首页 > 文献资料
-
含人过氧化物酶体增殖物激活受体δ基因高效真核表达载体的构建及其意义
目的 构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)的真核表达载体,为hPPARδ受体功能和基于hPPARδ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台.方法 采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长基因,与经BamHI、SalI相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP,经酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARδ基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和免疫细胞化学检测.结果 经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPAR6的高效表达.结论 成功构建phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 基因克隆 真核表达 逆转录-聚合酶链反应 -
核受体在胚泡着床生理过程中的调节与功能
核受体隶属配体依赖性的转录调控因子超家族,与机体的生长发育、细胞分化、生殖以及代谢过程中的基因表达调控密切相关.本文就核受体家族参与哺乳动物胚泡着床研究方面的进展作一简要综述.
关键词： 胚泡着床 核受体 类固醇激素受体 过氧化物酶体增殖物激活受体δ -
新型PPARδ受体激动剂体外活性筛选及对高血脂金黄地鼠的调脂作用
对新型过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)激动剂HS060098激活PPARα、PPARy和PPARδ受体的活性进行筛选,并研究其对饮食性高脂血症金黄地鼠的血脂调节作用.首先,以肝癌HepG2细胞构建PPARs-荧光素酶基因报告系统,转染绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein,GFP)质粒作为内参,分别加入不同浓度的HS060098后继续培养24 h,通过检测荧光素酶的相对活性来评价HS060098对PPARα、PPARy、PPARδ的激动活性;其次,以高脂饮食法复制金黄地鼠高脂血症模型,分别通过预防性给药与治疗性给药考察HS060098对高脂血症金黄地鼠血浆中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平和脂肪指数的影响.体外研究结果显示,HS060098对PPARδ受体具有显著的激活作用,半数有效浓度(EC50)为0.01 μmol·L-1;对PPARα和PPARy并无明显的激活效应.体内研究结果显示,通过预防性给药和治疗性给药,与模型组比较,HS060098(5、10和20mg.kg-1)均可显著降低高脂血症金黄地鼠血浆中TC、TG、LDL-C水平和脂肪指数(P＜ 0.01,P＜0.05),升高HDL-C水平(P＜0.01,P＜0.05).结果提示,HS060098具有较强的PPARδ激动活性,且对金黄地鼠实验性高脂血症具有显著的预防和治疗作用.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 报告基因 高脂血症 调脂作用 -
PPARD -87T→C基因多态性与代谢综合征的关联研究
目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ基因PPARD-87位点多态性与中国人糖尿病及代谢综合征的相关性.方法选取663例上海地区中国人(其中糖耐量正常者376名,新诊断糖尿病患者287例),用PCR-RFLP检测PPARD基因-87T→C变异,并检测所选人群的临床指标.结果 PPARD基因-87T→C多态与新诊断糖尿病患者中代谢综合征相关(P＜0.05).在糖尿病患者中,此多态与肥胖相关(P＜0.05);在正常糖耐量人群中,此多态与血脂紊乱发生相关(P＜0.01).此外,在正常糖耐量人群(P＜0.01)及糖尿病患者(P＜0.05)中,C等位基因在胰岛素抵抗亚组频率高相关.Logistic回归分析证实,在中国人群中PPARD基因-87T→C变异是正常糖耐量人群中血脂紊乱(OR=0.498,P＜0.01)及糖尿病患者肥胖(OR=0.465,P＜0.01)的独立危险因子.结论 PPARD基因-87T→C变异与代谢综合征相关.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 多态性 单核苷酸 代谢综合征 -
PPARδ基因+294T/C多态性与代谢综合征的关系探讨
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)δ+294T/C多态性与代谢综合征(MS)的关系.方法 选取南京地区汉族人群346例(其中MS组118例,非MS组228例),应用Touch-down PCR检测PPARδ+294T/C基因变异,并检测入选人群的临床指标.结果 MS组PPARδ+294CC型者甘油三酯(TG)水平高于TT型者(P＜0.05),并且携带C等位基因(TC+CC)者稳态模型评估法计算β细胞分泌功能(HOMA-β)低于TT型者(P＜0.05);在非MS组中携带C等位基因(TC+CC)者LDL-C /HDL-C比值高于TT型者(P＜0.05).结论 PPARδ基因+294T/C变异与MS患者胰岛β细胞分泌胰岛素能力下降、TG水平升高和非MS患者血脂谱紊乱有关.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 多态性 单核苷酸 代谢综合征 -
过氧化物酶体增殖物激活受体δ+294T/C基因多态性与冠心病的关系
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(peroxisome proliferation-activated receptor-delta,PPARδ)+294T/C基因多态性与冠心病的关系.方法运用聚合酶链式反应及限制酶片段长度多态性技术分析无血缘关系汉族人群[包括82例正常对照者(NC),120例冠心病(CHD)患者]的PPARδ+294T/C基因多态性,分析基因型频率、等位基因频率,并对不同基因型患者冠心病的危险性进行评价.结果两组间基因型分布差异有统计学意义(P＜0.05);CHD组TC+CC基因型频率及C等位基凶频率均明显高于NC组(P＜0.05);C等位基因携带(TC+CC)者冠心病危险性高于TT基因型(C等位基因携带者OR:3.16,95%CI:1.39～7.14).结论 PPARδ+294T/C基因多态性与冠心病之间有重要的相关性,C等位基因携带可能是冠心病的的危险因素.
关键词： 冠心病 多态性 限制性片段长度 过氧化物酶体增殖物激活受体δ -
小鼠PPARδ基因表达载体pCMV-PPARδ的转化扩增
取含鼠过氧化物酶体增殖物激活受体δ(mPPARδ)基因载体pCMV-PPARδ质粒转化DH5α感受态菌,再接种到含卡那霉素的LB琼脂培养板进行抗性筛选,对挑取的阳性克隆进行LB液体培养基培养.结果 转化的DH5α菌在含卡那霉素的琼脂平板上呈克隆样生长,经LB液体培养基培养后提取的pCMV-PPARδ质粒其A260/A280=1.88,浓度为560 ng/μl.提示本研究成功转化并扩增了pCMV-PPARδ质粒,为PPARδ的相关研究提供了高纯度、高浓度的表达载体.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 质粒转化 质粒扩增 DH5α感受态细胞 -
PPARδ基因(A/G)多态与士兵耐力训练的相关研究
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ(peroxisome prdiferator-activated receptor,PPAR δ)基因第1内含子(A76077G)位点变异多态与解放军训练机能指标的相关性.方法对 102名中国北方驻地新兵进行18周耐力训练,训练负荷为5000m长跑,每周进行3次.以心率为标准监控负荷强度,与通气无氧阈对应.运用跑台逐级递增负荷运动方法,对新兵大摄氧量(maximal oxygen uptake,VO2max)相关指标、跑节省化(running economy,RE)相关指标以及心功能相关指标进行测定.采用聚合酶链反应-限制酶片段长度多型性分析(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphisms,PCR-RFLP)技术方法测定PPARδ基因第1内含子中(A76077G)位点变异多态.结果 3种基因型的分布频率分别为AA:10人(0.10)、AG:36人(0.35)和GG:56人(0.55),符合Hardy-Weinberg平衡.按基因型分组后,AA基因型人群训练前的VO2max相对值、50W下的心脏指数显著性高于AG基因型人群和GG基因型人群(P＜0.05);AA基因型人群RE时心率变化率、100W下的心动周期的变化率极显著性高于AG基因型人群和GG基因型人群(P＜0.01);测定的其他相关指标与基因型的差异均无统计学意义.结论 ①PPAR δ基因第1内含子(A76077G)多态与初始VO2max相对值、50W下的心脏指数相关联.②RE时心率变化率、100W下的心动周期可作为军人有氧训练的敏感指标,PPARδ基因第1内含子(A76077G) AA基因型人群具有更高的敏感性.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 基因多态 训练敏感性 最大摄氧量 跑节省化 -
PPARδ-87T/C基因多态性与糖代谢指标及肿瘤坏死因子浓度的研究
目的 研究PPAR δ-87T/C基因多态性与糖代谢相关指标及血浆肿瘤坏死因子浓度的关系.方法 检测大连地区汉族人2型糖尿病(T2DM)组(286例)和空腹血糖正常(NFG)组(158例)的体重指数(BMI)、腰围、空腹血糖、血脂、胰岛素、肿瘤坏死因子浓度,以及PPAR δ-87T/C基因多态性. 结果T2DM组、NFG组基因型频率无统计学差异(P=0.012,P=0.994). T2DM组,不同基因型间空腹血糖、体重指数、甘油三脂、胰岛素抵抗指数及血浆TNFα有统计学意义;NFG组中,不同基因型的空腹血糖及胰岛素抵抗指数有统计学意义.结论 PPARδ-87T/C多态性与T2DM组的糖脂代谢、胰岛素敏感性及血浆TNFα相关;与NFG组胰岛素敏感性及空腹血糖相关.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 2型糖尿病 多态性 肿瘤坏死因子浓度 -
贝前列素钠对血管紧张素Ⅱ诱导小鼠足细胞凋亡的影响
目的：探讨贝前列素钠（BPS）对足细胞凋亡的影响及其与过氧化物酶体增殖物激活受体δ（PPARδ）的关系。方法：体外培养小鼠足细胞，AngⅡ诱导凋亡，以不同浓度BPS（1、2、5μmol／L）及GSK0660（PPARδ特异阻滞剂）干预；流式细胞仪检测凋亡率，RT-PCR 测定 Bcl-2、Bax 及 PPARδ mRNA 表达量。结果：与对照组相比，AngⅡ组足细胞凋亡率、Bax mRNA 表达显著升高，Bcl-2、PPARδ mRNA 表达显著下降（P＜0．05）；BPS 组足细胞凋亡率、Bax mRNA 显著低于 AngⅡ组，Bcl-2表达显著上升（P ＜0．05），PPARδmRNA 表达有升高趋势；阻滞 PPARδ后，凋亡率及 Bax mRNA 表达较 BPS 组升高，Bcl-2 mRNA 表达下降。结论：贝前列素钠可能通过激活PPARδ、上调Bcl-2／Bax 减少AngⅡ诱导的足细胞凋亡。
关键词： 贝前列素钠 血管紧张素Ⅱ 足细胞 过氧化物酶体增殖物激活受体δ -
重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立
目的:建立phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达的体系.方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARδ-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察质粒转染细胞GFP报告基因表达强度及转染效率,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和Western Blot检测.结果:荧光显微镜下可见转染phPPARδ-IRES2-EGFP质粒的293细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因高表达,转染效率高达(85±10)%;荧光定量PCR和Western Blot检测的结果表明,phPPARδ-IRES2-EGFP转染的293细胞其hPPARδ表达水平高于空载体转染对照组(P＜0.01).结论:成功建立phPPARδ-IRES2-EGFP质粒的高效体外转染表达体系,为hPPARδ受体功能的研究及基于hPPARδ为靶标的药物筛选平台的建立奠定了基础.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ 转染效率 真核表达 293细胞 -
人PPARδ受体cDNA全长序列的克隆及测序
目的:对人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPAR δ)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPAR δ基因真核表达载体及其受体功能研究奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPAR δ全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用BamH Ⅰ、Sal Ⅰ双酶切及基因测序筛选、鉴定阳性克隆pMD19-hPPARδ-T载体中hPPARa基因的完整性和忠实性.结果:经酶切和测序证实pMD19-hPPARδ-T载体中插入的hPPARδ基因序列与GeneBank中提交的序列(AY919140)一致.结论:成功克隆了hPPARδ基因,构建了pMD19-hPPARδ-T中间载体,为含hPPARδ基因真核表达载体的构建和受体功能研究打下了良好的基础.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体δ RT-PCR cDNA克隆 T载体 测序 -
PPARδ通过下调ACAT1抑制血管平滑肌细胞泡沫样变
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ (peroxisome proliferator-activated receptor δ,PPARδ)在血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)泡沫化过程中的作用及可能机制.方法 用组织贴块法体外培养原代VSMCs;用氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)(50 μg/mL)刺激VSMCs构建泡沫细胞模型,分为空白对照组及24、48、72 h组4组以检测VSMCs泡沫化过程中PPARδ的表达变化;利用PPARδ激动剂(GW0742,25 nmol/L)和抑制剂(GSK0660,1μmol/L)调控PPARδ并分为空白对照组、ox-LDL(50 μg/mL)组、GW0742+ ox-LDL(50 μg/mL)组、GSK0660+ ox-LDL(50 μg/mL)组4组,刺激48 h;油红O染色及酶标仪测细胞内萃取油红光密度值检测细胞内脂质沉积;Western blot检测VSMCs中PPARδ、ACAT1蛋白表达情况以探索PPARδ在VSMCs泡沫细胞中的作用以及PPARδ和酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(A-cholesterol acyltransferase 1,ACAT1)的关系.结果 ox-LDL刺激下PPARδ的蛋白水平呈时间依赖地降低,其中48 h低,下降约29％ (P＜0.05),随后维持在低水平表达;GW0742激动PPARδ后可明显减少VSMCs内总胆固醇含量约55％ (P ＜0.05),而GSK0660则明显增加细胞内总胆固醇含量约20％ (P ＜0.05);同时,GW0742可使ACAT1的蛋白表达量下降了约28％(P＜0.05),而GSK0660则升高ACAT1的蛋白表达量约29％(P＜0.05).结论 PPARδ的激活可通过下调ACAT1表达抑制血管平滑肌源性泡沫细胞的形成.
