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026PXR、CAR和PPAR对UGT基因转录的调节
UGT是生物体内重要的Ⅱ相药物代谢酶.孤儿核受体PXR、CAR和PPAR对UGT基因转录起上调作用,它们的分布浓度和活性的差异可导致UGT表达和分布的差异.化合物通过核受体调节UGT的表达可能是影响化合物体内代谢的一条重要途径.研究核受体PXR、CAR、PPAR对Ⅱ相代谢酶UGT的调节作用对于新药设计、指导临床合理用药、预测药物相互作用、减少药物不良反应、预防人类疾病都具有重要意义.
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细胞色素P450 3A4基因多态性及对药物代谢的影响
目的 综述细胞色素P450 3A4的基因多态性,从分子水平探讨药物相互作用机制.方法 依据近年来国内外文献,进行分析、归纳和总结.结果与结论 CYP3A4 DNA基因多态性是导致其功能性表型差异的根本原因,从而阐明临床药物代谢个体差异的机制;CYP3A4可受到多种药物的诱导或抑制,并受某些蛋白受体的调控影响,因此经CYP3A4催化代谢的药物联合使用,特别是CYP3A4抑制剂与底物联合使用时,可能导致严重的药物不良反应.
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阿司匹林联合华法林对HepG2细胞中CYP3A4酶的抑制作用
目的 研究阿司匹林联用华法林对肝药物代谢酶CYP3A4活性的影响及其机制.方法 不同质量浓度的阿司匹林、华法林及联合用药处理HepG2细胞48 h,采用MTT法检测细胞存活率;通过荧光素酶报告基因技术检测各组对PXR转录酶活性和酶CYP3A4活性的影响;采用荧光定量PCR法和Western blotting法检测HepG2细胞的酶CYP3A4的mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组比较,阿司匹林组、联合用药组细胞的孕烷X受体(PXR)转录酶活性、酶CYP3A4活性均显著降低(P<0.01),CYP3A4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01),华法林组均无显著差异.结论 阿司匹林联用华法林能够抑制药物代谢酶CYP3A4活性,其机制可能是通过抑制PXR受体的mRNA和蛋白表达实现的.
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孕烷X受体与炎症反应
转录因子孕烷X受体(Pregnane X receptor,PXR)在经配体活化后可调控一系列外源性物质、内源性物质和一些天然产物的基因表达,同时参与调控糖异生、脂质代谢、胆汁平衡以及炎症反应等生理过程.研究表明,PXR通过调控NF-κB活性、肠道炎症和天然免疫等过程参与炎症反应,这为进一步研究其分子机制奠定基础.
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人参皂苷F1通过激活孕烷X受体诱导CYP3 A4的表达
目的：探索人参皂苷F1( ginsenoside F1)是否通过激活孕烷X受体(PXR)实现对CYP3A4基因表达及酶活性的诱导作用。方法利用本实验室构建的PXR-CYP3A4稳定转染HepG2工程细胞株结合荧光素酶报告基因技术，检测人参皂苷F1对PXR的转录激活效应；用不同浓度的人参皂苷F1处理LS174T细胞，并通过Q-PCR和酶活性试剂盒检测CYP3A4的mRNA表达和酶活性变化。结果不同浓度人参皂苷F1作用于LS174T细胞以后，可以浓度依赖性地诱导CYP3A4 mRNA 水平的表达，并且增强其酶活性；同时， PXR-CYP3A4稳定转染HepG2工程细胞株结合荧光素酶报告基因检测结果亦表明，人参皂苷F1能够浓度依赖性地增强PXR的转录激活效应。结论本研究揭示了人参皂苷F1可诱导CYP3A4的基因表达并增强其酶活性，这一过程可能与人参皂苷F1对孕烷X受体的激活有关。
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中药莪术激活PXR及对大鼠肝细胞色素P450 3A的影响
目的 考察莪术能否通过体外激活PXR调节细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的转录表达及对大鼠肝脏CYP3A在酶活性及mRNA表达的诱导作用.方法 在HepG2细胞中,采用瞬时共转染报告基因实验研究莪术对PXR介导的CYP3A4的转录调节作用;在大鼠体内,采用紫外分光光度法和RT-PCR技术检测莪术对大鼠肝脏CYP450含量及CYP3A同工酶红霉素N-脱甲基酶(ERD)的活性和CYP3A基因mRNA表达的影响.结果 在体外报告基因实验研究中,莪术提取物及其有效成分能不同程度的诱导CYP3A4的表达;在大鼠体内实验中,莪术提取物能够增加CYP450蛋白含量和CYP3A酶活性;在mRNA水平上,莪术提取物能够明显诱导CYP3A1及CYP3A2的基因表达.结论 莪术提取物及其有效成分能够明显激活PXR并诱导CYP3A4的转录表达;莪术提取物对大鼠体内CYP3A的酶活性及mRNA表达均有明显诱导作用.
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基于报告基因检测的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型的建立
目的：建立基于报告基因法的高通量筛选细胞模型,用来发现PXR、FXR和LXRα受体激动剂。方法利用Re-al-time定量PCR方法比较HEK293、HepG2和LS174T细胞中内源性核受体 PXR、FXR 和 LXRα的表达量,将 pSG5-hPXR 和 pGL3-XREM-CYP3A4、pEGFP-N3-hFXR 和 EcRE-TK-Luc、 pCMX-FLAG-hLXRα和 pGL3-XREM-CYP3A4等质粒分别共转染到工具细胞中,优化共转染比例,并考察阳性药与萤光素酶报告基因表达强度的量效关系、模型特异性和稳定性。结果①根据Real-time定量PCR结果,模型选用低表达PXR、FXR和LXRα的HEK293细胞作为工具细胞；②根据不同共转染比例对报告基因活性的结果,PXR、FXR和LXRα报告基因药物筛选模型的报告基因和过表达质粒比例,终分别选择1∶1、2∶1和2∶1；③模型中,报告基因活性均与相应阳性药物( PXR/Rif、FXR/CDCA和LXRα/T0901317)呈剂量依赖性增长；④仅 PXR 激动剂 Rif、FXR激动剂CDCA和LXRα激动剂T0901317可分别明显增加相应筛选模型的报告基因活性,分别重复5次试验后,计算得Z′值分别为0．58、0．66和0．63。结论该研究建立的PXR、FXR和LXRα激动剂高通量筛选模型,具有良好的特异性和稳定性,适用于对PXR、FXR和LXRα受体激动剂的筛选,进而开发以核受体作为药物靶点的药物。
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银杏黄酮对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用
目的 探讨银杏黄酮对CCl4诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其机理.方法 60只ICR小鼠随机分为5组,即空白对照组、模型组和银杏黄酮低、中、高剂量组,采用CCl4腹腔注射和灌胃制作小鼠肝损伤模型.通过检测血液中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性、观察肝脏的解剖学形态和病理切片评估其对小鼠肝脏的保护作用.RT - PCR检测PXR、CYP3A11、CYP3A13和RXRα的表达.结果 与空白对照组相比,模型组小鼠肝脏出现肿胀、色泽暗淡、轮廓萎缩、表面粗糙；血清中ALT和AST活性明显升高.与模型组相比,银杏黄酮组小鼠肝脏肿胀消退、色泽红润、轮廓清晰、表面光滑；血清中ALT和AST活性明显降低,肝组织中PXR、CYP3A11、CYP3A13和RXRα水平显著升高.结论 银杏黄酮对CCl4所致的小鼠肝损伤具有一定的保护作用,且其保护作用呈明显的剂量依赖性.PXR、CYP3A11、CYP3A13和RXRα等基因的激活可能在保护小鼠肝损伤中起到重要作用.
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相关基因多态性与肾移植术后他克莫司个体化用药的关系?
目的：探讨基因多态性与相关临床因素对他克莫司血药浓度的影响，为构建肾移植术后他克莫司的个体化给药模型提供依据。方法采用聚合酶链反应-限制性内切片段长度多态性( PCR-RFLP )方法检测280例肾移植患者CYP3A4?18B(82266G>A)、CYP3A5?3(6986A>G)、MDR11236C>T(rs1128503)、MDR12677G>T/A(rs2032582)及MDR13435C>T(rs1045642)基因型，采用特异性等位基因聚合酶链反应(ASPCR)法对PXR 6碱基缺失(rs3842689)突变进行分型。将各遗传因素和非遗传因素与他克莫司血药浓度/剂量×体质量( C0/D)值进行单因素相关分析，然后通过逐步多元回归分析构建他克莫司剂量预测算法。结果 CYP3A4?18B、CYP3A5?3、MDR11236C>T、MDR12677G>T/A、MDR13435C>T和PXR6碱基缺失等基因位点在肾移植患者中的突变频率分别为29.11％，69.29％，43.57％，49.64％，36.43％和26.07％。多元回归分析发现，CYP3A5?3和红细胞计数与他克莫司C0/D值相关，根据佳回归模型得到他克莫司剂量/体质量( D)预测算法为D＝C0/(－60.445＋95.777×CYP3A5＋34.938×RBC)，该方程能够解释他克莫司剂量个体差异的38.8％。结论影响肾移植术后他克莫司剂量及浓度的主要因素为CYP3A5?3和红细胞计数。患者在使用他克莫司前进行CYP3A5?3基因型的检查，对预测他克莫司用药剂量，提高他克莫司应用的安全性和有效性具有重要意义。
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喹硫平过量时激活核受体PXR介导的药物Ⅰ相代谢酶和Ⅲ相转运体转录促进毒物消除的解毒机制
目的:考察喹硫平(quetiapine,QTP)在常规剂量与中毒剂量下对大鼠肝脏、前额叶皮质与海马中PXR信号通路及下游代谢酶CYP3A4和转运体P-gp表达的影响,并考察药物过量中毒情况下给予PXR激活剂对大鼠PXR、CYP3 A4与P-gp蛋白表达的影响,从而揭示通过激活PXR信号通路促进药物脑与肝内消除的分子机制.方法:SD大鼠随机分为4组,即空白组(Control组)、常规剂量组(Normal组)、QTP中毒未干预组(Toxic组)及QTP中毒DEX干预组(Toxic+Dex组),按分组进行4d处理后,利用Western-blot技术考察不同时间点各组大鼠的肝脏、前额叶皮质与海马中PXR、CYP3A4、P-gp的表达.结果:腹腔注射QTP可增加脑与肝脏内PXR、CYP3A4和P-gp的蛋白表达并呈剂量依赖性;合用地塞米松(dexamethasone,DEX)可加速中毒剂量的QTP对PXR、CYP3A4和P-gp的蛋白表达的诱导作用.结论:长期使用QTP可自我诱导核受体PXR-药物代谢酶CYP3A4/转运体P-gp这一信号通路,合用核受体PXR激动剂可加速该诱导过程.激活PXR信号通路可快速有效激活解毒系统,从而可能达到快速解毒以及保护器官的目的.本实验有助于阐明药物中毒时核受体PXR对代谢酶和转运体的调控特征及分子机制,从而为开辟新的药物中毒救治途径奠定基础,为研究新型解毒药物提供新的思路.
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常见中药组分对孕烷X受体介导的CYP3A4转录调节机制的研究进展
目的:近年来中药在临床上的应用日益广泛,但其成分复杂,易导致药物相互作用和不良反应的发生.细胞色素P-450单氧酶3A4 (CYP3A4)是细胞色素P450 (CYP450)家族成员中一种重要的同工酶,负责体内外很多化合物的氧化代谢,孕烷X受体(PXR)作为CYP3A4的关键转录调节因子,可以调节CYP3A4的活性和表达,CYP3A4的改变被认为是药物发生相互作用和毒性反应的关键,本文将阐述常见中药组分通过PXR介导CYP3A4转录调节的分子机制.
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核受体PXR在宫颈鳞癌组织及SiHa细胞中的表达及临床意义
目的:探讨核受体孕烷X受体(PXR)在宫颈鳞癌组织的表达及与宫颈鳞癌发生的关系.方法:采用免疫组织化学及细胞免疫化学检测核受体PXR在41例宫颈癌组织及宫颈鳞癌细胞株SiHa中的表达.结果:PXR在宫颈鳞癌细胞株SiHa中有表达;正常宫颈组织有PXR表达,41例宫颈鳞癌组织中PXR的阳性率为59.5％,且宫颈癌组织中明显低表达.结论:PXR的表达水平与宫颈癌的发生有一定的相关性,可能成为今后判断宫颈癌预后有价值的标志物.
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别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响及作用机制
目的 研究别旁茶苷对LPS诱导CRL-1790细胞释放炎症因子的影响,初步探讨其作用机制.方法 应用MTT法检测别旁茶苷对细胞活性的影响,以别旁茶苷提前干预细胞后加入LPS诱导细胞发生炎症反应,采用ELISA法检测IL-1、IL-8和TNF-α的分泌,Westem blot法检测NF-κB p65及PXR的蛋白表达水平,RT-PCR法检测代谢酶CYP3A4和CYP1A2的mRNA相对表达水平.结果 10μmol/L、20μmol/L和40 μmol/L的别旁茶苷对细胞活性无显著影响,确定为实验浓度;与正常对照组比较,LPS可显著刺激细胞分泌IL-8,但对IL-1和TNF-α的分泌无显著影响;与LPS诱导组比较,别旁茶苷显著抑制IL-8的分泌和NF-κB p65的蛋白表达水平,显著提高PXR的蛋白表达水平及CYP3A4和CYP1A2的mRNA表达水平.结论 别旁茶苷对CRL-1790细胞具有显著的抗炎作用,其可能机制是通过上调PXR的表达,抑制NF-κB p65的表达从而减少IL-8的分泌,并上调代谢酶CYP3A4、CYP1A2的表达从而保护肠黏膜.
关键词： 别旁茶苷 炎症因子 CRL-1790细胞 PXR NF-κB -
代谢性核受体介导非酒精性脂肪性肝病的研究进展
非酒精性脂肪性肝病在我国是继病毒性肝炎后的第二位常见肝病,近年来随着生活方式的改变和环境污染等问题的广泛存在,非酒精性脂肪性肝病在全球流行并有低龄化的发病趋势,寻找治疗非酒精性脂肪性肝炎的新靶点成为刻不容缓的任务.代谢性核受体PXR、CAR、LXR、FXR、PPAR为核受体家族重要成员,近年来随着对其研究的深入,确定了其在体内脂质代谢、糖异生等方面的重要角色,有望成为治疗非酒精性脂肪性肝病的新靶点.本文对其研究进展进行综述.
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PXR基因的4个位点SNP与汉族人群高脂血症的关联研究
目的:通过研究中国汉族人群PXR基因突变频率较高的SNP位点与高脂血症的关联性,来对汉族人群高脂血症的发生作前瞻性的探讨.方法:以高分辨率熔解曲线法,对162例高脂血症患者和183例健康对照个体rs7643645、rs2461825、rs2472682、rs6785049位点作DNA分型,并进行统计学分析.结果:在显性遗传模式下与野生型比较,rs7643645 TC、CC型P=0.006,优势比(OR) =0.520,95％置信区间(CI)为0.325～0.832;rs6785049AG、AA型P＜0.000 1,OR=2.320,95％CI为1.470～3.662.以当前数据仅在分层分析发现rs2472682的组间差异,未见rs2461825的组间差异.结论:rs7643645突变与高脂血症发病风险的降低相关,rs6785049突变与高脂血症发病风险的增加相关.
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氟西汀对小鼠肝脏Ces1d,Ces1e和CYP3A11抑制作用及机制
目的 探讨氟西汀对小鼠肝脏药物代谢酶(Ces1d,Ces1e和CYP3A11)的作用及机制.方法 雄性C57BL/6N小鼠分为对照组(CON)、氟西汀低剂量组、氟西汀低剂量组和LPS组,分别腹腔注射等容积生理盐水、氟西汀10、20 mg/kg和LPS 2 mg/kg,连续3d.提取肝脏组织蛋白,测定酶活性,Western Blot分析药物代谢酶(Ces1d、Ces1e、CYP3A11)、PXR和Stra13的表达.结果 氟西汀明显降低小鼠肝脏总水解酶活性以及羧酸酯酶(Ces1 d,Ces1e)的表达(P＜0.05、0.01);明显降低小鼠肝脏CYP3A11活性以及氧化酶(CYP3A11)的表达(P＜0.05、0.01);氟西汀能浓度依赖性降低调节药物代谢酶的核受体PXR的表达(P＜0.05、0.01),同时增加转录因子Stra 13的表达(P ＜0.05、0.01).结论 氟西汀降低药物代谢酶(Ces1d、Ces1e、CYP3A11)的表达及活性可能与其降低PXR表达和增加Stra13表达有关.
