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液压转基因技术应用于大鼠再生肝转基因实验
目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠再生肝转基因的条件和方法 . 方法 以2ml/s的速度将浓度为30mg/L的含目的 基因的质粒注射入大鼠尾静脉,于注射前/后不同时间进行大鼠2/3肝切除(PH),于PH后不同恢复时间称量大鼠体重(g)和再生肝重(g),计算肝系数(Lc),并从Lc±Lc*0%、*5%、*10%、*15%、*20%、*25%、*30%、*35%等15组中找出佳组,作为计算不同恢复时间再生肝适注射质粒溶液量的校正系数(Trc);取大鼠肝右叶中部组织制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数1万个细胞中的绿色荧光蛋白阳性细胞百分率. 结果 PH后注射生理盐水和注射空质粒对肝再生的影响与对照(只进行PH)相比无显著差异.PH前液压转基因的合适时间是PH前≥12h;PH后所有时间均可进行液压转基因.PH后对肝再生大鼠进行液压转基因的转基因溶液体积为大鼠体重(g)×9%×1/3×相应的校正系数(Trc).转入基因在体内的表达时间和丰度既受载体影响,又受插入的目的 基因影响. 结论 液压转基因技术亦可有效地应用于大鼠再生肝转基因研究.
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液压转基因技术应用于大鼠肝脏转基因实验
目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠肝脏转基因的条件、方法. 方法 以不同速度从大鼠尾静脉注射不同体积、浓度的含绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-C1,于注射后不同时间取大鼠(各4只)各肝叶制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶的绿色荧光蛋白表达情况. 结果 在一次性注射浓度为30mg/L质粒、注射速度为2ml/s、注射体积为大鼠体重9%的条件下,注射pEGFP-C1质粒后6h,绿色荧光蛋白阳性细胞比例高,占肝脏总细胞的20%以上,从24h起绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少,至72h时各肝叶均基本难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞.在上述佳条件下,绿色荧光蛋白在各肝叶的表达情况是:蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约为30%,左叶、中叶、右叶约为20%,尾状叶约为10%. 结论 液压转基因技术可应用于大鼠肝脏转基因,其适宜条件是:质粒溶液的浓度为30mg/L,注射量为大鼠体重的9%,注射速度为2ml/s,观察转染率的适宜时间是转基因后6～24h.
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液压转基因技术用于脂肪肝大鼠的肝脏转基因实验
目的 探讨液压转基因技术(HDT)应用于大鼠脂肪肝转基因的条件、方法.方法 以不同速度将不同体积、浓度的绿色荧光蛋白基因质粒pEGFP-C1一次性注射到脂肪肝大鼠尾静脉,于注射后不同时间取大鼠(各4只)各肝叶制备冷冻切片,在波长488nm的荧光显微镜下观察、计数各肝叶绿色荧光蛋白阳性细胞.结果 在pEGFP-C1浓度为33mg/L、注射速度为2ml/s、注射液体积为大鼠体重的8.5%条件下,注射质粒后6h,各肝叶绿色荧光蛋白阳性细胞比例高,其中,蒂状叶的绿色荧光蛋白阳性细胞约占18%,左叶约占14%、中叶约占12.5%、右叶约占10%,尾状叶约占8%.转基因后24h绿色荧光蛋白的表达量逐渐减少,至72h时各肝叶均难以检出绿色荧光蛋白阳性细胞.结论 大鼠尾静脉液压转基因技术可用于脂肪肝大鼠的肝脏转基因研究,转基因的适宜条件为:质粒溶液浓度33mg/L,注射量占大鼠体重的8.5%,注射速度为2ml/s,观察转基因效果的适宜时间是转基因后6～24h.
