纤维蛋白胶包裹嗅神经鞘细胞促进脊髓轴突再生的实验研究

目的观察纤维蛋白胶(FG)包裹嗅神经鞘细胞(OECs)植于成年大鼠脊髓全横断断端间隙内对损伤轴突再生的促进作用.方法成年雄性SD大鼠16只,行脊髓T11节段全横断术.FG-OECs组于间隙内移植FG包裹的OECs,FG对照组移植等量的FG,OECs对照组移植等量DF12-OECs悬液,单纯全切对照组未做任何移植,每组动物4只.术后2周处死动物,脊髓损伤区冰冻水平切片,荧光显微镜下观察OECs的存活及迁移,并行抗神经丝(NF)和生长相关蛋白-43(GAP-43)抗体免疫组织化学染色.结果 OECs及单纯全切对照组脊髓两断端连接较差,而FG对照组及FG-OECs组两断端连接良好.FG、OECs及单纯全切对照组损伤区可见少量NF及GAP-43免疫反应纤维;FG-OECs组间隙内OECs大量存活,并迁移至两侧脊髓实质内,大量NF及GAP-43免疫反应纤维通过间隙.结论 FG包裹的OECs可在成年大鼠脊髓全横断断端间隙内存活并迁移至脊髓实质内,促进损伤轴突的再生.

胶原或明胶吸附施万细胞移植促进全横断脊髓损伤修复的研究

目的探讨胶原或明胶吸附施万细胞移植对全横断脊髓结构和功能修复的影响.方法将胶原或明胶吸附施万细胞移植到成年大鼠全横断脊髓的损伤处,术后3个月用爬网格方式测试动物后肢自主运动功能恢复情况;用荧光金逆行标记法观察大脑感觉运动区和脑干红核的神经元神经纤维再生;用免疫组织化学法检测脊髓CGRP和5-HT能神经纤维再生.结果移植施万细胞的大鼠后肢自主运动功能有显著的恢复.大脑感觉运动区和脑干红核均有被荧光金标记的神经元胞体,提示两个区域的神经元轴突能在脊髓再生并穿越损伤区到达尾侧脊髓.脊髓损伤处有CGRP和5-HT阳性神经纤维,以及损伤处尾侧有5-HT阳性神经纤维.对照组大鼠以上结果均为阴性.结论施万细胞移植可促进大鼠全横断脊髓结构和功能的恢复.胶原或明胶可作为移植细胞的网架用于细胞治疗.

督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进脊髓全横断大鼠后肢运动功能的恢复

为探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对脊髓全横断大鼠后肢运动功能恢复的影响,将20只成年SD大鼠分为4组,即对照组、神经干细胞移植组(神经干细胞组)、督脉电针组(电针组)和督脉电针+神经干细胞移植组(电针神经干细胞组).4组运动均在胸10脊髓段作全横断手术,并用明胶海棉填充断口,其中神经干细胞组和电针神经干细胞组在明胶海绵内注入用核荧光素标记的神经干细胞.电针组和电针神经干细胞组在术后1周内开始接受督脉电针治疗.

骨髓基质细胞移植对大鼠全横断性脊髓损伤修复的影响

我们先前探讨了移植的骨髓基质细胞在正常大鼠脊髓内的存活、迁移及分化的情况,结果表明,骨髓基质细胞可在正常脊髓内存活、迁移并向神经元及胶质细胞分化.在此基础上,本研究应用骨髓基质细胞移植,观察其对大鼠全横断性脊髓损伤后结构与功能的影响.制备大鼠脊髓全横断模型,手术9d后移植细胞,移植前收集细胞,DMEM清洗,加入核荧光染料Hoechst 33342(储存浓度0.5g/L)至浓度5mg/L,37℃20min,DMEM清洗.将标记的骨髓基质细胞吸附于明胶海绵后移植入T10脊髓全横断处,对照组单纯移植明胶海绵,空白对照组为单纯脊髓全横断模型.

超早期高压氧治疗对脊髓全横断损伤大鼠股骨骨钙、骨生物力学及骨胶原的影响

目的：探讨超早期高压氧治疗对脊髓全横断损伤大鼠股骨骨钙、骨生物力学及骨胶原的影响。方法75只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=20)和高压氧组(n=40)，其中高压氧组又分为3小时组(高压氧1组，n=20)和12小时组(高压氧2组，n=20)。假手术组仅行椎板切除术，其他三组均行T10水平脊髓完全横向切断术。高压氧1组和高压氧2组分别于术后第3、12小时开始高压氧治疗，10 d为1个疗程，共3个疗程。治疗后，各组取右股骨测定股骨生物力学性能参数，测定骨钙、骨羟脯氨酸(Hyp)含量；HE染色和Masson染色观察骨小梁和骨胶原形态学变化。结果治疗后，与假手术组比较，模型组股骨结构力学和材料力学参数下降(P<0.05)，骨干重、骨钙及Hyp含量减少(P<0.05)；骨小梁及骨胶原数目减少，稀疏、断裂、排列不整。与模型组和高压氧2组比较，高压氧1组股骨结构力学和材料力学参数均增高，骨干重、骨钙及Hyp含量增加(P<0.05)，骨小梁及骨胶原数目增多，连续性较好，排列较整齐。结论超早期高压氧治疗可明显改善脊髓全横断损伤大鼠股骨骨钙含量，改善骨胶原含量及质量，改善生物力学性能。

电针联合游泳训练对脊髓全横断大鼠脊髓神经营养因子-3及血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶的影响

目的:探讨电针联合游泳训练对脊髓全横断大鼠脊髓神经营养因子-3 (NT-3)及血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的影响.方法:雌性成年SD大鼠180只,随机分为6个组(正常组,假手术组,损伤组,游泳组,电针组,联合组),每组30只.制作脊髓T10全横断损伤模型.术后第5天开始电针及游泳训练(电针每天30min,电流1mA,频率为2/100Hz,波型为疏密波.游泳第1周游一组,以后每周加一组,一组时间为4min.每周治疗7次).对照组不进行治疗.术后7d、14d、21d、28d、35d进行运动功能评估(BBB评分),治疗结束时取材.用免疫组化及生化来检测相关因子的表达.结果:①各治疗组的运动功能评分较损伤组均有提高(除第1周(P＞0.05)),并随时间的延长效果更为明显;在各干预组中,联合组运动功能的恢复为突出(P＜0.01).②治疗组大鼠脊髓损伤区NT-3表达较损伤组均有提高(P＜0.05),并随时间的延长而提高,治疗组之间联合组NT-3的表达更为突出(P＜0.01).③各治疗组中血清ALT、AST的表达水平较损伤组均有下降(p＜0.05),联合组下降为明显(P＜ 0.01).结论:游泳训练及电针能够促进脊髓损伤后运动功能的恢复,将两者联合应用效果更为明显.

大鼠脊髓全横断后相邻节段脊髓背角神经元NT-3的表达

目的：研究大鼠脊髓全横断后，NT-3在损伤部位相邻节段脊髓背角神经元随时间的表达变化，为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法体重为250 g左右成年SD大鼠48只，随机分为六组。分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1天、3天、7天及14天组。动物到达存活时间后，应用免疫组织化学SABC 法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段背角的表达和分布。结果正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在背角的神经元。损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数，在脊髓背角的表达，均于术后1天组开始明显增高并达到高峰，术后3天、7天组逐渐回落，术后14天组接近正常水平。而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数，在脊髓背角的表达均于术后1天组开始明显增高，术后3天组达到高峰，于7天组开始下降，到14天组接近正常水平。结论在脊髓全横断术后，脊髓神经元对NT-3的需求增加，提示NT-3在脊髓修复中起重要作用。

大鼠脊髓全横断术后护理措施

大鼠脊髓全横断是脊髓损伤修复研究常用的模型之一.由于脊髓全横断严重影响了实验动物的生理机能,术后死亡率极高.根据我们的观察,大鼠脊髓全横断后如不采取有效护理措施,死亡率可达60%～70%.脊髓全横断后影响实验动物存活的主要因素有:①尿滁留;②泌尿系感染;③患肢受压水肿、褥疮.我们在实验中通过摸索及总结,形成一套术后护理方案,简单易行,使实验动物术后死亡率降低至10%左右.

脊髓全横断后腹角神经元NT-3的表达

目的 研究大鼠脊髓全横断后,NT-3在损伤部位相邻节段眷髓腹角神经元随时间的表达变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据.方法 体重为250g左右成年SD大鼠48只,随机分为六组.分正常组、假手术组及胸10脊髓节段全横断术后1,3,7,14d组.动物到达存活时间后,应用免疫组织化学SABC法和图像分析技术检测NT-3在脊髓损伤相邻节段腹角的表达和分布.结果 正常组的NT-3免疫反应阳性细胞主要分布在腹角的大神经元和少量小神经元.损伤区上段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达,均于术后1d组开始明显增高并达到高峰,术后3d、7d组逐渐回落,术后14d组接近正常水平.而损伤区下段的NT-3免疫反应阳性细胞数,在脊髓腹角的表达均于术后1d组开始明显增高,术后3d组达到高峰,于7d组开始下降,到14d组接近正常水平.结论 在脊髓全横断术后,脊髓腹角神经元对NT-3的需求增加,提示NT-3在脊髓修复中起重要作用.

大鼠脊髓全横断损伤后脊髓caspase-3的表达变化

目的 观察大鼠脊髓全横断(SCT)后横断端细胞凋亡及caspase-3 mRNA、蛋白的表达变化并探讨其意义.方法 SD大鼠90只,手术组(SCT组)动物选择在T10节段全横断脊髓,假手术组除不横断外其余步骤相同.TUNEL法检测脊髓横断端凋亡情况,免疫组织化学、RT-PCR、Western blot技术检测不同时间点caspase-3 mRNA、蛋白表达变化.结果 SCT后横断端脊髓灰质白质均检测到凋亡细胞,caspase-3在损伤周围组织呈阳性,RT-PCR、Western blot显示1d组基因及蛋白均明显上调,3d、7d、14d、21d组mRNA逐渐下降,且3d组依然高于假手术组;3d、7d、14d组蛋白逐渐下降而21d组又略有回升,且3d、21d组依然高于假手术组.结论 SCT后凋亡主要在早期出现,随时间进展呈逐渐下降趋势.

大鼠脊髓全横断后TrkA和NGF在运动皮质的免疫组化研究

目的探讨脊髓全横断后神经营养因子及相应受体在运动皮质内的分布规律,为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据.方法用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内,神经生长因子(NGF)及其高亲和性受体TrkA的表达和分布.结果各组运动皮质中TrkA和NGF阳性神经元主要分布在第5层;脊髓全横断3 d后,运动皮质内TrkA表达上调,损伤后7 d到达高峰,21 d回到正常水平;NGF表达在损伤后7 d上调,峰值出现在损伤后7 d,21 d回到正常水平.结论 NGF表达增高迟于TrkA,提示在损伤早期给予外源性NGF可能有利于受损的皮质脊髓束神经元的存活与再生.

NGF和BDNF在脊髓全横断后大鼠运动皮质的表达和分布

目的探讨脊髓全横断后神经营养因子在运动皮质内的分布规律,为临床应用神经生长因子治疗脊髓损伤提供实验依据.方法用免疫组化方法和图像分析技术检测脊髓全横断后不同时相运动皮质内,神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达和分布.结果各组的运动皮质中NGF和BDNF阳性神经元主要分布在第V层;脊髓全横断后NGF和BDNF的表达均增高,NGF的表达高峰在脊髓全横断后7天,21天回到正常水平;BDNF表达在脊髓横断后21天到达高峰,28天回至正常水平.结论脊髓损伤后大鼠运动皮质内NGF表达上调早于BDNF.

移植神经干细胞促进脊髓全横断大鼠结构与功能修复的研究

超早期高压氧治疗对脊髓全横断大鼠脊髓水肿及后肢运动功能的影响

目的 探讨超早期高压氧治疗对脊髓全横断损伤大鼠脊髓水肿及后肢运动功能的影响.方法 (1)55只3月龄健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组,15只)、模型组(CSCT组,20只)及高压氧组(HBO组,20只).Sham组仅行椎板切除术,其余2组均行T10椎板水平脊髓完全横向切断术.(2)HBO组于术后第3小时置于动物舱内开始高压氧治疗,10天1疗程,共3疗程,其中第1疗程每天2次,第2、3疗程均每天1次,每疗程休息6 d.(3)分别于建模型后第1～6周末.采用BBB运动功能评分法评价并比较两组大鼠后肢运动功能恢复程度;术后6周末取材,观察各组受损脊髓节段组织含水量变化.结果 CSCT组及HBO组大鼠术后第1-6周末BBB运动功能评分逐渐增高,HBO组在2～6周末的BBB运动功能评分均明显高于CSCT组(P<0.05);术后6周末,CSCT组受损脊髓节段组织含水量较Sham组明显增加(P<0.01),HBO组受损脊髓节段组织含水蛩较CSCT组有所减少(P<0.05).结论 超早期高压氧治疗可可减轻脊髓全横断损伤大鼠脊髓组织水肿,促进后肢运动功能的部分恢复,对脊髓有保护作用.

大鼠脊髓全横断后脊髓内NGF、NT3表达的变化

目的 探讨大鼠脊髓全横断后不同时相(3、7、14、21天)脊髓内NGF,NT3表达的变化.方法 采用免疫组织化学ABC法及阳性神经元计数,来检测脊髓全横断后不同时相NGF、NT-3的表达.结果 (1)脊髓全横断后脊髓腹、背角NGF阳性细胞数均较正常增多(P＜0.05),尤以7天明显;脊髓全横断后脊髓腹、背角NT-3阳性细胞数均较正常增多(P＜0.01),尤以7天明显.结论 NGF、NT-3表达的变化可能与脊髓可塑性有关.(2)NGF、NT-3阳性细胞数在各时相均比正常增多,说明NGF、NT-3在脊髓全横断后呈持续性表达增加.

针刺对脊髓全横断SD大鼠BDNF基因表达的影响

目的 探讨电针刺对脊髓全横断成年SD大鼠脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA在横断脊髓上端、下端、大脑皮质和比目鱼肌中的表达及变化的影响.方法 建立40只SD大鼠脊髓全横断损伤模型,雌雄不限,随机分为针刺1d、3d、7d、14d和手术1d、3d、7d、14d组,每组5只,选"足三里+悬钟"及"三阴交+伏兔"2组穴位隔天交替针刺.采用RT-PCR技术检测各时间段脊髓横断上、下端、大脑皮质、比目鱼肌四部位中BDNF mRNA的表达.结果 针刺14d组比目鱼肌中BDNF mRNA较手术14d组显著增加(P＜0.05).结论 电针刺可促进BDNF在损伤部位所支配的肌肉-靶组织中的表达.

环孢A处理对大鼠横断脊髓cdk4表达的影响

目的 探讨环孢霉素A处理对大鼠横断脊髓cdk4表达的影响.方法 成年SD大鼠分SCT组 (T9横断),和SCT后给予环孢霉素A处理组.每组13只动物.动物于环孢霉素A处理7 d后处死,其中每组5只用免疫组化染色确定cdk4在脊髓的定位分布,另8只动物用RT-PCR技术确定cdk4在损伤脊髓的表达变化.结果 与手术组比较(0.99±0.11),环孢霉素A处理(1.12±0.15)导致cdk4在损伤脊髓的表达明显上调(P＜0.05);免疫组化染色显示cdk4主要分布在脊髓灰质神经元.结论 环孢霉素A处理能有效上调损伤脊髓cdk4表达水平,提示环孢霉素A发挥免疫抑制作用可能与cdk4的调节有关.

环孢A处理对脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1表达的影响

目的 探讨环孢霉素A处理对脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1 mRNA表达的影响.方法 成年SD大鼠分SCT组 (T9横断),和SCT后给予环孢霉素A处理组.脊髓横断组用环孢霉素A处理(1 mg/200 g)7 d后处死动物.取后肢骨骼肌用免疫组化染色(n＝5)确定RAF-1 mRNA在后肢骨骼肌的定位分布.RT-PCR技术检测RAF-1 mRNA在损伤脊髓大鼠后肢骨骼肌的表达变化(n＝8).结果 与手术组比较(0.95±0.13),环孢霉素A处理(0.75±0.14)导致RAF-1 mRNA在损伤脊髓大鼠后肢骨骼肌的表达明显下调(P＜0.05); RAF-1 蛋白产物主要分布在细胞浆.结论 环孢霉素A处理能有效下调脊髓损伤大鼠后肢骨骼肌RAF-1 mRNA表达水平.

大鼠脊髓全横断后脊髓内BDNF表达的变化

为了探讨大鼠脊髓全横断后不同时相(3、7、14、21 d)脊髓内BDNF表达的变化,我们采用免疫组织化学ABC法和阳性神经元计数,来检测脊髓全横断后不同时相BDNF的表达.结果发现:(1)BDNF免疫阳性产物主要位于腹角运动神经元,胞浆着色;(2)脊髓全横断后脊髓腹角BDNF阳性细胞数3 d开始增多,7 d达高峰(P＜0.05),14 d恢复正常(P＞0.05).提示BDNF表达的变化可能与脊髓可塑性有关.