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优选人脱细胞真皮基质及荧光标记示踪与其复合培养的成纤维细胞
目的 优选人脱细胞真皮基质(ADM)并评价其生物学特性. 方法 通过高渗盐-NaOH消蚀法(A组)、高渗盐-十二烷基硫酸钠(SDS)法(B组)和DispaseⅡ-Triton X-100法(C组)制作人脱细胞真皮基质,以特殊染色、免疫组织化学观察3种方法 制作ADM的组成成分;四甲基偶氮唑盐(MTT)细胞毒性实验评价3种方法 制作ADM的细胞毒性反应;细胞培养法评价其细胞相容性,优选ADM .重组腺病毒绿色荧光表达载体(Ad-GFP)转染的人成纤维细胞(FB)接种在优选ADM上,荧光显微镜观察 FB的生长情况. 结果 3种方法 均能够保留胶原纤维、弹性纤维, A组和C组能够完全脱去细胞,B组未能完全脱去细胞;A组和B组制备ADM细胞毒性反应小于1级;C组制备ADM细胞毒性反应大于1级.A组与B组24h 3T3细胞贴壁数有统计学意义( P <0.05),3T3细胞能够在A组ADM表面贴附;优选A组ADM.转染Ad-GFP的FB在优选ADM上生长和增殖良好. 结论 高渗盐-NaOH消蚀法制备的ADM蕴涵丰富的生物信息,细胞毒性小,生物相容性好,是一种很好的生物支架材料.
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人窦房结胶原纤维网架的构筑
目的:观察人窦房结胶原纤维网架的构筑及其与窦房结中央动脉的关系.方法:用NaOH消蚀法扫描电镜观察成人窦房结.结果:人窦房结中央动脉管壁的纤维网架分为内膜、中膜和外膜3层;在窦房结中央动脉周围,形成厚约50～80 μm的致密的动脉周围层;再向外是中央层,窦房结实质细胞就位于其胶原纤维隔围成的直径约8～16μm的孔洞中;中央层与普通心肌胶原纤维网架间的界限明显.结论:人窦房结胶原纤维网架的构筑,有利于消除中央动脉博动的影响,并为窦房结实质细胞构筑一个相对稳定的微环境.
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三种无细胞真皮基质制备方法比较
人无细胞真皮基质(ADM)能够成为永久性真皮替代物的主要原因为其具有低免疫原性、血管化能力及能够作为宿主细胞的有效载体,这些特性和ADM组成成分有关.近期,我们分别采用高渗盐-SDS法、DispaseⅡ-Triton法、高渗盐-NaOH消蚀法制备人ADM,并对其优缺点进行了比较,旨在为临床应用提供依据.
