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3T3-L1细胞中FoxO1基因沉默对高分子量脂联素表达的影响
目的 观察其受抑制后对二硫键A氧化还原酶样蛋白(disulfide-bond A oxidoreductase-like protein,DsbA-L)和高分子量(high molecular weight,HMW)脂联素表达的影响.方法 利用短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)构建慢病毒载体,沉默3T3-L1细胞的叉头状转录因子Ol(fork head box transcription factor O1,FoxO1)基因,建立携带shRNAFoxO1的慢病毒载体,用qPCR和Western blot 法从基因和蛋白水平筛选出佳干扰效果的shRNA-FoxO1慢病毒载体.在后续实验中利用此FoxOl-shRNA慢病毒载体沉默3T3-L1 FoxO1基因,通过Western blot检测DsbA-L、HMW脂联素的表达.结果 在3T3-L1细胞中筛选出shRNA-1组对oxO1基因的表达的沉默效果佳,抑制率达到60％以上(与对照组相比,基因相对表达量1.04±0.04 vs 0.37±0.05,P＜0.001);在后续实验选用shRNA-1干预3T3-L1细胞,用Western blot检测,并与对照组比较,结果FoxO1蛋白表达显著减少(与GAPDH光密度比值分别是1.02±0.08和0.38±0.08,P＜0.001),而DsbA-L和HMW表达明显增加(DsbA-L与GAPDH光密度比值分别是0.28±0.06和0.53±0.07,P=0.009;HMW脂联素与GAPDH光密度比值分别是0.05±0.02和0.11±0.03,P=0.043).结论 在3T3-L1细胞中,沉默FoxO1基因后可促进DsbA-L和HMW脂联素的表达.
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RNA干扰对脂联素在3T3-L1脂肪细胞中表达的影响
设计合成3对ACRP30编码基因的反向重复序列,分别定向克隆至载体psilencer 1.0的U6启动子下游,构建了相应的shRNAs表达质粒,并证实了这些重组质粒对成熟脂肪细胞中脂联素蛋白的表达有显著的抑制作用.
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TNF-α和吡格列酮对3T3-L1脂肪细胞adiponutrin mRNA表达的影响
目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)和吡格列酮(PIO)对3T3-L1脂肪细胞中,脂肪滋养蛋白(adiponutrin ADPN) mRNA表达的影响及时间效应.方法 用100μmol/L的PIO和100ng/ml的TNF-α处理不同阶段的3T3-L1脂肪细胞,RT-PCR检测ADPN的表达水平. 结果 在分化过程中和分化成熟的3T3-L1细胞中,TNF-α均增加ADPN的表达,PIO则可明显抑制其mRNA的表达.结论 PIO和TNF-α可影响3T3-L1脂肪细胞的ADPN的表达.
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替米沙坦在细胞周期依赖性蛋白激酶5介导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ磷酸化调节脂联素表达中的作用
目的 研究替米沙坦在细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)5介导的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ磷酸化水平上升、调节3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的机制.方法 诱导至转化率达到80%的3T3-L1脂肪细胞以不同浓度肿瘤坏死因子(TNF)-α(10、50、100 ng/ml,分别为T10、T50、T100组)刺激1h,T100组以替米沙坦不同剂量(0.1、5、10 μmol/L,分别为Tel0.1、Tel5、Tel10组)干预24 h后利用Western blotting法检测CDK5、p35蛋白表达水平和PPARγ磷酸化水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测CDK5、p35、PPARγ mRNA表达变化;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测培养基上清脂联素释放变化.构建并包装携带p35基因的逆转录病毒感染3T3-L1细胞,以空载体病毒为对照,同时设置CDK5抑制剂组,检测CDK5、p35/p25、磷酸化PPARγ(pPPARγ)及脂联素表达.实验数据以xˉ± s表示,多组间比较采用单因素方差分析.结果 与未处理组相比,T10、T50、T100组CDK5 mRNA及蛋白相对表达量差异无统计学意义(均P>0.05);T50、T100组p35 mRNA(2.11±0.66、2.71±0.59比1.22±0.35;q=3.77、4.91)及蛋白(0.32±0.02、0.45±0.04比0.09±0.01;q=2.19、4.55)相对表达量显著上升(均P<0.05);各组PPARγ mRNA及蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P>0.05),T50、T100组pPPARγ/PPARγ显著上升(0.21±0.03、0.47±0.04比0.11±0.02;q=3.89、6.91),脂联素释放显著下降(1.56±0.34、1.07±0.12比2.36±0.55;q=6.32、6.99,均P<0.05);替米沙坦干预后,与T100组相比,各组CDK5、p35 mRNA及蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P>0.05);Tel5、Tel10组pPPARγ/PPARγ显著降低(0.11±0.03、0.05±0.01比0.38±0.02;q=4.91、5.22),脂联素释放显著上升(1.71±0.26、1.92±0.17比1.11±0.05;q=5.77、6.43,均P<0.05);过表达p35可检出p25表达,同时显著上调pPPARγ/PPARγ(0.87±0.12比0.07±0.02,q=9.13)并下调脂联素释放(1.39±0.12比2.21±0.33,q=5.67),抑制剂组pPPARγ/PPARγ下降(0.15±0.01比0.87±0.12, q=3.14),脂联素释放上升(1.95±0.24比1.39±0.12,q=4.99),差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 替米沙坦能够抑制CDK5过度激活导致的PPARγ磷酸化,调节3T3-L1脂肪细胞脂联素表达.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体 替米沙坦 周期素依赖蛋白激酶5 P35 3T3-L1 -
诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响
目的 观察不同诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响.方法 参照传统鸡尾酒法,分别在作用时间为2d(A组,传统法),3d(B组)、4d(C组,改良法)条件下诱导分化,采用倒置显微镜观察细胞形态,油红O染色及三酰甘油检测脂肪含量,台盼蓝染色鉴定细胞活力.结果 A组3T3-L1前脂肪细胞转化率在80％以上的样本数(n=12)占该组所有样本数(n=18)的66％,而B、C两组中所有样本(n=18)的3T3-L1前脂肪细胞转化率均在80％以上.油红O染色定量检测结果显示,C组510nm处的OD值为2.59 ±0.17,明显高于A组的2.12±0.47 (F=6.62,P =0.0001)和B组的2.20±0.17 (F=5.15,P=0.0001),A、B两组间差异无统计学意义(F=l.14,P=0.74).C组的三酰甘油含量为(1351.04±119.01)ng/ml,明显高于A组的(1077.88±272.75) ng/ml(F=6.73,P=0.001)和B组的(1089.38±115.39) ng/ml (F=5.78,P=0.001),A、B两组间差异无统计学意义(F=0.27,P=0.64).台盼蓝染色结果显示,A、B、C3组细胞的活力分别为(98.3±1.2)％、(98.5±1.8)％、(98.9土2.1)％,3组间差异无统计学意义(F=0.18,P=0.83).结论 改良法3T3-L1前脂肪细胞诱导法能提高脂肪细胞转化率,可作为高效诱导脂肪细胞模型的方法之一.推荐作用时间为3d的改良法诱导方案.
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梓醇与小檗碱及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的影响
目的 观察梓醇与小檗碱及其配伍对地塞米松诱导的胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗、转运及这一过程中过氧化物体增殖物激活受体(PPAR-γ)mRNA表达的影响.方法 采用地塞米松诱导胰岛素抵抗细胞模型,分别给予罗格列酮、小檗碱、梓醇、梓醇+小檗碱进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,以RT-PCR检测PPAR-γmRNA的表达.结果 含或不含10 nmol/L胰岛素的条件下,梓醇、小檗碱及其配伍组胰岛素抵抗脂肪细胞的葡萄糖消耗量和转运率较模型组明显改善(P＜0.05、0.01),配伍组效应优于梓醇、小檗碱单药组(P＜0.05、0.01);且小檗碱组及配伍组PPAR-γmRNA的表达降低(P＜0.05、0.01).结论 梓醇、小檗碱均能增加葡萄糖消耗和转运,改善胰岛素抵抗,其作用不依赖胰岛素的存在,且小檗碱及两药配伍还能下调脂肪细胞PPAR-γ mRNA的表达水平,提示梓醇、小檗碱改善胰岛素抵抗的作用机制可能与罗格列酮不同.
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梓醇和小檗碱及其配伍对脂肪细胞糖代谢和分化的影响
目的:观察中药提取物梓醇和小檗碱及其配伍对3T3-L1脂肪细胞增殖,葡萄糖代谢及细胞分化的影响,初步探讨药物改善胰岛素抵抗(IR)的可能机制.方法:采用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测3T3-L1前脂肪细胞的增殖；以葡萄糖氧化酶法检测药物干预后培养液中葡萄糖消耗量,并以油红O染色检测细胞分化过程中胞浆脂质的堆积.结果:与对照组比较,小檗碱组使前脂肪细胞MTT值增加29％,而小檗碱加梓醇组、梓醇组均无差异；梓醇、小檗碱及其配伍组分别使成熟脂肪细胞的葡萄糖消耗增加64％、76.5％和98％；小檗碱处理脂肪细胞胞浆脂质堆积明显低于对照组,梓醇组与对照组无差异.结论:小檗碱能促进前脂肪细胞增殖,增加葡萄糖消耗,抑制脂肪细胞分化；梓醇能促进葡萄糖吸收；其作用均不依赖胰岛素的存在.直接增加葡萄糖的吸收可能是这两种药物降低血糖,改善胰岛素抵抗的机制之一.
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游离脂肪酸诱导3T3-L1细胞胰岛素抵抗模型的建立
目的 观察不同种类和浓度游离脂肪酸(FFA)对3T3-L1细胞葡萄糖摄取及胰岛素敏感性的影响,建立FFA诱导的胰岛素抵抗细胞模型.方法 3T3-L1细胞体外诱导分化为脂肪细胞,油红O染色鉴定,不同浓度软脂酸(PA)和油酸(OA)诱导,测定基础状态和胰岛素刺激下葡萄糖特异性转运情况.结果 3T3-L1脂肪细胞诱导率为98%±1.3%,PA和OA各组胰岛素刺激后的葡萄糖特异性转运呈时间和浓度依赖性下降趋势,均显著低于对照组(p＜0.01);0.5mM PA作用24h后基础葡萄糖特异性转运明显低于对照组和PA 0.25mM作用24h组(p＜0.05).结论 3T3-L1细胞在体外可稳定分化为成熟脂肪细胞,经FFA诱导成为胰岛素抵抗细胞模型;随FFA作用时间延长和浓度增加,胰岛素抵抗程度加重,并以时间和浓度依赖性方式抑制3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激后的葡萄糖特异性转运,高浓度时抑制基础状态下的葡萄糖特异性转运.
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牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响
目的:有研究发现,喂食牛磺睃的糖尿病鼠脂肪细胞摄糖的能力增加,但牛磺酸是否能影响脂肪细胞分化,目前还尚不清楚.本实验观察牛磺酸对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,并探讨牛磺酸影响3T3-L1前脂肪细胞分化的机制.方法:实验于2006-07/09在中南大学湘雅三医院实验中心完成.①实验材料:实验中应用的3T3-L1细胞由中国科学院上海细胞库提供.②实验方法:将3T3-L1细胞用含体积分数为0.10胎牛血清的高糖DMEM培养液培养,内含108 u/L青霉素,80×1010U/L链霉素.细胞达汇片后,按5×107L-1密度接种于培养瓶中,应用0.5mmol/L IBMX、0.5mg/L胰岛素和1μmol/L地塞米松诱导分化,实验组加入牛磺酸,对照组未实施牛磺酸干预.油红O染色观察脂肪细胞分化情况.10, 20 mmol/L牛磺酸分别干预C3T3-L1前脂肪细胞24,48 h,抽提实验组和对照组细胞RNA及蛋白.③实验评估:采用RT-PCR及Western-blot方法观察脂肪分化相关基因的表达变化.结果:①10 mmol/L牛磺酸干预后14 d,实验组油红O染色阳性脂肪细胞明显少于对照组.②10,20 mmol/L牛磺酸分别干预3T3-L1前脂肪细胞24.48 h后,对脂肪分化相关基因Insig-2蛋白、PPAR、Insing-2、脂联素、脂联素受体、GLUT-4、AP-2 mRNA表达无明显影响.结论:牛磺酸可抑制前脂肪细胞分化,但具体机制还需要进一步研究.
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SIK2抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪合成的效应及机制
目的 探讨盐诱导基因(Salt Inducible Kinase 2,SIK2)对3T3-L1成熟脂肪细胞生脂的影响及其机制.方法 利用小鼠SIK2重组腺病毒表达载体,转染3T3-L1成熟脂肪细胞,采用油红O染色提取法和 RT-PCR,测定脂肪细胞生脂及其关键酶和转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1) mRNA水平的变化.结果 与未转染组和空载体转染组相比,SIK2转染组油红O染色提取的脂滴含量降低56%(P<0.05),脂肪合成相关酶乙酰辅酶A羧化酶(ACC2)、脂肪酸合酶(FAS)、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1(SCD-1)、甘油-3-磷酸转酰酶(GPAT)、二酰基甘油转酰酶1(DGAT1) 的mRNA表达水平分别下降了31%、61%、57%、60%、52%(P<0.05),转录因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1) mRNA的表达水平减少了28%(P<0.05).结论 SIK2可抑制3T3-L1脂肪细胞脂肪合成代谢,其机制可能与下调甘油三脂合成代谢关键酶及转录因子SREBP1的基因表达有关.
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RNA 干扰血管紧张素原基因表达对前脂肪细胞3T3-L1分化的影响
目的：构建靶向血管紧张素原（AGT）基因的 RNA 干扰质粒，研究 AGT 基因对鼠前脂肪3T3-L1分化的影响。方法：设计靶向 AGT 的小分子 RNA 干扰片段（AGT-shRNA），以未靶向任何 DNA 的小分子RNA （Non-shRNA）为对照，利用载体 psiRNA-U6.1／Neo 构建重组表达质粒，转染鼠前脂肪细胞3T3-L1并筛选到稳定转染细胞株，RT-PCR 和 SDS-PAGE 法分别检测 AGT 基因沉默效果，通过显微镜观察和脂肪细胞分化标志物检测来确定 AGT 基因干扰对3T3-L1细胞分化的影响。结果：成功构建 AGT 干扰质粒，与对照组比较， AGT 基因转录水平受到显著抑制（P ＜0.05），AGT 蛋白表达水平也仅为对照的43.86％。AGT 基因干扰后3T3-L1细胞脂质水平和甘油-3-磷酸脱氢酶（GPDH）活性仍随分化时间延长呈上升趋势，但增长量明显低于对照组（P ＜0.05）。结论：RNA 干扰 AGT 基因可明显抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化，提示脂肪组织中的肾素-血管紧张素系统（RAS）与脂肪代谢有重要关联。
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硫化氢对脂肪细胞前体增殖的影响
目的:探讨硫化氢对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响.方法:培养3T3-L1前脂肪细胞,分为对照组、低剂量组和高剂量组(硫化氢浓度分别为0、10、25、50和100μmol/L),采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测硫化氢对3T3-L1前脂肪细胞活性的影响;用BRDU法检测细胞的增殖;结果:与对照组相比,H2S在较高浓度时,对细胞有一定的毒性作用(P<0.05).结论:硫化氢抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖.
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丹参对3T3-L1细胞成脂分化与增殖的影响
目的 观察丹参对3T3-L1细胞成脂分化和增殖的影响,为丹参应用于自体脂肪移植提供实验依据.方法 将含有不同终浓度丹参注射液的完全培养液(0.6 g/L、0.3 g/L、0.15 g/L、0.075 g/L、0.04 g/L、0.02 g/L)分别加入诱导分化的3T3-L1细胞,待细胞分化至成熟脂肪细胞时,利用CCK-8法检测细胞增殖活力;利用油红O染色法、Image-pro plus 6.0软件观察脂肪细胞内脂质的聚积;利用甘油三酯GPO-POD法测定脂肪细胞的脂质含量.结果 丹参可促进3T3-L1细胞增殖,且呈一定的时间、剂量依赖关系:加药时间点越早,对3T3-L1细胞增殖的促进作用越大;丹参浓度越大,对3T3-L1细胞增殖的促进作用越大.丹参同时也促进了3T3-L1细胞的成脂分化,增加细胞内脂质的聚积,并呈一定的剂量依赖关系.结论 丹参能够促进3T3-L1细胞的成脂分化以及增殖,使成熟脂肪细胞的数量增加.
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11β-羟化类固醇脱氢酶1促进3T3-L1前脂肪细胞分化
目的:应用3T3-L1细胞模型研究11β-羟化类固醇脱氢酶1(11β-HSD1)与前脂肪细胞分化的关系,探讨11β-HSD1在前脂肪细胞分化及肥胖中的作用.方法:构建11β-HSD1-SiRNA表达质粒pGCsi1encerTMH1/TetO1-11β-HSD1并稳定转染3T3-L1细胞,采用油红染色观察脂滴堆积情况,采用Western blot方法检测11β-HSD1在正常3T3-L1细胞分化过程中的表达;并用Real-time PCR检测脂肪细胞分化相关标志基因的变化,阐明11β-HSD1对前脂肪细胞成脂分化的影响.结果:正常3T3-L1前脂肪细胞在上述三联诱导分化后脂滴堆积随着分化过程逐渐增加;在pGCsilencerTMH1/TetO1-11β-HSD1转染的3T3-L1诱导分化过程中可见脂滴堆积的减少.在3T3-L1前脂肪细胞分化模型中(days 0,2,4,6,8),11β-HSD1蛋白水平是上调的.3T3-L1前脂肪细胞分化模型中GR在分化模型早期(D4及D6)是上调的,但是在分化后期(D8)很快又下降.在正常3T3-L1前脂肪细胞分化早期LPL上调,随着分化后期FAS、PPARγ等明显上升,Pref-1作为脂肪细胞分化抑制因子,在分化早期升高,在分化后期明显下调.在pGCsilencerTM H1/TetO1-11β-HSD1转染后的3T3-L1细胞分化模型中上述有关标志基因发生变化.结论:11β-HSD1作为受体前调节剂促进前脂肪细胞分化,与肥胖和胰岛素抵抗相关.
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不同葡萄糖浓度对3T3-L1细胞脂联素mRNA表达的影响
目的探讨不同葡萄糖浓度对3T3-L1细胞脂联素mRNA表达的影响.方法以β-actin为内对照,用半定量RT-PCR法检测不同浓度葡萄糖培养下3T3-L1细胞脂联素mRNA表达.结果培养液中的葡萄糖浓度在5.5～25.0mmol/L范围中,脂联素mRNA表达改变均无统计学意义(均P＞0.05).结论培养液中的短时间葡萄糖浓度变化不是影响3T3-L1细胞脂联素mRNA表达的主要因素.
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体外胰岛素抵抗细胞模型的建立及在药物筛选中的应用
目的 在体外建立肝胰岛素抵抗细胞模型和脂肪细胞胰岛素抵抗模型,并初步应用于中药有效成分的胰岛素抵抗活性筛选中.方法 采用高胰岛素诱发HepG2细胞建立肝胰岛素抵抗模型,地塞米松诱发3T3-L1脂肪细胞建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型,研究不同药物对胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗的影响.结果 将HepG2细胞置于10-6 mol·L-1的胰岛素中36 h,HepG2细胞对胰岛素的抵抗作用为明显,该特性可维持48 h,但未发现细胞形态学变化;地塞米松作用3T3-L1脂肪细胞后,96 h空白组与模型组葡萄糖消耗量差值大,此时为胰岛素抵抗的高状态;脂肪细胞胰岛素抵抗模型成立后,撤掉地塞米松,胰岛素抵抗细胞模型能够在24 h内稳定.某些中药提取成分(如水苏糖、小檗碱和人参皂苷等)能促进HepG2胰岛素抵抗模型和3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗.结论 高胰岛素诱导培养法可以复制出稳定可靠的肝胰岛素抵抗细胞模型;地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞也可建立稳定的脂肪细胞胰岛素抵抗模型.
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高糖高脂肪酸环境下维生素D对分化后前脂肪细胞脂肪合成的影响
目的 探讨在高糖、高脂肪酸环境下维生素D的活性形式1,25(OH)2 D3(VD3)对分化后前脂肪细胞脂肪合成的影响.方法 将前脂肪细胞3T3-L1细胞分为对照组(C组)、高糖组(G组)和高糖高脂肪酸组(GF组)后进行诱导分化,观察加入VD3后终成熟脂肪细胞中脂肪含量的改变,采用油红O染色和异丙醇萃取法半定量检测细胞内脂肪含量；用RT-PCR法检测各组细胞维生素D受体(VDR)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)和激素敏感脂肪酶(HSL) mRNA的表达水平.结果 与C组比较,G组和GF组脂肪细胞内脂肪含量明显增高(P＜0.05),VD3可减少C组脂肪含量(P＜0.05),但是对G组和GF组脂肪含量无影响(P＞0.05).与C组比较,G组和GF组VDR mRNA表达降低(P＜0.05),VD3可提高三组细胞VDR mRNA的表达(P＜0.05).与C组比较,G组和GF组的SREBP-1c、HSL mRNA表达升高(P＜0.05)；VD3减少C组SREBP-1c mRNA水平,对G组和GF组的SREBP-1c、HSL以及C组的HSL mRNA无影响(P＞0.05).结论 在高糖、高脂肪酸的环境下,VD3已失去对前脂肪细胞脂肪合成的抑制作用.
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米黄色脂肪细胞诱导分化方法研究
目的 建立米黄色脂肪细胞分化的方法并进行分析.方法 通过诱导物刺激使脂肪前体细胞3T3-L1向米黄色脂肪细胞分化.细胞分化完成后经油红染色检测胞内脂滴的形成,经荧光定量PCR和Western blot检测米黄色脂肪细胞标志性蛋白Pparγ,Prdm16和Ucp1的表达,确定分化成熟的细胞是米黄色脂肪细胞.经转录测序分析脂肪前体细胞和米黄色脂肪细胞差异表达基因及KEGG pathway富集情况.结果 采用本研究中的诱导分化方法得到的分化细胞油红染色阳性,米黄色脂肪细胞标志性蛋白Pparγ、Prdm16、Ucp1均高表达,转录测序显示分化后细胞与未分化细胞基因表达差异较大.结论 本研究建立的米黄色脂肪细胞分化的方法准确可靠,可用于米黄色脂肪细胞形成调控机制等研究.
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紫苏叶提取物对3T3-L1脂肪细胞的影响
目的 探讨紫苏叶提取物(Perillae folium extract,PFE)对3T3-L1脂肪细胞的影响.方法 将3T3-L1脂肪细胞培养在不同浓度的PFE(100,250和500μg/ml)中,通过MTS法测定PFE的无毒性细胞浓度,通过Western blot法测定过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的蛋白表达水平变化,通过RT-PCR法测定PPAR-γ、C/EBPα、固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP-1c),硬脂酰辅酶脱氢酶1(SCD1),脂肪酸合成酶(FAS),甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)和肉碱棕榈酰转移酶1(CPT1)等基因的mRNA表达水平变化.结果 通过MTS法得出PFE的无毒性细胞浓度.在Western blot实验中,PPAR-γ和C/EBPα蛋白量的表达随着PFE浓度的升高而减少.在RT-PCR结果中,PPAR-γ、C/EBPα、SREBP-1c和GPAT等基因的表达随着PFE浓度的升高而减少,SCD1和FAS的基因表达水平也降低,CPT1基因的表达水平是随着PFE的浓度而逐渐增加的.此结果说明PPAR-γ和C/EBPα的基因和蛋白表达是受到抑制的.结论 PFE是通过抑制PPARγ、C/EBPα和SREBP1及其靶基因的表达影响脂肪细胞的生成及形成,调节脂肪组织脂质代谢,对以后研究肥胖症具有一定的参考意义.
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小檗碱与梓醇及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞Glut-4、IRS-1、IRS-1 Ser307磷酸化蛋白表达的影响
目的: 观察梓醇与小檗碱及其配伍对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗及这一过程中葡萄糖转运子-4(Glut-4)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)和胰岛素受体底物-1丝氨酸307(IRS-1 Ser307)磷酸化蛋白表达的影响.方法: 采用高糖联合高胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,分别给予小檗碱、梓醇、小檗碱+梓醇、盐酸罗格列酮进行干预,以葡萄糖氧化酶法检测培养液中葡萄糖消耗量,以Western Blot法检测蛋白的表达.结果: 与模型组相比,小檗碱能增加培养液中葡萄糖的消耗(P
