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一种血清替代氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞的新方法
目的:利用血清替代氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导巨噬细胞,建立一种新的诱导泡沫细胞体外培养方法.方法:小鼠腹腔注射RPMI1640培养液提取巨噬细胞,RPMI1640无血清培养4h贴壁,分别加体积分数5%、10% 和20%的胎牛血清的RPMI 1640培养液、无血清氧化型低密度脂蛋白(20mg/L)RPMI1640培养液培养4h、8h和12h,采用油红O染色,观察巨噬细胞吞噬脂滴转化为泡沫细胞情况.结果:不同浓度胎牛血清作用4h,8h和12h均对巨噬细胞有诱导作用,且随着浓度的增加、时间的延长,巨噬细胞内脂滴增多变大,部分融合成大脂滴.但当血清浓度增加到20%时,作用时间多于8h,巨噬细胞有部分破裂、脂滴丢失、细胞减少的现象.结论:浓度为10%的血清作用7h可诱导巨噬细胞转化为泡沫细胞.
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miR-146a通过TLR4-ACAT1信号通路抑制巨噬细胞脂质蓄积
目的:观察miR-146a对泡沫细胞内胆固醇水平的影响,探讨TLR4-ACAT1信号通路在miR-146a调控胆固醇酯中的作用.方法:转染miR-146a mimic和Inhibitor,采用HPLC观察总胆固醇、胆固醇酯和游离胆固醇的变化;qPCR和Western-blot法检测TLR4和ACAT1 mRNA和蛋白的变化.结果:TLR4是miR-146a的一个靶基因,miR-146a通过调控TLR4-ACAT1信号通路,抑制细胞内游离胆固醇向胆固醇酯的转化,减少巨噬细胞内的胆固醇酯含量,减少泡沫细胞的形成.结论:miR-146a通过调控TLR4-ACAT1信号通路,抑制胆固醇酯的形成和泡沫细胞的形成,是动脉粥样硬化防治的重要靶点.
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三七总皂苷对兔主动脉粥样硬化治疗作用的观察
目的:探讨三七总皂甙对兔主动脉粥样硬化血管治疗作用.方法:将新西兰大白耳兔随机分为对照组、动脉粥样硬化(AS)模型组、PNS中剂量组及PNS高剂量组,实验组喂饲1.5%高胆固醇饲料,PNS 高、中剂量组分别采取静脉注射PNS 100、50mg·kg ˉ1·dˉ1,于每月后两周每天由兔耳静脉给药三个疗程.第12周末经耳缘静脉采血,采用酶比色法检测血清中脂质水平,摘取主动脉通过光镜和电镜观察病理学改变.结果:与AS组比较,PNS高、中剂量组兔血清甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇降低(P<0.05),高密度脂蛋白胆固醇增高(P<0.05);光镜下:PNS 高、中剂量组内膜的泡沫细胞数显著减少.电镜下:AS 模型组血管泡沫细胞及中膜平滑肌细胞质内含大量脂滴空泡,甚至形成脂囊;PNS 中、高剂量组 AS 病变显著减轻,平滑肌细胞见少许小脂滴空泡,各种细胞器存在.结论:PNS可通过抑制血管内膜下泡沫细胞的形成发挥抗AS的作用.
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尼曼-匹克病1例
尼曼匹克氏病(简称NPD)又称鞘磷脂沉积病,属先天性糖脂代谢性疾病.本病为常染色体隐性遗传性疾病[1],亦系一种类脂质代谢紊乱的疾病.由于神经磷脂酶的缺陷,在单核-巨噬细胞内充满神经磷脂,而形成尼曼-匹克细胞,具有高度表型异质性[2],目前对于此病尚无特殊疗法,主要以对症治疗为主.尼曼匹克氏病的特点是全单核巨噬细胞和神经系统有大量的含有神经鞘磷脂的泡沫细胞.我院2009年6月曾经收治1例尼曼-匹克病患儿,治疗效果良好,现报告如下.
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Ibrolipim对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体Al表达及肿瘤坏死因子-α释放的影响
目的：为探讨巨噬细胞源性泡沫细胞肿瘤坏死因子-α的释放与新药Ibrolipim (NO-1886)抗动脉粥样硬化作用的关系。方法采用体外培养的THP-1细胞构建泡沫细胞模型，分别经Ibrolipim处理6、12、24 h后，高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量的变化，双抗体夹心法检测细胞培养液肿瘤坏死因子-α的水平，免疫印迹法检测细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体A l蛋白的表达。结果与对照组比较，泡沫细胞经Ibrolipim处理6、12、24 h后，细胞内总胆固醇含量和游离胆固醇含量不断减少，细胞培养液中的肿瘤坏死因子-α水平逐渐降低，细胞中三磷酸腺苷结合盒转运体Al蛋白的表达升高。结论Ibrolipim抗动脉粥样硬化的作用与其减少泡沫细胞肿瘤坏死因子-α的释放有关。
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动脉粥样硬化及冠心病的营养膳食防治研究进展
动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的病理变化主要累及体循环系统的大、中型动脉,使其内膜增厚,出现泡沫细胞,形成动脉粥样斑块.斑块突入动脉管腔造成血管狭窄,若斑块破裂诱发血栓形成,可引发严重临床事件.
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看不见的动脉粥样硬化
近年来,心肌梗死、脑梗塞等严重心脑血管疾病的发病率在逐年上升,这些疾病的病理基础都是动脉粥样硬化,可以说动脉粥样硬化正在严重地威胁着人类的健康.因此,专家提醒一定要警惕这一看不见的疾病,做到早预防、早治疗.动脉粥样硬化多始于儿童期动脉粥样硬化的发生,主要是由于血管内皮因高血压、糖尿病、高血脂、吸烟、肥胖、高脂饮食、缺乏运动等因素造成损伤,血液中的血小板和增高的甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇等脂质成分,就会在内皮损伤处发生沉积、黏附、聚集,并逐渐在内皮下层形成富含脂肪的泡沫细胞和脂肪条.
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漏芦对OLDL诱导U937细胞系形成泡沫细胞过程中CD36表达抑制作用的研究
目的:观察漏芦提取液对OLDL诱导U937细胞表面CD36表达的影响.方法:先用OLDL与U937细胞孵育造成泡沫细胞模型,同时用漏芦提取液对泡沫细胞进行干预,采用流式细胞仪检测CD36的表达情况.结果:漏芦提取液1g/L、500mg/L、250mg/L可不同程度地抑制CD36的表达,且三者呈剂量依赖关系.结论:漏芦抗AS作用可能的机理与其抑制CD36的表达有关.
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电针“丰隆”穴对高脂血症大鼠巨噬源性泡沫细胞形成及其胆固醇外流的影响
目的:探讨电针“丰隆”穴治疗高脂血症的作用机制.方法:将40只SPF级SD大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、模型饮控组(C组)、模型加电针组(D组)及模型饮控加电针组(E组),每组8只.A组大鼠连续普通饲料喂养,其余4组用高脂饲料饲喂法建立高脂血症模型后,C组、E组改用普通饲料喂养,同时D组、E组电针“丰隆”穴治疗,每次30 min,每日1次,治疗28 d后,提取各组大鼠腹腔巨噬细胞,用油红O染色检测泡沫细胞形成及酶联免疫吸附法(ELISA)检测巨噬细胞内总胆固醇(TC)含量,分析其胆固醇外流率.结果:B组、C组、D组大鼠油红O染色阳性细胞计数、巨噬细胞内TC含量较A组均显著增加(均P＜0.01),C组、D组、E组阳性细胞计数、细胞内TC含量较B组显著减少(均P＜0.01),其中D组较C组下降明显(均P＜0.01).与C组、D组比较,E组阳性细胞计数、TC含量明显减少(均P＜0.01),与A组之间差异无统计学意义(P＞0.05).同时,与C组比较,D组、E组巨噬细胞内胆固醇外流率显著增加(均P＜0.01),且E组较D组增加明显.结论:电针“丰隆”穴能显著抑制巨噬细胞向泡沫细胞转化,提高巨噬细胞内胆固醇外流率,可预防和逆转泡沫细胞形成,对于治疗高脂血症和防止其进一步发展有一定的作用.
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西红花酸对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响
目的:研究西红花酸对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响.方法:分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,与氧化性低密度脂蛋白温孵培养建立泡沫细胞模型.采用高效液相法测定细胞内胆固醇的含量,观察西红花酸对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响.结果:小鼠腹腔巨噬细胞与20 mg·L-1氧化型低密度脂蛋白作用72 h后,细胞内胆固醇酯占总胆固醇的65.97%,形成泡沫细胞.加入不同浓度的西红花酸后,西红花酸能剂量依赖性地抑制氧化型低密度脂蛋白所致的巨噬细胞胆固醇酯的堆积(P<0.01).结论:西红花酸能抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,这提示西红花酸能减少巨噬细胞内胆固醇酯的堆积可能是西红花酸抗动脉粥样硬化的作用机制之一.
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猫耳刺皂苷ilexpernoside C抑制低密度脂蛋白多聚体诱导泡沫细胞形成的活性及机制研究
巨噬细胞来源的泡沫细胞在血管壁上的堆积,是动脉粥样硬化的主要成因.该实验构建了低密度脂蛋白多聚体(LDL aggregates)诱导的泡沫细胞模型,对冬青属植物猫耳刺分离的化合物进行体外活性研究,发现ilexpernoside C(IC1)能显著抑制泡沫细胞的形成.通过对泡沫细胞形成相关受体的分析发现,IC1能显著抑制低密度脂蛋白相关受体1(LRP1)的表达.因此,该研究认为皂苷IC1通过抑制巨噬细胞的胞吞作用,从而抑制泡沫细胞的形成,使其可能成为一种抗动脉粥样硬化的潜在药物.
关键词： 猫耳刺 ilexpernoside C 泡沫细胞 低密度脂蛋白多聚体 -
川芎嗪对泡沫细胞胆固醇逆转运的影响
目的:从胆固醇逆转运角度探讨川芎嗪对ox-LDL诱导泡沫细胞的干预作用.方法:采用体外培养RAW264.7,以20 mg·L-1 ox-LDL诱导其转变成泡沫细胞模型,并用川芎嗪进行干预.通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,并用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PPARγ,LxRα,ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:川芎嗪能降低泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯,抑制脂质积累,并提高PPARγ,LXRα,ABCA1 mRNA和蛋白的表达.结论:川芎嗪通过增加PPARγ,LXRα,ABCA1基因表达,促进胆固醇逆转运.
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基于网络药理学分析丹参山楂组分配伍抗动脉粥样硬化的作用机制研究
该文基于网络药理学预测及体外细胞验证的方法,对丹参山楂有效组分配伍(SC121)抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制进行了探讨.根据SC121所含成分的结构类型及药效活性报道,选取丹酚酸B、丹参酮ⅡA、丹参素、表儿茶素及原花青素B2作为SC121的主要活性成分,用于网络药理学分析.运用TCMSP数据库,筛选上述5个主要成分作用于心血管疾病的网络靶点;结合KEGG和Uniprot数据库,进行信号通路和生物途径分析,预测其作用机制.在网络药理学预测的基础上,建立体外细胞模型,观察SC121对ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和巨噬细胞RAW264.7损伤及泡沫化的保护作用.网络分析结果显示,SC121可通过作用同一靶点或不同靶点发挥抗AS作用,其作用机制与调节PPAR,renin-angiotensin system等多通路,参与炎症反应、内皮细胞保护及脂质生物合成和代谢等多生物途径有关.细胞实验结果表明,SC121可减轻ox-LDL对HUVEC和RAW264.7的损伤程度,降低RAW264.7细胞内活性氧水平,减少泡沫细胞面积,并呈一定的量效关系.即在体外细胞模型上,5C121可抑制内皮细胞损伤、抗氧化等,验证了网络药理学的预测结果,综合阐释了5C121抗AS的作用机制.
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宁心痛颗粒含药血清及有效组分干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制
目的 探讨宁心痛颗粒含药血清及主要药物的有效组分(黄芪多糖、藁本内酯)干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制.方法 采用佛波酯诱导人THP-1细胞转化为巨噬细胞,再与oxLDL共培养建立泡沫细胞模型;分为空白对照组、模型对照组、宁心痛颗粒含药血清(CMS)组、空白血清组、黄芪多糖(APS)组、藁本内酯(LIG)组、黄芪多糖合藁本内酯(APS +LIG)组7组,对巨噬细胞泡沫化过程进行干预.运用高效液相色谱法检测泡沫化程度(CE/TC比值),Western blot法检测SRA-Ⅰ、CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-y的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组CE/TC值、SRA-Ⅰ、CD36、ABCA1及LXR-α 、PPAR γ蛋白表达升高(P＜0.05);与模型对照组比较,LIG组、APS+LIG组、CMS组CE/rC值降低(P＜0.05),除APS组ABCA1外,APS组、LIG组、APS+LIG组、CMS组SRA-Ⅰ、CD36蛋白表达降低,AB-CA1、LXR-α、PPARy蛋白表达升高(P＜0.05).与APS组比较,CMS组CE/TC值降低,ABCA1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 宁心痛颗粒含药血清、主要药物的有效组分(APS、LIG)均可不同程度抑制THP-1源性巨噬细胞泡沫化,其机制可能与调节巨噬细胞脂质吞噬-逆转运间的平衡,即下调脂蛋白吞噬受体SRA-Ⅰ、CD36的表达,上调胆固醇逆转运通路中的ABCA1、PPARγ及LXR-α的表达有关.
关键词： 宁心痛颗粒 含药血清 有效组分 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞 -
宁心痛颗粒含药血清及有效组分干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制
目的 探讨宁心痛颗粒含药血清及主要药物的有效组分(黄芪多糖、藁本内酯)干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制.方法 采用佛波酯诱导人THP-1细胞转化为巨噬细胞,再与oxLDL共培养建立泡沫细胞模型;分为空白对照组、模型对照组、宁心痛颗粒含药血清(CMS)组、空白血清组、黄芪多糖(APS)组、藁本内酯(LIG)组、黄芪多糖合藁本内酯(APS + LIG)组7组,对巨噬细胞泡沫化过程进行干预.运用高效液相色谱法检测泡沫化程度(CE/TC比值),Western blot法检测SRA-I、CD36、ABCA1、LXRα、PPAR-γ的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组CE/TC值、SRA-I、CD36、ABCA1及LXR-α、 PPARγ蛋白表达升高(P ＜0. 05);与模型对照组比较,LIG组、APS + LIG组、CMS组CE/TC值降低(P ＜ 0. 05),除 APS 组 ABCA1 外,APS 组、LIG 组、APS + LIG 组、CMS 组 SRA-I、CD36 蛋白表达降低,ABCA1、LXR-a、PPARγ蛋白表达升高(P ＜0.05).与APS组比较,CMS组CE/TC值降低,ABCA1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 宁心痛颗粒含药血清、主要药物的有效组分(APS、LIG)均可不同程度抑制 THP-1源性巨噬细胞泡沫化,其机制可能与调节巨噬细胞脂质吞噬-逆转运间的平衡,即下调脂蛋白吞噬受体SRA-I、CD36的表达,上调胆固醇逆转运通路中的ABCA1、PPARγ及LXR-α的表达有关.
关键词： 宁心痛颗粒 含药血清 有效组分 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞 -
通脉降浊煎剂含药血清对泡沫细胞胆固醇流出率的影响
目的 研究通脉降浊煎剂含药血清(TDMS)对泡沫细胞胆固醇流出率的影响及可能机制.方法 采用50 mg/L ox-LDL诱导巨噬细胞48 h,建立巨噬细胞源泡沫细胞模型,添加TDMS,将细胞分为对照组(正常巨噬细胞),ox-LDL组(50 mg/L ox-LDL),β-环糊精(β-CD)组(50 mg/L ox-LDL +10 mmol/L β-CD),正常血清(CS)组(50 mg/L ox-LDL+等体积正常血清),TDMS组(50 mg/L ox-LDL +5％ TDMS).检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和细胞胆固醇流出率;采用Western blot方法检测细胞内三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1)蛋白表达;Real-time PCR方法检测细胞内ABCA1、miR-33a、miR-33bm RNA表达.结果 与对照组比较,ox-LDL组细胞内总胆固醇、游离胆固醇含量和胆固醇流出率均增加(P＜0.05,P＜0.01),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平降低(P＜0.01),miR-33a和miR-33b mRNA表达水平均升高(P＜0.01).与ox-LDL组比较,β-CD组与TDMS组细胞内总胆固醇和游离胆固醇含量均下降,胆固醇流出率增大(P＜ 0.05,P＜0.01),ABCA1 mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.01),细胞内miR-33a和miR-33b mRNA表达水平均降低(P＜0.01).结论 TDMS通过调节miR-33a/b和ABCA1表达,从而提高胆固醇流出率,降低泡沫细胞内胆固醇含量.
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宁心痛颗粒对人类单核细胞株源性巨噬细胞泡沫化的影响
目的 探讨宁心痛颗粒干预动脉粥样硬化易损斑块的可能作用机制.方法 SD大鼠分别灌胃宁心痛颗粒3、15、30、60g/ (kg·d)浓煎剂4天,制备宁心痛颗粒等剂量、5倍、10倍、20倍含药血清.实验分为巨噬细胞组、模型组及宁心痛颗粒含药血清等剂量5倍、10倍、20倍剂量组.除巨噬细胞组外其余各组采用氧化低密度脂蛋白体外诱导正常生长的人类单核细胞株(THP-1)细胞建立巨噬细胞泡沫化模型.宁心痛颗粒含药血清各剂量组分别加入相应剂量的含药血清,使合药血清终浓度为3％,每组实验重复4次.运用Western blot法检测各组细胞脂蛋白受体清道夫受体A(SRA)、CD36蛋白表达水平. 结果 模型组细胞SRA、CD36蛋白表达含量较巨噬细胞组明显增高(P＜0.05);宁心痛颗粒含药血清各剂量组细胞SRA、CD36蛋白水平均较模型组明显降低(P＜0.01);宁心痛颗粒含药血清10倍剂量组细胞SRA、CD36的蛋白表达水平低于宁心痛颗粒其他剂量组(P＜0.01). 结论 宁心痛颗粒能够下调巨噬细胞SRA、CD36蛋白表达,从而抑制泡沫细胞的形成,可能是其干预动脉粥样硬化易损斑块的分子机制之一.
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护心方含药血清对THP-1源性泡沫细胞自噬相关蛋白的影响
目的 探讨护心方抗动脉粥样硬化的可能作用机制.方法 用160 nmol/L佛波醇酯类多克隆刺激剂孵育THP-1细胞24h后诱导分化成巨噬细胞,加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养48h,使其转化为泡沫细胞.以40％护心方含药血清作用12h.采用蛋白质印迹检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)、微管相关蛋白轻链3Ⅰ(LC3-Ⅰ)、Beclin-1及p62表达,激光共聚焦显微镜观察自噬蛋白指标LC3B在细胞内分布及含量. 结果 与空白组比较,模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1表达显著增加,p62表达显著降低,LC3B表达平均荧光强度显著升高(P＜0.05);与模型组比较,护心方组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1表达显著降低,p62表达显著升高,LC3B表达平均荧光强度降低(P＜0.05). 结论 护心方能够逆转ox-LDL诱导的细胞自噬相关蛋白的表达,从而抵抗动脉硬化过程中过度自噬.这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一.
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尼古丁对人巨噬细胞胆固醇外流的影响
一般认为动脉壁中巨噬细胞转变为泡沫细胞,从而启动了动脉粥样硬化病变的发生[1].在巨噬细胞内部,肝X受体(liver x receptor,LXR)及LXR诱导的信号是介导其脂代谢的重要分子基础,也是巨噬细胞致动脉粥样硬化的重要环节[2].
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病理诊断读片会正确答案
病理检查巨检:灰白色碎组织一堆6cm×6cm×2cm,部分组织表面可见乳头状突起.镜检:组织学显示滑膜增生,部分区域呈乳头状增生,在增生的滑膜组织中有大量泡沫细胞及多核巨细胞浸润,并有吞噬空泡反应.这些细胞聚集成片,形成集簇.滑膜表层病变为血管增生、充血、水肿及肉芽组织形成.局部区域有黏液变性,少量淋巴细胞浸润,病变中无中性粒细胞浸润.滑膜深层为纤维母细胞和胶原纤维构成的纤维层,部分区域可见纤维组织玻璃样变性的瘢痕.免疫组化:上述泡沫细胞及多核巨细胞CD68标记为强阳性,而CK表达阴性.PAS阳性反应. 病理诊断:黄色肉芽肿性滑膜炎(人工关节置换后反应).
