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复合全谷豆粗杂粮的活性成分及其对胆汁酸代谢的调控
目的 分析比较复合全谷豆粗杂粮中膳食纤维(dietary fiber,DF)、抗性淀粉(resistant starch,RS)、总黄酮和总皂甙等活性成分,了解其对大鼠粪胆汁酸(fecal bile acid,FBA)排出的影响及其调控机制.方法 按国家标准及文献方法测定复合全谷豆粗杂粮中DF、RS、总黄酮和总皂甙的含量.44只SPF级SD大鼠随机分为阴性对照组、高脂模型组、米面组和复合全谷豆粗杂粮组,分别给予相应饲料连续喂养8周.实验开始前和结束后,代谢笼收集大鼠粪便,磷钼酸法测定FBA.RT-PCR法测定大鼠肝脏组织中胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase,CYP7Al) mRNA和肝X受体α(Liver X receptorα,LXRα) mRNA的表达.结果 复合全谷豆粗杂粮中每100g含DF 15.3g、RS 9.03g、总黄酮0.45g和总皂甙0.24g.复合全谷豆粗杂粮组大鼠FBA排出量显著升高(P＜0.05)；CYP7A1 mRNA和LXRα mRNA表达比其他3组显著增加(P＜0.05).结论 复合全谷豆粗杂粮比面粉大米富含UF、RS、黄酮和皂甙等活性物质.可以促使胆汁酸合成经典途径中限速酶CYP7Al和其上游受体LXRα mRNA表达的上调,有效地增加大鼠FBA的排出量,起到改善脂代谢紊乱的作用.
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川芎嗪对泡沫细胞胆固醇逆转运的影响
目的:从胆固醇逆转运角度探讨川芎嗪对ox-LDL诱导泡沫细胞的干预作用.方法:采用体外培养RAW264.7,以20 mg·L-1 ox-LDL诱导其转变成泡沫细胞模型,并用川芎嗪进行干预.通过油红O染色观察细胞内脂质堆积情况和酶比色法定量检测细胞内总胆固醇和胆固醇酯的变化,并用荧光定量PCR和免疫印迹方法检测PPARγ,LxRα,ABCA1 mRNA和蛋白表达.结果:川芎嗪能降低泡沫细胞内总胆固醇和胆固醇酯,抑制脂质积累,并提高PPARγ,LXRα,ABCA1 mRNA和蛋白的表达.结论:川芎嗪通过增加PPARγ,LXRα,ABCA1基因表达,促进胆固醇逆转运.
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花色苷对THP-1细胞中ABCG1表达的影响及机制分析
目的 研究花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(C3G)对人巨噬细胞THP-1中ABCG1表达的影响,并分析相关作用机制.方法 以C3G干预培养诱导分化的THP-1细胞,荧光实时定量RT-PCR检测ATP结合盒式转运蛋白G1(ABCG1)以及其直接调节因子肝脏X受体α(liver X receptotα,LXRα)的mRNA表达,时间分辨荧光共振能量转移(time-resolved fluorescence resonance energy transfer,TR-FRET)方法检测C3G与LXRα配体结合域的结合能力.结果 100μ mol/L C3G处理THP-1细胞16 h显著增加了ABCG1 mRNA的表达(为对照组的1.98倍,P＜0.05);尽管在TR-FRET试验中,C3G并未呈现典型的配体结合曲线,而50 μ mol/L和100μmol/L C3G显著增加了THP-1细胞中LXRαmRNA的表达(分别为对照组的2.21倍和2.83倍,P＜0.05).结论 C3G促进了ABCG1表达,该机制可能通过增加核受体LXRαmRNA表达来实现.
关键词： 矢车菊素-3-0-β-葡萄糖苷 ABCG1 LXRα -
肾阳虚致高脂血症大鼠中FAS蛋白对甘油三酯的调控作用及机制研究
目的:通过肾阳虚制作高脂血症模型,观察右归丸对模型大鼠FAS蛋白及其上游LXRd等因子表达的影响,以探讨肾阳虚对模型大鼠甘油三酯(TG)的影响机制.方法:利用大剂量肌注氢化可的松制作肾阳虚高脂血症大鼠模型,给予右归丸进行干预,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测实验大鼠肝组织FAS蛋白、LXRα和SREBP-lc表达,通过免疫组化检测实验大鼠肝组织FAS蛋白的表达.结果:大剂量肌注氢化可的松成功复制出了肾阳虚高脂血症的模型大鼠,与正常组比较,右归丸组和模型组肾阳虚高脂血症大鼠肝内LXRα、SREBP-lc和FAS蛋白表达增加(P＜0.05),与模型组比较,右归丸组大鼠肝内LXRα、SREBP-lc和FAS蛋白表达减少(P＜0.05);结论:肌注氢化可的松制造的肾阳虚高脂血症模型可能是上调了LXRα、SREBP-1c和FAS的蛋白的表达而影响了血液中TG的代谢,右归丸可能通过抑制LXRα、SREBP-1c和FAS蛋白的表达来降低模型大鼠TG的含量.
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雄激素及其受体在肥胖、肥胖相关疾病及糖脂代谢紊乱中的作用
雄激素在肥胖及肥胖相关疾病如糖尿病、代谢综合征、动脉粥样硬化、高血压、心血管疾病等的发生及肥胖的糖脂代谢紊乱中的作用受到越来越多的关注.雄激素的作用主要通过雄激素受体(androgen receptor,AR)介导,AR属于核受体超家族成员,在骨骼肌、肝脏、脂肪、脑等组织中均有分布和表达.低水平的睾酮和AR功能缺失能促进肥胖及其相关疾病的发生,诱导糖脂代谢的紊乱.睾酮/AR能调控几乎所有与糖脂代谢、肥胖相关疾病发生有关的途径,包括糖脂代谢关键酶和关键蛋白、核转录因子(PPARγ、LXRa、FoxO1)、炎症反应、下丘脑的瘦素敏感性、脂肪细胞的增殖和分化、线粒体功能和血管内皮细胞功能.此外,与男性不同,高水平雄激素的女性可出现肥胖及糖脂代谢的紊乱,其机制还不清楚.本文主要就雄激素和AR在男性肥胖及其相关疾病的发生以及糖脂代谢紊乱中的作用及机制作一综述.
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肝X受体α在胃癌组织中表达的临床意义
[目的]探讨肝X受体α(LXRα)在胃癌组织中表达的临床意义.[方法]收集2011年5月至2014年5月在上海市第五人民医院手术的胃癌组织及癌旁正常组织各65例,利用免疫组化和荧光定量PCR方法检测各组织中LXRα的表达,分析LXRα表达与胃癌临床病理特征的关系.[结果] LXRα蛋白在胃癌组织中表达高于癌旁正常组织(P=0.000);LXRα在超过5cm的胃癌组织中表达高于5cm以下的肿瘤(x2=6.744,P=0.011),有淋巴结转移高于无淋巴结转移(x2=28.765,P=0.000),有远处转移高于无远处转移(x2=5.647,P =0.024),T分期越高表达越高(x2=13.965,P=0.003);LXRα表达与年龄(x2=0.018,p=1.000)、性别(x2=0.492,P=0.728)、肿瘤部位(x2=1.400,P=0.266)及病理分型(x2=0.376,P=0.945)无明显相关.[结论]LXRα蛋白在胃癌组织中表达更高,与胃癌大小、淋巴结转移、远处转移和T分期相关;推测LXRα参与调控胃癌生长转移.
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豚鼠高脂血症模型LDL-C代谢紊乱的机制研究
目的 建立豚鼠高胆固醇血症模型,并对形成机制进行探讨.方法 高脂饲料诱导法建立豚鼠高胆固醇血症模型,分别于造模1、2、4周检测血清脂质的动态变化;检测肝脏脂质;酶联免疫分析法测定血清ox-LDL浓度;实时荧光定量PCR法检测肝脏CYP7A1(cholesterol 7a-hydroxylase A1)、肝脏法尼酯X受体(hepatic farnesoid X receptor,FXR)、肝X受体α(liver X receptor,LXRα)、HMG-CoA还原酶mRNA的相对表达;Western blot法检测肝脏LDL-R的蛋白表达情况.结果 豚鼠经高脂饲料诱导1周后,模型组与对照组比较血清TC、LDL-C即发生升高,随造模时间延长,血脂一直维持在较高水平.造模4周后模型组血清ox-LDL、sd-LDL浓度,肝脏TC水平比正常组升高.肝脏HMG-CoA还原酶表达下调,LDL-R蛋白表达量明显高于正常组.值得注意的是豚鼠肝脏法尼酯X受体(FXR)表达明显上调,且肝X受体α(LXRα)表达也明显上调,但二者激活水平相当,终未改变肝脏CYP7A1mRNA的表达水平.结论 高脂诱导豚鼠形成高胆固醇血症主要与外源性胆固醇和低密度脂蛋白的清除发生障碍有关.
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基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立
目的：建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Re-al-time定量PCR方法比较HEK293、HepG2和LS174T细胞中内源性核受体 PXR、FXR 和 LXRα的表达量,将 pSG5-hPXR 和 pGL3-XREM-CYP3A4、pEGFP-N3-hFXR 和 EcRE-TK-Luc、 pCMX-FLAG-hLXRα和 pGL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果①根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞；②根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,终分别选择1∶1、2∶1和2∶1；③模型中,报告基因活性均与相应阳性药物( PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长；④仅 PXR 激动剂 Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z′值分别为0．58、0．66和0．63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。
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肝X受体LXRα对肝细胞内葡萄糖氧化的调节
目的：肝X受体LXRα参与细胞内多种代谢途径，但在葡萄糖氧化中的作用研究甚少，文章意在探讨LXRα对葡萄糖氧化关键酶的可能调节作用。方法分别采用LXRα化学激活剂T0901317和过表达LXRα质粒处理HepG2肝细胞，观察细胞内能量代谢关键酶PGC1α和葡萄糖氧化关键酶PDK4的改变。结果在5．5 mmol／L和30 mmol／L葡萄糖培养条件下， T0901317均显著下调了PGC1α蛋白质水平，但对其mRNA水平无影响，同时PDK4 mRNA水平显著下降；过表达LXRα质粒与T0901317的作用相似，但在30 mmol／L葡萄糖培养条件下，对PGC1α和PDK4的抑制作用更为明显。结论外源性激活LXRα可以降低肝细胞内PGC1α和PDK4的表达，进而促进细胞的葡萄糖氧化过程。
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姜黄素通过LXRα-ABCA1通路抑制小鼠巨噬细胞脂质聚集
目的:探讨姜黄素(curcumine,CUR)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)所致小鼠巨噬细胞泡沫化过程中脂质聚集的影响及其机制.方法:体外培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分别采用ox-LDL(50 mg/L)和Dil(Dioctadecyl)-ox-LDL(10 mg/L)处理细胞24 h,将细胞培养于含不同浓度CUR (0.1～50.0μmol/L)的培养基,MTT法筛选合适的实验浓度;荧光共聚焦显微镜观察Dil-ox-LDL处理后脂质聚集情况;酶学终点法定量细胞内总胆固醇和游离胆固醇的变化;蛋白免疫印迹法检测细胞LXRα和ABCA1的表达水平.结果:与泡沫化组相比,CUR治疗组脂质聚集显著下降;总胆固醇和游离胆固醇的含量均明显下调;另外CUR可以在蛋白水平上引起LXRα和ABCA1的高表达.结论:CUR具有抑制ox-LDL氧化小鼠巨噬细胞脂质聚集的作用,且该作用可能与其上调LXRα-ABCA1表达从而调节细胞内胆固醇的含量有关.
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小檗碱吴茱萸碱配伍的降脂作用与上调LXRα和PPARγ蛋白表达的研究
目的:探讨小檗碱吴茱萸碱配伍对高脂血症大鼠肝脏LXRα和脂肪PPARγ蛋白表达的影响.方法:将60只大鼠随机分为空白组6只与模型组54只.建立高脂饮食诱导高脂血症大鼠模型,选取造模成功的48只大鼠随机分为8组(每组6只)后药物干预8周,检测各组大鼠的血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平以评价药物作用效果;以Western blot方法检测肝脏LXRα和脂肪PPARγ蛋白的表达.结果:与模型组相比,小檗碱吴茱萸碱配伍能够明显降低高脂血症模型大鼠血清TC、LDL-C水平(P＜0.01),且降脂效果优于小檗碱或吴茱萸碱单用,能够升高血清HDL-C水平(P＜0.05),但其作用弱于吴茱萸碱单用;小檗碱吴茱萸碱配伍能够明显上调模型大鼠肝脏LXRα和脂肪PPARγ的表达,且其作用强于小檗碱或吴茱萸碱单用(P＜0.05).结论:小檗碱吴茱萸碱配伍能够降低高脂饮食诱导的高脂血症大鼠血脂水平,其作用机制与其上调LXRα和PPARγ蛋白的表达有关.
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泽泻汤对巨噬细胞泡沫化脂质沉积及其LXRα和ABCA1表达的影响
目的 以大鼠腹腔巨噬细胞为研究对象,经ox-LDL (50 mg/L)诱导后建立巨噬细胞泡沫化模型,观察泽泻汤对细胞LXRα和ABCA1表达的影响.方法 分别采用ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理大鼠腹腔巨噬细胞24h,同时20％泽泻汤血清干预后,油红O染色和荧光显微镜观察细胞内脂质沉积情况;蛋白免疫印迹检测细胞LXRα和ABCA1的表达情况.结果 ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理巨噬细胞成功建立巨噬细胞泡沫化模型;与空白组的巨噬细胞比较,模型组巨噬细胞内脂质沉积增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞内脂质沉积明显减少.空白组巨噬细胞和模型组巨噬细胞LXRα呈低水平表达,泽泻汤血清干预组细胞LXRα表达明显增加;与空白组比较,模型组巨噬细胞ABCA1表达明显增加,泽泻汤血清干预组巨噬细胞中ABCA1亦呈高表达,但较模型组略低.结论 ox-LDL(50 mg/L)和Dil-ox-LDL(10 mg/L)处理巨噬细胞可以成功建立巨噬细胞泡沫化模型;泽泻汤能改善巨噬细胞泡沫化过程的脂质沉积,可能通过上调LXRα表达来实现的.
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重组慢病毒介导LXRαRNA干扰改善大鼠脂肪肝供肝移植术后的功能
目的：探讨LXRαRNA干扰（RNAi）改善脂肪肝供肝大鼠肝移植术后肝功能的作用及机制。方法50只SD大鼠，给予高脂饲料和56%的酒精喂养，诱导成平均脂变程度大于60%的脂肪肝作为肝移植供体。实验组25只脂肪肝供体大鼠在移植前72 h自门静脉注射7×107 TU LXRα-RNAi的慢病毒混悬液（LXRα-RNAi-LV），对照组25只脂肪肝供体大鼠移植前72 h自门静脉接受阴性对照慢病毒（NC-LV）载体液注射。受体大鼠均接受原位肝移植术。术后检测肝酶学、组织切片、TUNEL、细胞因子、组织蛋白及RT-PCR水平。结果 LXRα-RNAi-LV治疗组与对照组相比较，术后移植肝肝细胞内脂肪酸蓄积明显受到抑制，肝酶学及肝组织损伤相关细胞因子水平明显下降，组织损伤较轻，大鼠平均生存率提高。RT-PCR示实验组LXRαmRNA水平明显低于对照组，Western blotting提示LXRα，SREBP-1c，CD36表达明显低于对照组。结论 LXRα-RNAi-LV基因治疗能明显降低LXRα基因的表达，改善脂肪肝供肝大鼠肝移植术后肝功能、提高生存率。
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依折麦布对饮食性高胆固醇血症大鼠胆固醇吸收及代谢相关靶点的调节作用
目的 探讨依折麦布对饮食性高胆固醇血症大鼠胆固醇吸收及代谢相关靶点的调节作用.方法 雄性SD大鼠,正常组喂食普通饲料,其余组喂食高脂饲料,复制饮食性高胆固醇血症大鼠模型.依折麦布组除喂食高脂饲料外,每天灌胃给药,连续给药4周,测定大鼠血清、粪便、肝脏的总胆固醇,并测定大鼠肝脏CYP7A1、LXRα、小肠NPClL1 mRNA和蛋白的表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清、粪便总胆固醇含量均显著上升(P＜0.01),肝脏总胆固醇含量上升(P＜0.05).与模型组比较,依折麦布组大鼠血清、肝脏总胆固醇含量均显著下降(P＜0.01),粪便总胆固醇含量显著上升(P＜0.01).依折麦布组大鼠肝脏CYP7A1、LXRα、小肠NPC1L1 mRNA和蛋白的表达与模型组、正常组比较均显著下降(P＜0.01).结论 依折麦布能降低饮食性高胆固醇血症大鼠血清和肝脏总胆固醇含量,增加粪便总胆固醇排出,并能抑制肝脏CYP7A1及小肠NPC1L1的表达,其抑制CYP7A1表达可能与下调LXRα有关.
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蒙药"通拉嘎-5"对脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其机制研究
目的 探讨"通拉嘎-5"对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖摄取的影响及其作用机制.方法 将3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞后,"通拉嘎-5"作用于3T3-L1脂肪细胞24 h,用3H标记的2-脱氧-葡萄糖([3H]2-DG)示踪检测胰岛素介导的3T3-L1脂肪细胞摄取葡萄糖的情况;"通拉嘎-5"作用3T3-L1脂肪细胞48 h后,用Real-time PCR检测PPARγ和LXRα的基因表达,用Western blot检测PPARγ和LXRα的蛋白表达.结果 "通拉嘎-5"能促进胰岛素介导的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖摄取(比阴性对照组高1.915倍,P<0.05);能明显上调3T3-L1脂肪细胞和LXRα基因(比阴性对照组高2.895倍,P<0.01)和蛋白(比阴性对照组高1.977倍,P<0.01)表达;而对PPARγ基因和蛋白表达无明显的影响.结论 "通拉嘎-5"可能通过提高3T3-L1脂肪细胞LXRα的基因和蛋白表达,促进胰岛素介导的葡萄糖摄取功能,改善胰岛素抵抗,可能为"通拉嘎-5"治疗非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用机制之一.
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三七总皂苷对泡沫细胞内ABCA1和LXRα mRNA表达的影响
目的 观察三七总皂苷(Panat notoginseng saponins,PNS)对泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达及脂质沉积的影响.方法 提取SD大鼠腹腔巨噬细胞纯化后,与高、中、低剂量PNS(80、40、20μg/ml)及氧化低密度脂蛋白共孵育48 h.油红O染色观察细胞内脂质堆积情况,酶法测定细胞内总胆固醇(TC)、游离胆固醇(FC)、胆固醇酯(CE)的含量,并计算CE/TC值.采用RT-PCR法检测泡沫细胞ABCA1和LXRα mRNA表达情况.结果 模型组细胞中TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著高于对照组(P<0.05);与模型组相比,PNS高、中剂量组细胞内TC、FC、CE含量及CE/TC值均显著降低(P<0.05).PNS高、中剂量组中ABCA1及LXRα mRNA的表达均显著高于模型组(P<0.01).结论 PNS可以上调ABCA1和LXRα mRNA表达并减少巨噬细胞源性泡沫细胞中脂质沉积.
