结果采用SPSS 17.0统计软件完成配对x2检验,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 全部标本荧光染色镜检阳性率为10.8%(234/2157),萋-尼染色镜检阳性率为8.8%(190/2157),两种镜检方法阳性率差异有统计学意义(x2=25.473,P<0.001).初诊标本经荧光染色镜检的阳性率为15.9%(179/1127),萋尼染色阳性率为13.2%(149/1127),荧光染色镜检检出抗酸杆菌的能力较萋-尼染色高20.1%;两种镜检方法检查初诊标本的阳性率,差异有统计学意义(x2=18.000,P<0.001).同时完成涂片和培养的标本,荧光染色镜检阳性率13.8%(172/1245),培养阳性率15.2%(189/1245),两者比较差异无统计学意义(x2=2.173,P=0.140).同时完成涂片和培养的初诊标本,荧光染色镜检阳性率16.4%%(128/781),培养阳性率19.7%(154/781),分离培养阳性率较荧光染色阳性率高20.3%,差异有统计学意义(x2=7.861,P<0.01).荧光染色镜检的敏感度为60.3%(114/189)、特异度为94.5%(998/1056),假阴性率为39.7%(75/189)、结果正确指数为0.548,萋-尼染色镜检相应指标分别是56.6%(107/189),97.1%(1025/1056),43.4%(82/189)和0.537.结论 与萋-尼染色镜检比较,荧光染色镜检具有更高的敏感度和很好的特异度;能够提高工作效率,降低工作强度,适合在工作量较大、人力资源紧张的基层实验室开展.
-
蓝谱Loopamp?军团菌检测试剂盒
本试剂盒可快速、简单、高灵敏度、高特异性的检测出环境水样中的军团菌属,针对军团菌属保守的16SsRNA基因设计特异性LAPM?反应引物。该试剂盒包含前处理试剂,经过简单的核酸提取即可用于LAMP?反应,能在1小时内完成检测,反应结果无需电泳,加入荧光染料即可通过肉眼直接观察反应结果。
-
蓝谱Loopamp?沙门氏菌检测试剂盒
针对沙门氏菌属的保守基因invA进行定性检测,特异性检测食品中的存在的沙门氏菌。该试剂盒包含前处理试剂,增菌后进行简单的核酸提取即可用于LAMP?反应,可在1小时内完成检测,反应结果无需电泳,加入荧光染料即可通过肉眼观察反应结果。具备简单、快速、高灵敏度和高特异性等优点。
-
三种定量方法在温泉水中军团菌连续性监测中的应用
目的 比较传统的平板培养法、荧光定量PCR和荧光染料叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide,EMA)结合荧光定量PCR的方法(EMA-荧光定量PCR)对温泉水中军团菌的检测效果.方法 于2011年每月(除5月份)对北京市某温泉度假村的5个温泉池进行采样,每月采集11份水样,全年共采集121份.分别采用传统的平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法对水样中军团菌进行定性和定量分析.结果 平板培养法、荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR检测温泉水中军团菌污染率分别为74.4% (90/121)、100.0%(121/121)和100.0%(121/121);3种方法对121份温泉水样本中军团菌定量数值分别为0.10 ~ 216.00菌落形成单位(CFU)/ml、1.47~1557.75基因单位(GU)/ml和0.20~301.69 GU/ml.荧光定量PCR、EMA-荧光定量PCR和平板培养方法对121份温泉水每份军团菌含量检测的中位数(第25百分位数~第75百分位数)分别为75.30 (32.51 ~ 192.10) GU/ml、36.46(16.08 ~91.21) GU/ml和5.30 (0.00 ~ 33.70) CFU/ml.对于121份温泉水水样,3种方法对军团菌含量分析的定量数值差异有统计学意义(x2=187.900,P<0.01),其中荧光定量PCR的定量数值高,EMA-荧光定量PCR的数值次之,平板培养的数值低.结论 荧光定量PCR和EMA-荧光定量PCR方法检测温泉水中军团菌的灵敏度优于传统的培养方法,EMA-荧光定量PCR方法适合用于环境水体中军团菌活菌监测.
-
骨髓基质细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响
我们先前探讨了移植的骨髓基质细胞在正常大鼠脊髓内的存活、迁移及分化的情况,结果表明,骨髓基质细胞可在正常脊髓内存活、迁移并向神经元及胶质细胞分化.在此基础上,本研究应用骨髓基质细胞移植,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响.制备大鼠脊髓全横断模型,手术9d后移植细胞,移植前收集细胞,DMEM清洗,加入核荧光染料Hoechst 33342(储存浓度0.5g/L)至浓度5mg/L,37℃20min,DMEM清洗.将标记的骨髓基质细胞吸附于明胶海绵后移植入T10脊髓全横断处,对照组单纯移植明胶海绵,空白对照组为单纯脊髓全横断模型.
-
利用量子点免疫荧光双标法在石蜡包埋组织中进行抗原的检测
在组织切片中利用免疫荧光标记抗原是一种广泛使用的方法.在大多数研究中,使用的荧光染料是一些有机分子如F1TC、TBITC、Cy3等.
-
引物标记与掺入标记在HBV基因多态性芯片检测中应用的研究
目的研究引物标记与掺入标记在乙型肝炎病毒(HBV)基因多态性芯片检测中的应用.方法用掺入标记或引物标记荧光分子Cy5,扩增HBV P区、前C/C区,制备含荧光分子Cy5的目的片段后,分别与HBV基因多态性芯片杂交、扫描并分析结果.结果掺入标记法信号强度略高于引物标记法,但非特异信号强度也高,两法检测42份乙型肝炎患者血清,结果完全一致,重复性均较好,批内CV 15%~20%,引物标记法用于检测HBV基因多态性灵敏度达104 copies/ml.结论引物标记法信号强度虽略低于掺入标记法,但检测灵敏度、特异性仍满足临床要求.
-
Blast-病毒物种鉴定的新方法
采集自愿献血员中56份HCV-Ab阳性血样,常规分离血清,应用RT-nPCR对HGV-NS3区进行核酸扩增,PCR扩增产物与PMD18-T载体连接,转染DH5d工程菌株,挑选白色菌落,经内套PCR验证克隆阳性者,以碱裂解法提取质粒DNA,应用荧光染料Big Dye标记、Sanger双脱氧末端终止法进行重组DNA的核酸序列测定.将测得的核酸序列,经国际互联网络输入到NCBI的GenBank数据库的局部序列相似形查询(Blast)的查询框中,借助于GenBank数据库中的资料和计算机分析程序中的BlastN软件,与数据库中所有已知的核酸序列进行序列同源性比对搜索分析.
-
双歧杆菌的全肽聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞游离Ca2+离子水平的影响
双歧杆菌是人体肠道内主要的生理性有益菌,其细胞壁中的全肽聚糖(Whole peptidoglycan, WPG)保持了全菌的一些重要的生理功能,如抗感染和延缓衰老等.此外WPG亦能激活巨噬细胞.本文以Fluo-3/AM为荧光染料,用激光共聚焦显微镜动态观察了分叉双歧杆菌的WPG刺激小鼠腹腔巨噬细胞后游离Ca2+离子的浓度变化.
-
用Calcein释放实验检测HBs DNA疫苗诱生的特异性CTL活性
Calcein释放实验的基本原理为用荧光染料Calcein AM标记靶细胞.脂溶性的Calcein AM进入细胞后转变为水溶性,从而可潴留在细胞内而使细胞质染色,细胞杀伤后水溶性的Calcein可从细胞内释放出来,因此可用靶细胞释出的Calcein荧光值反映杀伤率.Lichtenfels R等报道该方法安全简易,与51 Cr释放法比较符合,可能替代51 Cr释放实验的方法.我们建立了用Calcein AM标记靶细胞检测CTL活性的方法,并对经不同途径接种HBs DNA疫苗的BALB/c小鼠针对HBs的特异性CTL进行了检测.
-
双色荧光定量PCR快速分型、定量高危型人乳头状瘤病毒
目的 针对高危型人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)亚型的多样性以及感染病毒载量的高低,旨在建立高危型HPV的定量与分型的快速检测方法,为HPV筛查与治疗提供依据.方法 利用2种荧光染料分别标记HPV-16、HPV-33/52/58/67和HPV-18/45、HPV-31探针,同时以β球蛋白基因作为内对照,对120份疑为HPV感染的宫颈脱落细胞样本进行HPV分型与定量,定量范围为5×101~5×107 拷贝/ml,以HC-2杂交捕获法作为"金标准",评价该方法的特异性与灵敏度.结果 荧光定量PCR阳性检出率为52.5%(63/120),其中HPV-16、HPV-18/45、HPV-31和HPV-33/52/58/67阳性率分别为36.51%(23/63)、11.11%(7/63)、12.70%(8/63)、58.73%(37/63);HPV感染的平均病毒载量为1.08×107 拷贝/ml.荧光定量PCR的特异性为100%,灵敏度为81.82%.结论 双色荧光定量PCR能快速分型、定量高危型HPV,可用于HPV感染的筛查与宫颈病变程度预测以及疗效观察.
-
荧光定量聚合酶链反应检测基质金属蛋白酶组织抑制因子-1方法的建立
目的构建含有金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的重组质粒并以其为模板建立荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测TIMP-1的标准曲线,为荧光定量PCR准确检测TIMP-1奠定基础.方法提取大鼠星状细胞系HSC-T6的mRNA,经RT-PCR扩增TIMP-1基因后与pGMT-Vector 连接,转化到大肠杆菌DH5α,以筛选得到的阳性克隆质粒作为标准品进行梯度稀释,分别用Taqman荧光探针技术和SYBR Green I荧光染料技术进行荧光定量PCR检测,建立标准曲线,并对两者结果进行了对比.同时进行普通PCR检测,与荧光定量PCR方法检测结果进行比较.结果重组质粒经PCR扩增及序列测定,表明pGMT-TIMP-1基因已成功克隆.以不同稀释水平的标准品质粒进行荧光定量PCR扩增, 应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线的线性检测范围为7×104~7×108拷贝,检测灵敏度为7×104拷贝;应用SYBR Green I荧光染料技术的线性检测范围为7×106~7×108拷贝,检测灵敏度为7×106拷贝,且熔解曲线显示出现非特异性扩增;两种技术相对于普通PCR技术均具有定量功能.结论所构建的pGMT-TIMP-1基因荧光定量PCR检测标准品应用Taqman荧光探针技术建立的标准曲线线性关系好, 灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为荧光定量PCR检测TIMP-1基因的标准方法.
关键词: 金属蛋白酶1组织抑制剂 聚合酶链反应 荧光染料 -
高分辨熔解曲线分析技术的发展与展望
高分辨熔解曲线分析技术简便快速、灵活性高、成本低、敏感性及特异性高、闭管操作的优势,使其成为临床实验诊断及科研工作中得到广泛应用的分子诊断技术之一。随着高分辨熔解曲线分析检测仪器、DNA染料及熔解曲线分析软件的发展,高分辨熔解曲线分析技术的敏感性、特异性及准确度不断提高,为遗传病、肿瘤、病原微生物及个体化用药等提供快速、高效、经济的分子诊断检测平台。(中华检验医学杂志,2017,40:77-79)
-
偏振荧光法定量测定细菌染色体的同源性
定量DNA-DNA杂交技术在细菌基因鉴定和分类方面发挥着重要作用,固相微孔板法,因其简便而被国内外微生物学工作者广泛应用[1-3].但因残留的多糖对DNA包板的影响,导致两种DNA杂交后同源性计算的误差,有碍细菌的鉴定和分类.液相杂交可避免这一不足.本研究应用一种新的荧光染料SYBR Green1特异性结合双股DNA的特性,并借助偏振荧光技术的敏感性,对10株临床分离菌进行了种间同源性测定,报告如下.
-
一种改进的荧光定量PCR标准曲线法的建立
目的 对常规实时荧光定量PCR(RT-PCR)的标准曲线法进行改进,以建立一种更为准确的RT-PCR的标准曲线定量法.方法 通过构建β-actin、KLK11的质粒DNA标准品,以β-actin质粒DNA为正常对照,制作内参基因和目的 基因的标准曲线,获得各自的扩增曲线.RT-PCR检测两种基因在恶性前列腺组织细胞LNCAP中的表达,并将改进的标准曲线法与常规的标准曲线法分别对β-actin/KLK11实时定量PCR的结果进行分析,分析两种方法的差异,以衡量新方法的准确性.结果 所得β-actin和KLK11的标准曲线线性相关性良好(β-actin R2=0.991,KLK11R2=0.992),但两种基因的扩增效率有差异(β-actin 123%,KLK11 99%).两种不同的标准曲线法处理后得到不同的结果:常用标准曲线法结果显示KLK11在LNCAP中有表达下调,而改进的标准曲线法得出KLK11在LNCAP中上调4.46倍.目的 基因与内参基因的扩增效率差异有统计学意义(t=4.829,P<0.05).结论 与常规的绝对定量法比较,改进的标准曲线法避免了因默认目的 基因与内参基因有相同的扩增效率而导致的错误,是一种更为准确的荧光定量PCR分析方法.
-
食管、贲门癌染色体异常分析及意义
目的:研究食管、贲门癌细胞染色体异常及意义.方法:16例食管癌,3例贲门癌采用比较基因组杂交技术,以不同荧光染料分别标记正常人胎盘DNA和癌细胞DNA,与人中期染色体杂交,用荧光显微镜观察摄取图像,通过专用分析软件,确定染色体DNA的扩增和缺失.结果:食管、贲门癌同一患者可出现多条染色体扩增和缺失,可出现整条染色体或长臂或短臂或某一染色体上DNA位点的扩增或缺失,常见扩增有3q,17q,20q,8q,9q,11q,5p,17p;缺失为4q,4p,9q,18q;6例有8q扩增者,病变均侵犯食管壁全层、邻近组织且伴淋巴结转移.染色体DNA扩增数目多的见于Ⅱ期患者,Ⅰ期少.结论:食管、贲门癌细胞染色体DNA扩增和缺失与病变的发生、发展、转移和分期有关.
-
UF-1000i尿沉渣分析仪和H-800尿干化学分析仪检测尿中白细胞的结果分析
UF-1000 i全自动尿沉渣分析仪是Sysmex公司推出的目前在国内临床使用较多的尿沉渣自动分析仪,它使用2种含多次甲基荧光染料的染色剂染色尿液细胞和颗粒,被染色尿液细胞和颗粒发出的荧光能反映量化的细胞表面和胞质内的性状以及细胞核的性质DNA和RNA的数量[1],利用流式细胞的原理,以激光的散射强度、荧光强度、散射波的宽度和荧光的波幅来识别和计数尿中的有形成份,它与干化学分析仪组合成一个比较完整的尿液分析系统,能较好地解决尿液检查难以标准化的问题,但尿液成分的复杂性、多样性、干扰因素众多及仪器本身的局限性,常造成RBC、WBC、CAST的假阳性,假阴性。所以进行必要的尿沉渣镜检,将有利于临床对疾病的诊断和治疗。本文用这3种方法对418份尿液标本进行检测分析,探讨其干扰因素,供大家参考。